人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨

目的 探讨几种因素对人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定的影响。方法 参照《中国药典》2010年版,采用不同厂家乏Ⅸ因子血浆、不同型号仪器、不同肝素中和方式、不同样品前处理方法测定人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价,分析其对PCC中凝血因子Ⅸ效价测定结果的影响。结果 不同厂家的乏Ⅸ因子血浆对凝血因子效价测定结果有显著性差异（P〈0.05）。不同型号全自动凝血分析仪对凝血因子效价测定结果无显著性差异。当稀释倍数大于60倍时,是否中和肝素对凝血因子Ⅸ效价测定结果影响较小。当稀释倍数小于60倍时,中和肝素的检测结果高于不中和的检测结果,差异有统计学意义（P〈0.05）。样品预温与否及是否复溶15分钟,凝血因子Ⅸ效价测定结果无显著性差异。结论 不同厂家乏Ⅸ因子血浆,不同稀释倍数的肝素中和方式,样品前处理方法均影响PCC制品凝血因子Ⅸ效价的测定,在检测过程中应予以重视。加强对乏因子血浆的质量控制及操作流程的规范化,建立PCC制品凝血因子检测的室间质量评价体系。

转基因动物应用的福利问题及欧盟的相关对策

实验动物的伦理问题目前受到了学术界的重视,在公共政策上也得到了一定的体现。转基因动物作为实验动物的一种,凭借其独特的优势得到了广泛应用,同时也带来了新的动物福利伦理问题。实验动物福利立法在规范人类行为,促进合理利用动物方面起到了不可替代的作用。欧盟的动物福利法律法规较为详尽,并保持不断更新,在国际上影响最大。深入研究欧盟的先进经验有助于我国相关立法的不断完善并填补转基因动物福利伦理法规领域的欠缺。

猴泡沫病毒间接免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的建立检测血清中猴泡沫病毒(SFV)抗体的间接免疫荧光方法,为检测实验用猴群中SFV的感染情况提供参考依据。方法用SFV-1病毒感染BHK-21细胞,待50%细胞出现病变时,用胰蛋白酶消化细胞后以2×107/mL浓度40μL的细胞滴到10孔镀膜的玻片上,丙酮固定。利用制备的抗原片通过间接免疫荧光法对34份猴血清标本进行检测。结果建立了检测SFV抗体的间接免疫荧光染色方法,SFV抗体阳性19例,15例血清检测为阴性。结论本方法具有良好的特异性,可作为SFV检测的可靠方法。

猴泡沫病毒(SFV)RT-nestedPCR检测方法的建立及初步应用

目的建立实验猴群及相关生物制品猴泡沫病毒(SFV)的PCR检测方法。方法选择SFV-1、SFV-3、SFVCPZ前病毒序列的pol基因同源性较高的区域设计嵌套引物对SFV-1毒种进行RT-nestedPCR扩增并克隆测序,以确定其准确性,通过验证方法的特异性和敏感性,初步应用该方法对恒河猴外周血淋巴细胞(PBLs),常用猴肾传代细胞及猴源性生物制品进行检测。结果经RT-nestedPCR扩增出的片断与SFV-1 cDNA序列同源性达到99%,对10只恒河猴的检测结果为5只阳性,5只阴性,对常用猴肾传代细胞及脊髓灰质炎疫苗的检测结果均为阴性。结论所建立的SFV RT-nestedPCR检测方法能准确的检测出恒河猴SFV的感染情况,对控制实验猴群的质量具有重要意义。该方法可用于检测猴源性生物制品中SFV的污染情况,为保证生物制品应用的安全性提供一定依据。

大鼠经皮电阻试验方法研究

目的评价改良的大鼠经皮电阻试验方法的可行性。方法取28-30日龄大鼠背部皮肤制成直径约20 mm的皮片,筛选电阻值大于20 kΩ的皮片用于试验。8个受试物,每个受试物设3个平行样,分别取150μL样品加至皮片表皮层,作用24 h。然后洗去受试物,测定皮片电阻值,对电阻值≤15 kΩ的皮片进行罗丹明B染色、提取、565 nm测定吸光度值,计算皮片染料吸收量,进而判定受试物的腐蚀性。结果与传统动物试验方法结果比较,改良的大鼠经皮电阻试验方法灵敏度为100%、特异度83%、准确度88%,均符合经济合作与发展组织对该方法的要求。结论改良的大鼠经皮电阻试验方法在本实验室是可行的。

外周血乳酸及细胞毒性T淋巴细胞在口腔鳞状细胞癌中的临床应用研究

目的探讨外周血乳酸(LA)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)水平在口腔鳞状细胞癌(简称鳞癌)发生、发展中的意义。方法选取2018年11月至2020年9月在北京口腔医院住院的口腔鳞癌患者50例(Ⅰ~Ⅱ期25例,Ⅲ~Ⅳ期25例)作为试验组,同期健康陪护家属70例作为对照组。检测所有研究对象外周血LA、淋巴细胞计数及CTL水平,并分析上述指标在试验组与对照组及不同TNM分期口腔鳞癌患者中的水平变化。结果试验组外周血LA水平高于对照组,CTL水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期口腔鳞癌患者外周血LA水平高于Ⅰ~Ⅱ期患者,CTL水平低于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05);LA水平与CTL呈负相关(r=-0.551,P<0.05)。结论口腔鳞癌患者外周血LA水平与CTL呈负相关,二者与口腔鳞癌的发生、发展相关,可作为潜在的口腔鳞癌病情评估的筛查指标。

口腔癌患者外周血肝细胞生长因子、乳酸及淋巴细胞计数的检测

目的探讨外周血肝细胞生长因子(HGF)、乳酸(LA)和淋巴细胞计数水平在口腔癌发生及发展中的参考意义。方法选取北京口腔医院口腔癌住院患者55例作为实验组,健康陪护家属77例作为对照组。检测实验组与对照组、口腔癌早期与晚期患者外周血HGF、LA水平及淋巴细胞计数差异。结果实验组外周血HGF、LA水平显著高于对照组(P<0.01),淋巴细胞计数水平显著低于对照组(P<0.01);晚期口腔癌患者外周血HGF、LA水平显著高于早期患者(P<0.01),淋巴细胞计数水平在早、晚期口腔癌中无显著性差异(P>0.05)。HGF与LA水平显著正相关。结论口腔癌患者外周血HGF和LA水平显著升高,与口腔癌的发生及发展相关,是潜在的口腔癌早期诊断和病情进展的判断指标。

SAR107375E注射液细菌内毒素检查方法学验证及热原检查研究

目的:对SAR107375E注射液细菌内毒素检查的可行性进行验证,建立合理的安全性检查方法。方法:将SAR107375E注射液进行细菌内毒素凝胶法检查,并通过干扰实验考察细菌内毒素凝胶法检查的适用性。在不适宜采用凝胶检查法的情况下,考虑建立家兔法进行热原检查。结果:SAR107375E注射液不适宜用细菌内毒素检查法进行质量控制,建立家兔热原检查法。结论:拟采用热原检查法对SAR107375E注射液进行质量控制。

口腔鳞状细胞癌患者外周血淋巴细胞计数及CD69表达

目的 分析外周血淋巴细胞计数及CD69的表达在口腔鳞状细胞癌发生及进展中的意义。方法 选取2018-2020年北京口腔医院收治的口腔鳞癌患者45例作为患者组,健康对照组65例。采用流式细胞术检测两组受试者外周血中淋巴细胞计数、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达,分析患者组与对照组、不同临床分期及不同病理分级口腔鳞癌患者外周血淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69表达的差异。结果 患者组外周血淋巴细胞计数、T淋巴细胞计数、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69表达显著低于对照组(P<0.01);淋巴细胞计数在Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ~Ⅳ期口腔鳞癌中无显著性差异(P>0.05),Ⅲ~Ⅳ期口腔鳞癌患者组外周血T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达低于Ⅰ~Ⅱ期患者组(P<0.05)。不同病理分级口腔鳞癌患者外周血淋巴细胞计数、T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达差异不显著。结论 口腔鳞癌患者外周血T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数降低,CD69表达降低及T淋巴细胞CD69表达降低,可能与肿瘤的发生及进展相关。