药用真菌鸡爪苓子实体全长cDNA文库构建及EST序列初步分析

以长白山鸡爪苓子实体为材料,采用Trizol改良法提取子实体总RNA,运用SMART技术构建鸡爪苓子实体全长cDNA文库。结果表明:原始文库的滴度为5.63×106 pfu/mL,重组率为98.73%;扩增后文库滴度为1.095×1010 pfu/mL,库容量约为2.19×1012。选取20个单克隆进行双向测序及分析,把成功获取的15条EST序列进行BLAST同源性比对分析,只找到了4条同源性序列,其余11条为鸡爪苓子实体新基因。

长白山药用真菌鸡爪苓菌丝体总RNA提取方法的比较

为筛选出适合鸡爪苓菌丝体中总RNA提取的方法,采用Trizol法、Trizol改良1、2法、CTAB改良法提取鸡爪苓菌丝体的总RNA。结果表明：Trizol改良1、2法提取总RNA的质量与纯度优于Trizol法和CTAB改良法,LD-PCR成功合成鸡爪苓菌丝体cDNA产物,分布在500~5 000bp,满足cDNA文库的建库要求。

长白山药用真菌鸡爪苓菌丝体全长cDNA文库的初步构建

[目的]以长白山区鸡爪苓菌丝为材料,通过SMART技术构建全长cDNA文库.[方法]采用Trizol reagent试剂盒提取菌丝体总RNA,通过LD-PCR反转录合成双链cDNA,连接至载体λTriplEx2,构建鸡爪苓菌丝体全长cDNA文库.[结果]经测定,原始文库的滴度为1.66×106 pfu/ml,重组率为96.97％,扩增文库的滴度为1.504×1010pfu/ml,插入片段主要分布于500～2000 bp.[结论]成功构建了鸡爪苓菌丝cDNA,为鸡爪苓生长分化的分子机制研究提供理论基础.