羽衣甘蓝BoMAPK4原核表达、抗体制备及蛋白表达分析

以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S_(13-b)S_(13-b))为材料,提取柱头RNA,利用RT-PCR分离羽衣甘蓝柱头丝裂原活化蛋白激酶4(MAPK4)基因。结果表明:获得的Bo MAPK4 c DNA含有一个1 122 bp开放阅读框,编码373个氨基酸,具有丝氨酸/苏氨酸结构域,无信号肽和跨膜结构。羽衣甘蓝Bo MAPK4与油菜(B.napus)Bn MAPK4、芜菁(B.rapa)Br MAPK4、拟南芥(Arabidopsis thaliana)At MAPK4的氨基酸序列一致性分别为99.7%、99.5%、95.4%。将Bo MAPK4编码区的序列构建到原核表达载体p ET-14b上,并转化到BL21(DE3)大肠杆菌(Escherichia coli)中进行原核表达。SDS-PAGE结果显示,在分子量大小约45 k Da处有Bo MAPK4重组蛋白特异性表达。利用亲和层析的方法获得高纯度的重组Bo MAPK4蛋白。利用获得的重组Bo MAPK4蛋白免疫小鼠,制备Bo MAPK4的多克隆抗体。提取羽衣甘蓝萼片、花瓣、花药、柱头、花柱和子房的总蛋白,利用免疫印迹的方法进行蛋白表达检测,结果发现Bo MAPK4在花瓣、花药和子房中表达的较少,在萼片和花柱中表达的较多,在柱头中的表达量最高。这些研究为探讨Bo MAPK4的生物学功能奠定了基础。

拟南芥雌蕊发育基因调控网络研究进展

在进化过程中,植物演化出不同的有效繁殖策略。其中,雌蕊是被子植物成功繁殖的关键。拟南芥雌蕊是通过多极性系统建立起来的一个复杂的组织结构,它的发育需要通过极性建立组织特异性。拟南芥的雌蕊由两个先天融合的心皮形成,基因调控网络(gene regulatory networks, GRNS)控制和引导雌蕊的发育和分化。生长素-细胞分裂素激素途径作为GRNs的调控部分在雌蕊早期发育中起到重要作用。本综述介绍了最近几年拟南芥雌蕊发育早期相关基因,主要介绍了沿极性轴排列的雌蕊发育GRNs,同时介绍了内部和外部因素修饰GRNs的研究进展。