反义Snail转录因子对骨肉瘤细胞增殖和转移能力的影响

目的:探讨反义Snail转录因子对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖和转移的影响。方法:用脂质体转染法将高转移性骨肉瘤细胞株MG-63分别转染反义Snail质粒(pGenesil-snailAS)和空载体质粒(pGenesil)。G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。采用免疫组化、Western blot及半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同组MG-63骨肉瘤细胞中Snail表达;体外细胞运动实验及重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验了解细胞转移潜能的改变;以噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成实验观察细胞增殖。结果:MG-63细胞内Snail表达明显,转染反义Snail质粒后,Snail表达明显被抑制。Snail表达下降的同时伴随着体外细胞增殖、黏附和侵袭力的抑制。结论:骨肉瘤细胞中存在Snail蛋白及mRNA的高表达,抑制Snail mRNA的表达对骨肉瘤细胞的侵袭、运动和增殖有抑制作用,可能为骨肉瘤的基因治疗提供新的靶点。

Ⅰ型胶原蛋白多态性与脊柱融合的相关性分析

目的研究Ⅰ型胶原蛋白(COLIA1)基因的多态性与脊柱融合患者术后融合效果的相关性。方法抽取需行脊柱融合患者外周静脉血3 mL,提取白细胞DNA并扩增目的基因所在的DNA片段;用PCR-RFLP检测外周血白细胞基因组CO-LIA1基因Pcol2位点多态性,扩增产物经限制性内切酶Eco31Ⅰ酶切,琼脂糖凝胶电泳观察;对照术前及术后3、6、12个月的X线片,观察植骨融合情况。结果两组实验对象均存在COL1A1基因Pcol2位点-1997G/T多态性,GG型166例,GT型232例,TT型25例。并发现GG基因型与颈椎融合有相关性(P=0.004),而与腰椎后路横突间植骨融合无相关性(P=0.831)。结论 COLIA1 Pcol2位点-1997G/T单核苷酸多态性GG基因型可能是促进颈椎前路自体髂骨植骨融合的重要遗传基因。