猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定及VP2基因的遗传变异分析

为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,分离鉴定到1株FPV,命名为FPVBJ-CP/2022株。对决定病毒宿主范围和抗原性的VP2基因系统进化树分析表明,分离株与FPVJF-3株、FPVBeijing-01/2018聚为一支,与FPV疫苗株、CPV群亲缘关系较远。VP2蛋白主要功能位点分析结果显示,VP2蛋白中决定病毒抗原性和宿主嗜性的10个关键位点氨基酸均未发生突变,但该分离株的VP2蛋白序列与GenBank其他FPV毒株的VP2蛋白相比,91位氨基酸由丙氨酸(A)突变为丝氨酸(S),505位氨基酸由天冬酰胺(N)突变为天冬氨酸(D),该突变是否对FPVBJ-CP/2022株VP2蛋白的功能和生物学特性造成改变,有待于进一步研究。论文通过对毒株的遗传变异分析,为更好地预防和控制FPV感染提供了研究基础。

北京地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析

猫泛白细胞减少症病毒(FPV)对猫科动物危害较大,病毒VP2基因在决定其抗原性和宿主范围中起重要作用。为了解FPV的流行状况及其VP2基因遗传变异和进化方向,本研究对北京地区宠物医院疑似感染FPV的猫采样,共采集到16份粪便样品;对FPV VP2基因进行PCR扩增和测序,得到12条长度1755 bp的VP2序列;利用软件将获得的VP2基因序列与国内外报道的流行株进行同源性比对、遗传进化分析,结果显示,12条VP2序列均属于G1基因群,与参考株M38246相比亲缘关系较远。本研究为北京地区猫泛白细胞减少症的有效防控提供理论依据。

1株黑天鹅源H5N8亚型禽流感病毒遗传演化分析

为分析1株黑天鹅源H5N8亚型禽流感病毒(AIV)的遗传演化特征,对2021年从北京圆明园遗址公园送检的黑天鹅样品中鉴定出的1株H5N8亚型禽流感病毒(A/Wild swan/China/Beijing0201/2021)的全基因组进行扩增、克隆与序列测序,并应用分子生物学软件对其进行遗传演化及关键氨基酸位点分析。结果显示,该H5N8亚型禽流感病毒株属于clade2.3.4.4b进化分支,其PB2、PB1、PA、HA、NA、NP、MP、NS基因均与H5N8亚型AIV的相应基因片段具有较高同源性,且与2020-2021年越南、哈萨克斯坦、俄罗斯、柬埔寨、法国等地的H5N8毒株密切相关。氨基酸位点分析显示,该毒株HA蛋白裂解位点呈现高致病性禽流感病毒的分子特征,且出现S137A、T160A、T192I、S227R氨基酸突变,158位缺失糖基化位点,这些位点的突变均能够增强H5亚型禽流感病毒对人源唾液酸受体结合的能力;该毒株的PB2蛋白、NP蛋白、M1蛋白和NS1蛋白均存在多个可以增强流感病毒在哺乳动物体内的复制能力和致病性的关键氨基酸位点。研究结果可为H5N8亚型禽流感病毒的进化规律研究及综合防控提供参考。

基于C/S架构的高校座位管理系统

为了实现高校座位的统一智能化管理,并满足不同区域座位的规则独立设定需求,开发了一套基于薄膜压力传感器检测和C/S架构、符合Android MVP设计思维的高校座位管理系统.分析了高校座位管理的需求,基于用户友好和界面友善原则,对系统的功能模块、数据流向和系统架构进行了详细分析和设计.系统包括C/S三层架构,基于Android MVP模式进行分层开发,实现了数据的映射、访问和持久化,并通过用户端APP以及检测终端的设计和调试,实现了座位使用情况的可靠检测和数据的信息化综合管理,提高了座位管理及使用效率,对解决高校座位管理难题,以及校园管理的信息化具有积极意义.

气调包装保鲜技术对猪肉冷藏保鲜效果的影响

【目的】研究经气调包装的鲜猪肉在0~4℃冷藏条件下的保鲜效果。【方法】以新鲜猪肉为对象,采用空气及含不同比例气体(O2、CO2、N2)的充气包装鲜猪肉,通过检测肉品中菌落总数、大肠菌群最近似数及致病微生物、肉品总挥发性盐基氮含量及pH值,对不同包装肉品在冷藏条件下的肉品品质进行评价。【结果】经气调包装的肉品在冷藏过程中菌落总数、大肠菌群数量增加缓慢,沙门氏菌出现较晚,挥发性盐基氮和pH在新鲜肉的标准范围内,其中70%O2+25%CO2+5%N2的气调包装保存鲜猪肉的综合评价效果最好,保质期可达10d。【结论】市售肉品采用气调包装可延长鲜肉制品的保存期。

绿豆种质资源的收集与鉴定

为了丰富榆林地区的绿豆资源,以48份绿豆资源为材料,通过调查9个农艺性状,基于变异系数分析、相关性分析、因子分析、数学模型构建和聚类分析,对48份绿豆资源进行综合评价。结果表明,9个农艺性状中,单株荚数和单株粒质量的变异系数较高,多样性较大;各农艺性状的相关性不同,株高与生育期呈极显著正相关、与百粒质量呈正相关,单株荚数与百粒质量呈极显著负相关、与单株粒质量呈极显著正相关,荚长与百粒质量呈极显著正相关,荚粒数与单株粒质量呈显著正相关。9个农艺性状归纳为6个主效因子,6个因子的累计贡献率>90%,涉及性状有产量、籽粒大小、抗倒伏性、株高、株型和豆荚饱满度,能代表绿豆资源的主要经济性状,其可作为评价绿豆资源优劣的指标;综合打分结果可知,48份绿豆资源中YYLD22和YYLD17得分优于当地主栽品种,引种具有较高的适应性;聚类分析结果可知,48份绿豆资源可大致分为4类,4个类群中分别包含19、17、11、1份资源,不同资源类群农艺性状的典型特征比较明显。研究结果可为榆林的绿豆育种奠定材料和理论基础。

金纳米颗粒和多壁碳纳米管协同增敏的维生素C传感器的研制与应用

【目的】开发一种低成本、高响应的维生素C电化学传感器,用于实现果蔬中维生素C含量的快速检测。【方法】通过在铅笔芯电极上修饰金纳米颗粒和多壁碳纳米管,构建具有维生素C强催化响应的MWCNTs/Au/PGE电极。通过扫描电镜、X射线光电子能谱、拉曼光谱和循环伏安法表征电极,采用差分脉冲伏安法确定电极的pH适用范围和最优pH条件。采用时间电流法建立标准曲线和方程,以实现快速检测。最后通过加标回收率法检测番茄中维生素C含量。【结果】基于MWCNTs/Au/PGE电极的维生素C电化学传感器可在pH 4~8范围内准确地测定维生素C含量,在pH 5时性能最优。快速检测时检测维生素C的质量分数范围为1~500μg/g,灵敏度达0.244μA·(μg/g)^(−1)·cm^(-2)。该传感器对葡萄糖、苹果酸和柠檬酸的干扰率均小于1.77%,同一传感器多次测定的相对标准偏差为2.7%。成功检出番茄样品中的维生素C质量分数为69.42μg/g,加标回收率为109%~113%,相对标准偏差小于2.26%。【结论】MWCNTs/Au/PGE电极制备工艺简单,成本低,灵敏度高,测量范围宽,有较强的稳定性和抗干扰性,为实现快速检测果蔬中维生素C提供了新思路。

基于OpenMV的智能搬运车型机器人的设计

基于OpenMV机器视觉模块、Arduino开发板,以智能循迹小车为载体、机械臂为抓取机构,通过颜色识别算法、速度及调节的PID算法,提供了两种移动方案,为完成对应的识别搬运功能,实现系统的工作流程,提供可行的、易于实践的图像识别的车型机器人的设计方案。

1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其耐药性和毒力分析

本试验旨在鉴定临床疑似沙门氏菌感染致死信鸽的病原菌并确定致病菌的耐药及毒力状况。通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、16S rRNA基因测序分析和康复信鸽血清平板凝集试验进行鉴定,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测进行耐药性和毒力分析。结果显示,分离纯化的细菌在BS、XLD、HE培养基上为黑色菌落,镜检为无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌;分离菌株生化反应结果符合沙门氏菌生化特性;分离菌株血清型为1,4,12:i:1,2;分离菌株16S rRNA基因序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鼠伤寒沙门氏菌聚为一支,同源性>99%,康复信鸽血清与分离菌株发生特异性凝集,结合生化反应和血清分型结果该菌株鉴定为鼠伤寒沙门氏菌;分离菌株对氟苯尼考耐药,经耐药基因检测携带floR、cmlA氯霉素类耐药基因,与耐药表型相符;分离菌株mogA等17种毒力基因检测均为阳性。本试验成功分离到1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌,分离菌株对氟苯尼考耐药且具有较强毒力,为下一步信鸽沙门氏菌的防治和研究提供了参考依据。

2019年-2020年北京市部分地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查分析

为了解北京市种猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行病学及遗传变异情况,采用荧光PCR方法对2019年-2020年采集自北京市4个区的种猪场7030份抗凝血进行了PCV2病原学检测,并对9份PCV2阳性样本进行了全基因组扩增、克隆与序列测定,应用DNAStar分析软件对所测定的9个毒株与国内外参考毒株的全基因组和ORF2序列进行了分析比对。结果表明,PCV2感染的总阳性率为21.41%,2019年-2020年阳性率分别为17.58%和23.78%,呈逐年上升趋势;共测得9株PCV2全基因组序列,其中2株基因组全长为1766 bp,6株为1767 bp,1株为1768 bp;9个PCV2毒株之间全基因组序列的核苷酸同源性为94.0%~99.9%,与已发表的国内外参考毒株之间的核苷酸同源性为90.4%~99.4%;9个PCV2分属于PCV2a、PCV2b和PCV2d 3个基因亚型,其中有3株属于PCV2a亚型,5株属于PCV2b亚型,1株属于PCV2d亚型;9个PCV2毒株ORF2编码的Cap蛋白共存在36处氨基酸变异位点,每个PCV2亚型都有其特异的氨基酸变异位点。说明PCV2在北京市的种猪群中具有较高的感染率,以PCV2a、PCV2b和PCV2d这3个基因亚型共存为主,PCV2a和PCV2b为优势基因型。

1例猪金黄色葡萄球菌与猪圆环病毒2型和3型混合感染的诊断

2020年6月份,北京某猪场断奶仔猪消瘦、腹泻、皮肤发绀,继而病死,为分析该猪场仔猪死亡原因,对送检仔猪进行了临床剖检,通过细菌分离培养、形态观察、染色镜检、生化鉴定和16S rRNA基因测序对分离菌株进行分析鉴定,并进行了分离菌株的药敏试验;同时对采集的病料进行高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型5种病毒的荧光定量PCR检测。结果表明:4头病死仔猪猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型均为阳性,高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒均为阴性;病变组织分离到的菌株在营养琼脂培养基上呈金黄色、圆形、湿润的菌落,在血琼脂培养基上呈灰白色、大而凸起、圆形、不透明、表面光滑且周围有溶血圈的菌落,革兰氏染色镜检可见分离菌呈蓝紫色短链状球菌,生化鉴定为金黄色葡萄球菌,置信度为99%;菌株16S rRNA测序结果与金黄色葡萄球菌核苷酸相似性为100%;分离菌株对庆大霉素敏感,对卡那霉素、新霉素、头孢噻肟中度敏感。说明病死仔猪混合感染了金黄色葡萄球菌与猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型,药敏试验结果可指导该猪场进行用药方案的制订。

牛角地黄汤对金黄色葡萄球菌耐药性的影响及转录组学分析

【目的】探讨耐药金黄色葡萄菌(MRSA)在牛角地黄汤作用下对甲氧西林敏感性的影响。【方法】采用微量稀释法检测金黄色葡萄球菌在牛角地黄汤作用下对苯唑西林钠耐受的影响,用基因转录组学分析牛角地黄汤对金黄色葡萄球菌基因转录的变化,用PCR进行验证。【结果】牛角地黄汤与苯唑西林联用能提高金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性,牛角地黄汤可抑制耐药相关基因femB、细胞壁合成的相关基因glmU和murG的转录,但对青霉素结合蛋白B(pbpB)及其受体(pbpBR)基因的转录无显著影响。【结论】牛角地黄汤可提高耐甲氧西林金葡菌对苯唑西林的敏感性。

山羊痘病毒属病毒荧光LAMP检测方法的建立与应用

旨在建立一种荧光LAMP快速检测方法用于检测羊痘病毒属病毒(CaPV)。根据羊痘病毒属病毒ORF068基因高度保守区域,设计特异性引物,优化反应温度、反应时间,进行特异性及灵敏度验证,建立了一种基于SYTO9荧光染料的CaPV荧光LAMP快速检测方法。结果表明,在60℃下扩增40 min为最适反应条件,最低检测限为3 copies/μL,与小反刍兽疫病毒、羊口疮病毒、牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫病毒均无交叉反应,变异系数低于5%。选取36份模拟样品,采用该方法和实时荧光PCR方法一起对其进行检测,均检出阳性26份,其结果符合率为100%。本研究所建立的CaPV荧光LAMP检测方法灵敏度高、特异性好、操作简便,40 min内即判定结果,可用于临床CaPV感染的快速诊断,为开展相关疾病流行病学研究提供了技术支持,具有较好的应用前景。

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR定量检测试剂盒测量不确定度研究

为填补测量不确定度在兽医领域病原学检测的空白,建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒测量不确定度评估模型,对市售的3种美洲型PRRSV实时荧光RT-PCR检测试剂盒进行了测量不确定度评估,评估了移液器、温度、重复性测量因素对试验结果产生的不确定度影响。研究数据表明:移液器与重复性测量对试验结果产生的不确定度影响较大,应予以重视,需规范操作;建立的3种试剂盒测量不确定度模型缩小了试剂盒对可疑样品的判定区域,对样品临界参考值的检测结果判定具有实际意义。通过比对4个厂家的核酸提取试剂,筛选出了提取效率最高的试剂盒。本研究建立的PRRSV实时荧光RT-PCR定量检测试剂盒测量不确定度模型为兽医实验室检测结果不确定度评估及应用奠定了基础。

非洲猪瘟病毒实时荧光LAMP检测方法的建立与应用

为建立一种快速简便、灵敏度高、准确性好的非洲猪瘟病毒恒温快速检测方法,根据ASFV P72基因保守区域设计特异性引物,优化引物浓度、反应温度、反应时间,建立了一种基于SYTO9荧光染料的非洲猪瘟病毒实时荧光LAMP快速检测方法。结果表明,该方法在63℃条件下扩增40 min,该方法灵敏度高,最低可检测限为10 copies/μL;特异性良好,与猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒、欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应;重复性好,变异系数低于5%。对70份临床样本检测,4份血液样品和9份脾脏样品检测阳性,与荧光定量PCR检测结果符合率为100%。该方法灵敏度高、特异性强、重复性好、符合率高,适用于非洲猪瘟现场快速诊断。

猪流行性腹泻病毒RT-LAMP检测方法的建立与应用

为建立一种适用于现场快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因编码区序列,分别设计合成3组引物,通过对引物的筛选和反应条件优化,建立了PEDV RT-LAMP可视化快速检测方法。灵敏度和特异性试验结果显示,本方法在65℃45 min对PEDV的检测灵敏度为2 copies/μL,与猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应。利用该方法对30份送检的临床样品进行检测,检出阳性样品8份,与荧光定量RT-PCR检测结果一致。试验表明,所建立的RT-LAMP检测方法具有特异性好、灵敏度高、快速、结果可视、设备适用范围广等优点,适用于PEDV现场快速检测。

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP可视化快速检测方法的建立与应用

为建立一种快速诊断美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(NA-PRRSV)的可视化检测方法,根据GenBank已发表的美洲型PRRSV经典病毒株JXA1序列,运用在线生物软件设计合成并筛选出1组引物,通过反应体系优化,建立了NA-PRRSV RT-LAMP可视化快速检测方法,并验证了该方法的特异性、敏感性,同时开展了初步临床应用。结果显示:该方法具有良好的特异性和较高的灵敏度,可检测病毒RNA模板的最低浓度为10 copies/μL;应用该方法检测30份临床样品,结果与实时荧光RT-PCR方法符合率为100%,进一步证实了该方法的可行性。结果表明,所建立的RT-LAMP检测方法具有特异性好、灵敏度高、快速、可视等优点,适用于NA-PRRSV的现场快速检测。本研究为NA-PRRSV的快速、准确鉴别提供了有效手段。

牛角地黄汤对金葡菌外毒素分泌的影响及调控作用

牛角地黄汤是用于清热解毒、凉血化瘀的基础方剂,由水牛角、地黄、赤芍、丹皮等主要成分组成。【目的】本研究旨在探讨牛角地黄汤对金黄色葡萄球菌外毒素分泌的影响。【方法】将亚抑菌剂量的牛角地黄汤水煎液与金黄色葡萄球菌共同培养,用Western blotting检测培养液上清中外毒素蛋白的表达,用RT-q-PCR法检测细菌相关基因mRNA表达水平。【结果】牛角地黄汤水煎液在40.0mg/mL以上剂量对金黄色葡萄球菌的增殖有明显抑制作用。亚抑菌剂量的牛角地黄汤水煎液能抑制金葡菌毒素蛋白HLα、SEA、SPA的转录和蛋白分泌。同时抑制金葡菌agr系统和SarA调控系统相关基因的表达。【结论】牛角地黄汤在亚抑菌剂量下能抑制金葡菌毒力因子的转录和蛋白表达。其作用机制可能与牛角地黄汤剂抑制金葡菌agr二元调控系统及SarA蛋白家族中毒素相关的调控子转录表达有关。

非生物胁迫下白桦ERF基因的表达及生物信息学分析

本研究对3个白桦AP2/ERF家族基因进行了生物信息学分析,并研究了盐和干旱胁迫下白桦ERF基因的表达模式。结果表明,bERF1和bERF2蛋白定位在细胞核内,而bERF3蛋白则定位在叶绿体上;三个基因都含有磷酸化位点;bERF1、bERF2和bERF3基因都属于ERF家族的ERF亚家族,bERF1和bERF2属于B-1组,与拟南芥的AT1G28360.1同源性最高,B-1组的拟南芥ERF基因都属于转录抑制子,说明bERF1和bERF2基因可能具有转录抑制作用;bERF3属于B-5组,与拟南芥的AT4G11140.1同源性最高。3个ERF基因都可以响应盐和干旱胁迫,并且在不同组织中表达量存在差异。

非洲猪瘟病毒LAMP可视化快速检测方法的建立与应用

旨在建立一种适用于现场快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的可视化环介导等温扩增(LAMP)方法。采用针对非洲猪瘟病毒的p72基因编码区序列,设计合成2组引物,对引物进行筛选和反应条件优化,确定敏感性与特异性,并与荧光定量PCR方法进行比较。结果:建立的LAMP方法在63℃50 min内对ASFV的检测灵敏度为10 copies/μL,与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)均无交叉反应;利用该方法对300份送检的临床样品进行检测,检出阳性样品8份,与荧光定量PCR检测结果一致。综上表明,本研究建立的方法具有特异性好、灵敏度高、快速、结果可视、设备适用范围广等优点,适用于ASFV现场快速检测。