CDC25C表达下调的黑色素瘤细胞线粒体应激反应和线粒体途径凋亡情况观察

目的探讨细胞分裂周期蛋白25C(CDC25C)对黑色素瘤B16细胞线粒体应激反应和线粒体途径凋亡的影响。方法取黑色素瘤B16细胞进行培养,将细胞随机分为转染组、转染对照组、空白对照组。转染组转染CDC25C低表达慢病毒质粒,转染对照组转染慢病毒空质粒,空白对照组正常培养。利用Rhod-2/AM与MitoSOX荧光探针检测细胞线粒体内Ca^(2+)浓度及线粒体活性氧(ROS),RT-qPCR法和Western blotting法分别检测细胞线粒体应激反应相关分子ClpP、LONP1及线粒体途径凋亡相关分子Caspase-9、Caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果与转染对照组和空白对照组相比,转染组细胞线粒体Ca^(2+)及ROS含量增加,ClpP、LONP1、Caspase-9、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或<0.01)。结论CDC25C表达下调激活黑色素瘤B16细胞发生线粒体应激反应,并诱导线粒体途径的细胞凋亡。

肝细胞癌组织中细胞周期蛋白25C及其mRNA表达观察

目的观察肝细胞癌组织中细胞周期蛋白25C及其mRNA的表达变化。方法40例经病理检查明确诊断为肝细胞癌的患者,均行肿瘤切除术,术中留取肝细胞癌及癌旁组织,分别采用免疫组织化学法和原位杂交法检测肝细胞癌及其癌旁组织中CDC25C蛋白和mRNA。结果HCC组织和癌旁组织CDC25C蛋白表达量分别为0.392±0.075、0.099±0.043,二者相比,P<0.05。HCC组织和癌旁组织CDC25C mRNA表达量分别为0.122±0.014、0.062±0.017,二者相比,P<0.05。与≤2级者相比,肿瘤分级>2级HCC患者HCC组织CDC25C蛋白及mRNA表达量高(P均<0.05);与未有肝硬化者相比,伴有肝硬化的HCC患者HCC组织CDC25C蛋白及mRN表达量高(P均<0.05)。与男性相比,女性患者HCC组织CDC25C蛋白表达量高(P<0.05)。结论肝细胞癌组织中CDC25C蛋白和mRNA均高表达,CDC25C可能促进了肝细胞癌的发生发展。

内质网应激及其与肝癌细胞凋亡关系的研究进展

内质网(ER)是一种重要的细胞器,主要负责蛋白质的折叠、组装、转运及钙离子储存等生物学功能。在病理条件下,由于ER功能发生改变,大量未折叠蛋白或错误折叠蛋白堆积、Ca2+发生紊乱为ER应激(ERS)。未折叠或错误折叠蛋白反应是ERS条件下,维护ER功能稳定的一种机制,目的是减轻应激反应造成的损伤。然而,持续的应激会破坏ER的正常功能,促凋亡基因的表达可促进细胞凋亡。研究发现,经ERS途径诱导细胞凋亡与多种肿瘤的发病机制关系密切,而肝细胞中ER结构丰富,因此肝癌的发生发展可能与ERS及其诱导的细胞凋亡具有相关性。

siRNA干扰肝癌相关抗原Cdc25C表达对Hepa1-6肝癌细胞增殖和迁移的影响及机制研究

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制肝癌相关抗原细胞分裂周期蛋白25(Cdc25C)表达对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖和迁移的作用及其机制。方法:将细胞分为空白对照组(未转染)、阴性对照组(转染阴性siRNA)及3个实验组(转染siRNA-Cdc25C-1组、转染siRNA-Cdc25C-2组、转染siRNA-Cdc25C-3组)。转染8h后,通过荧光显微镜观察转染效率,并采用Westernblotting法检测各组Cdc25C蛋白的表达,筛选出最有效的siRNA序列;用荧光定量PCR(qPCR)法检测内质网应激反应(ERS)相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、X-盒结合蛋白(XBP-1)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达,CCK-8法和Transwell实验检测Hepa1-6细胞增殖和迁移能力。结果:成功构建Cdc25C低表达的Hepa1-6细胞株,转染siRNA-Cdc25C-1组的转染效率最高且Cdc25C蛋白表达水平最低。与阴性对照组比较,转染siRNA-Cdc25C-1组Hepa1-6细胞的迁移率明显降低,细胞增殖抑制率及GRP78、XBP-1、CHOP基因相对表达量明显升高(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:Cdc25C基因低表达能抑制肝癌细胞增殖和迁移,其机制可能与ERS有关。

Cdc25C在人脑膜瘤组织中的表达及其临床意义

目的探讨人脑膜瘤组织细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(Cdc25C)的表达及其临床意义。方法选取手术切除并经病理证实的36例人脑膜瘤组织和6例人正常脑组织,提取相应组织的总RNA后,分别以RT-PCR和qPCR技术检测Cdc25C cDNA和mRNA,并结合病人的临床资料进行统计分析。结果 Cdc25C在人脑膜瘤组织中的阳性率为66.67%,明显高于其在正常人脑组织中的阳性率16.67%(P<0.05);Cdc25C mRNA在人脑膜瘤组织中的表达量约为其在人正常脑组织中的3.3倍(P<0.05)。Cdc25C在脑膜瘤组织中的阳性率和阳性表达水平均与病人的年龄、性别、肿瘤大小、病理类型及WHO病理分级等临床病理特征无关(P>0.05)。结论 Cdc25C过表达可能与脑膜瘤的发生相关。