幽门螺杆菌virD4基因的克隆表达及其功能初探

目的研究幽门螺杆菌SBK临床分离株virD4的功能。方法通过T-A克隆获得virD4基因片段;构建pET-28a(+)-virD4原核表达载体,转化入Rosetta工程菌,IPTG诱导表达;KCl染色切胶纯化法获得重组蛋白质,SDS-PAGE法分析鉴定重组蛋白质;纯化的重组蛋白质免疫小鼠,获得多克隆抗体,ELISA法检测效价,western blot法分析抗原反应特异性;重组蛋白质与GES-1细胞共培养,检测其对细胞炎症因子的表达及细胞增殖的影响。结果 virD4基因全长为1 728 bp,序列与Shi470菌株的virD4基因同源性较高;成功构建原核表达载体,经诱导及纯化获得相对分子质量为63 000的重组蛋白质;成功免疫小鼠制备多克隆抗体,效价为512 000,抗原抗体反应具有特异性;virD4能诱导GES-1细胞分泌炎症因子和增殖。结论成功克隆并表达virD4基因,制备多克隆抗体,其重组蛋白质能诱导细胞因子分泌及细胞增殖。