花斑裸鲤GeHSP70基因的克隆及其对重金属Cu^(2+)胁迫的应答

【目的】克隆花斑裸鲤GeHSP70基因,并进行生物信息学分析;研究正常和Cu^(2+)胁迫条件下GeHSP70的表达模式。【方法】采用分子生物学技术克隆花斑裸鲤GeHSP70基因的全长cDNA,分析其生物信息学特征。采用Real-time PCR技术分析正常和0.01mg/L Cu^(2+)胁迫(胁迫0,12,24,48h)条件下GeHSP70mRNA在花斑裸鲤肝脏、肾脏、脑和鳃4个组织中的表达情况,并采用ELISA试剂盒检测肝脏、鳃组织中GeHSP70蛋白的表达水平。【结果】花斑裸鲤GeHSP70序列共1 387bp,由123bp的5′-UTR、592bp的3′-UTR和672bp的编码区构成,编码223个氨基酸;GeHSP70蛋白是疏水性蛋白,分子质量为11.15ku,等电点为5.01,包含2个HSP70家族的特征序列:IDLGTTYS(11-18位氨基酸)和IFDLGGGTFDVSIL(199-212位氨基酸)。GeHSP70基因核苷酸序列与鲫鱼的同源性最高(93%),在系统进化树中与同科或属中鱼种聚合成一个分支,显示出高度保守性。Real-time PCR结果表明,正常条件下花斑裸鲤GeHSP70在鳃组织中的表达量最高,其次是肝脏,在脑和鳃组织中表达量较低;随着0.01mg/L Cu^(2+)胁迫时间的延长,花斑裸鲤肝脏、肾脏和鳃组织的GeHSP70mRNA表达量先升后降,在24h表达量最高,而脑组织的表达量持续升高;GeHSP70在花斑裸鲤肝脏和鳃组织的蛋白水平表达量总体均表现为先升后降,表明Cu^(2+)能够诱导GeHSP70的表达。【结论】成功克隆了花斑裸鲤GeHSP70cDNA全长,在0.01mg/L Cu^(2+)胁迫下花斑裸鲤GeHSP70在mRNA水平和蛋白水平呈规律性应答,表明GeHSP70是潜在的反映水环境质量的生物标志物。

响应面法优化内蒙古黄芪施肥量

揭示蒙黄芪对3种元素的需求规律,探索氮、磷、钾的最佳施肥量及其配比,为黄芪规范化施肥提供科学依据。在呼和浩特市和林格尔县城关镇马群沟村内蒙古盛齐堂生态药植有限公司药植基地,根据Box-Behnken中心组合设计原理,设计三因素三水平的响应面分析(RSA)试验,研究肥料配施对蒙黄芪产量和品质的影响。结果表明,磷元素对生长期的鲜重影响不显著,而氮肥用量影响显著。调整氮、磷、钾施肥量及配比能够显著提高蒙黄芪产量,当N、P_(2)O_(5)、K_(2)O施用量分别为151.65、174.6、201.3 kg/hm^(2)时,产量达到最大值(8420.33kg/hm^(2))。在和林格尔地区,当N、P_(2)O_(5)、K_(2)O的比例为1∶1.15∶1.33时,黄芪药材个体质量优异,产量高,经济效益好。

微生物菌剂对连作蒙古黄芪生物量及土壤真菌群落结构的影响

【目的】明确不同微生物菌剂对连作蒙古黄芪生物量和土壤真菌群落结构的影响。【方法】以蒙古黄芪(Astragalus membranaceus var.mongholicus)为试验材料,设ETS复合菌剂(ETS)、多维特抗菌剂(DWTK)、多功能维生素菌剂(WSS)、空白对照(CK)4个处理,测定蒙古黄芪生物量,并采用高通量测序技术分析土壤真菌群落结构。【结果】DWTK处理对蒙古黄芪地上部和根部生物量有显著促进作用(P<0.05),其中,地上部生物量较CK提高17.5%、根部生物量较CK提高18.4%。3种微生物菌剂对土壤真菌区系的改善效果明显,其中,DWTK处理的土壤真菌OTU数量远高于CK和WSS处理,且真菌类群更加丰富;与其他3个处理相比,DWTK处理病原真菌Fusarium丰度显著降低,真菌Gibberella丰度显著提高。【结论】多维特抗菌剂可以有效改善蒙古黄芪根际真菌群落结构,减少病原真菌数量,提高真菌数量;有利于提高连作蒙古黄芪的抗病性,增加蒙古黄芪生物量。

Cu^(2+)胁迫下花斑裸鲤IL-8基因的组织表达分析

采用RT-PCR及cDNA末端快速扩增技术克隆了花斑裸鲤IL-8基因的全长及生物信息学特征,用Real-time PCR技术分析GeIL-8mRNA在花斑裸鲤各个组织中的表达分布,研究黄河上游水域水质污染的生物标记物,为水环境污染的早期预警以及花斑裸鲤的保护提供参考。结果表明:花斑裸鲤GeIL-8序列共582bp,由45bp的5'-UTR、240bp的3'-UTR和297bp的编码区构成,编码98个氨基酸;GeIL-8基因核苷酸序列与鲫鱼的同源性最高(87%)。Real-time PCR结果表明,正常条件下花斑裸鲤GeIL-8肝组织中的表达量最高,其次是鳃,在肾和脑组织中表达量较低;在Cu^(2+)胁迫下,花斑裸鲤肝脏、肾脏、脑和鳃组织的GeIL-8在mRNA水平的表达量总体均表现为先升后降的规律性应答,说明Cu^(2+)能够诱导GeIL-8的表达,也表明GeIL-8是潜在的反映水环境质量的生物标志物。研究结果提示,IL-8可作为黄河上游水域水质污染的生物标记物。

数控深孔镗床三位换档油缸的换档设计分析

数控深孔镗床需要液压控制授油器对工件的自动压紧及实现主轴箱的自动换档。对于这种主轴箱,仅用二位油缸不能满足要求,为此我们设计了三位油缸。通过对这种三位油缸巧妙的结构设计,使其通过液压系统能够实现对主轴齿轮三个位置的控制。

计算机信息管理系统在绿色食品管理中的应用

《中国绿色食品信息管理系统》是国内第一款专门针对中国绿色食品的信息管理软件,文章从实际出发,本着适用性、易用性、通用性和专业性而开发出这套软件产品,可以有效、全面、系统地解决实际工作中遇到的信息管理问题。

前置式气动卡盘在数控管螺纹车床上的应用

随着数控机床的快速发展,数控车床的配置形式变得越来越多样化。在数控车床上配置多种形式的卡盘,既适应了市场的发展要求,又满足了用户的个性化需求。

高原花斑裸鲤过氧化氢酶(CAT)基因的克隆鉴定表达及其对Cu^(2+)胁迫的应答

目的对高原花斑裸鲤(Gymnocypris eckloni)过氧化氢酶(catalase,CAT)基因做克隆鉴定表达,并对其做Cu^(2+)胁迫的应答分析,为进一步研究抗氧化酶类与氧化应激之间的关系,筛选其为有效生物标记物提供理论依据。方法采用RT-PCR和RACE技术获得高原花斑裸鲤CAT全长c DNA序列,分析生物信息学特征及在不同组织的表达分布特征。在Cu^(2+)的胁迫下,通过Real-time PCR检测高原花斑裸鲤肝、肾、脑、鳃组织中CAT在转录水平上的应答规律。并对上述结果行有效分析。结果 CAT基因(命名为Ge CAT,Gen Bank登录号为MG762770)的完整编码序列全长2263 bp,含5'-UTR 158 bp、3'-UTR 440 bp和完全开放阅读框(ORF)1665 bp,ORF编码555个氨基酸。在Cu^(2+)胁迫下,高原花斑裸鲤肝、肾、脑、鳃组织中的Ge CAT在转录水平相对表达量呈现出一定的规律性:均先升高后降低。结论获得了花斑裸鲤CAT基因的生物信息学特征和表达分布特点,初步分析了Ge CAT对Cu^(2+)胁迫的应答模式。

高原花斑裸鲤Cu/Zn-SOD的克隆鉴定表达及其对Cu^(2+)胁迫的应答

目的对高原花斑裸鲤(Gymnocypris eckloni)铜锌-过氧化物岐化酶(Cu/Zn-Superoxide Dismutase,Cu/Zn-SOD)基因的克隆鉴定表达及对其Cu^(2+)胁迫的应答分析。方法采用RT-PCR和RACE技术获得G.eckloni Cu/Zn-SOD全长c DNA序列,分析生物信息学特征和在不同组织的表达分布。在Cu^(2+)的胁迫下,通过实时定量PCR检测花斑裸鲤肝、肾、脑、鳃组织中Cu/Zn-SOD的表达变化,探究其是否能够作为响应重金属污染胁迫的一种生物标记物。结果Cu/Zn-SOD的cDNA序列全长785 bp,其中3'-UTR为277 bp,5'-UTR为43 bp,编码区为465 bp,可编码154个氨基酸(Gen Bank登录号为:KX826080)。在Cu^(2+)胁迫下,花斑裸鲤肝、肾、脑、鳃组织中的Ge Cu/Zn-SOD在mRNA水平相对表达量呈现出一定的规律性。结论成功实现高原花斑裸鲤Cu/Zn-SOD的克隆鉴定表达,初步得到了花斑裸鲤Cu/Zn-SOD对Cu^(2+)胁迫的应答模式。

牡蛎中细菌及其抗性基因多样性分析

本研究以中国四个沿海地区所产牡蛎为研究对象,分析了不同样品中细菌多样性以及肠道、腮和肌肉3种组织器官中抗生素及重金属抗性基因分布情况及分布规律,最后采用相关性分析比较了抗性基因之间的相关性。结果表明:微生物含量占比前5位的细菌分别为不可培养的拟杆菌、未分类的芽孢杆菌、未分类的假单胞菌、河流弧菌及嗜盐杆菌斯氏弓形菌,包含了2类腐败菌属和1类致病菌属;从抗性基因种类来看:氨基糖苷类ARGs检出率最高(84.1%),β-内酰胺类ARGs和喹诺酮类ARGs检出率最低(57.1%);以牡蛎不同组织器官分析抗性基因:肌肉中检出率(65.6%)>腮中检出率(59.1%)>肠道中检出率(58.4%);以不同样品来源分析抗性基因检出率:GXBH样品整体检出率最高(72.7%),SDWH1整体检出率最低(54.5%),不同来源样品在抗性基因种类及丰度上各样品差异不显著,在进行PCA分析后发现同一样品可以进行明显的归一化分类,说明同一样品不同组织器官中抗性基因关联性较大;从不同抗性基因ARGs和HTGs的相关性分析来看,CARB和qnrS相关性最高,ChrR则与sulA和mecA有较大相关性,CopA与各大类ARGs都有一定相关性,说明不同类型抗性基因有存在共用一个基因盒的可能性,从对不同来源样品的相关性分析来看,基本遵循了以不同产地样品进行归一化的分类,说明养殖环境可以对牡蛎中抗性基因的分布产生影响。通过以上研究,分析了牡蛎中微生物优势菌群,初步比较了抗性基因与品种、产地、各组织器官之间的相关性,为进一步研究抗性产生机制打下了基础。

青海湖裸鲤CYP17a2基因的克隆及表达分析

CYP17a2基因是细胞色素CYP17（cytochrome P450,CYP）超家族成员之一,在卵巢发育过程中,可以与CYP17a1共同作用控制卵子的发育和成熟。研究和掌握青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii）卵巢发育的基本规律,可为该鱼种的人工增殖放流及其资源保护和恢复提供技术支撑。本研究采用普通PCR和RACE方法克隆得到了青海湖裸鲤CYP17a2基因全长c DNA序列,并分析了其生物信息学意义,通过实时荧光定量PCR确定了CYP17a2基因在青海湖雌性裸鲤各组织中的表达分布特征。该基因的c DNA序列全长为1 871 bp,共编码390个氨基酸,所编码的氨基酸序列与斑马鱼和鲤鱼的同源性最高,分别为69%和64%。该基因在卵巢、卵巢膜、脑、肌肉、肝胰脏中均有表达,以在卵巢中表达量最高（p〈0.01）。本研究结果将为进一步开展CYP17a2基因在青海湖裸鲤卵巢发育的分子调节机理的研究中提供基础数据。