反转录病毒介导的Luciferase基因稳定转染细胞株的建立及其生物发光成像检测

目的建立反转录病毒介导的Luciferase基因（Luc2）稳定转染的细胞株,通过体内及体外实验探讨Luc2阳性细胞数与生物发光成像系统光通量之间的关系。方法采用分子克隆方法构建pMX-Luc2质粒,将其与pMD.G质粒共转染293T gag-pol细胞,获得表达Luc2的反转录病毒。将该反转录病毒感染小鼠结肠癌CT26、人小细胞肺癌NCI-H446、人结肠癌HT-29、人卵巢癌SKOV3、人肝癌SMMC-7721细胞系,建立并筛选Luc2阳性表达的细胞株。分别接种10~1×104个SKOV3-Luc2细胞于培养皿中,在4只裸鼠背侧皮下16个位点分别接种200μl不同浓度（1×107、5×106、2.5×106、1×106、5×105、2.5×105、1×105、5×104/ml）的SKOV3-Luc2细胞,在另外4只裸鼠尾静脉中分别注射1×106和3×106个SKOV3-Luc2细胞。采用生物发光成像系统检测体外、体内接种细胞的光通量值。结果成功获得表达Luc2的反转录病毒,感染肿瘤细胞系CT26、NCI-H446、HT-29、SKOV3、SMMC-7721,筛选阳性细胞株,均可稳定表达Luc2。体外生物发光成像系统检测结果表明,光通量值与培养皿中接种的细胞数之间存在显著的线性关系（R2=0.944,β=0.972,P〈0.01）;活体检测结果表明,光通量值与裸鼠尾静脉注射和皮下接种的细胞数之间均存在显著的线性关系（R2=0.991,β=0.996,P〈0.01;R2=0.351,β=0.628,P〈0.01）。结论采用表达Luc2的反转录病毒感染肿瘤细胞系是快速建立Luc2阳性细胞株的一种可行方法。Luc2阳性细胞数与生物发光成像系统中光通量值具有显著的线性关系。

干细胞培养基成球培养法筛选结肠癌干细胞的生物学特性

目的探讨干细胞培养基成球培养法筛选结肠癌干细胞的相关蛋白表达及生物学特性。方法用干细胞培养基成球培养法筛选结肠癌干细胞,Western blot检测干细胞相关蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期;同时检测干细胞增殖、黏附、耐药及侵袭能力,并摸索结肠癌干细胞最佳冻存条件。结果用干细胞培养基成球培养法成功培养出了结肠癌细胞球,检测发现干细胞相关蛋白表达增强,静止期细胞比例明显升高,细胞增殖速度慢,黏附性、耐药性、侵袭性均强于亲本细胞。结论干细胞培养基成球培养法筛选的细胞球中富集了肿瘤干细胞,为结肠癌干细胞的研究提供了良好的细胞模型。

妊娠期高血压疾病糖脂代谢及其与血清Visfatin、RBP4浓度的相关性分析

目的分析妊娠期高血压疾病(HDP)孕妇糖脂代谢状况,并探讨其与血清内脂素(visfatin)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)浓度的关系。方法选择2019年1月至2020年6月唐山市妇幼保健院收治的HDP孕妇60例为研究对象,设为观察组。选择同期产检的正常孕妇60例作为对照组,比较两组参与者分娩前糖脂代谢状况及血清visfatin、RBP4浓度,进一步分析HDP患者糖脂代谢指标与血清visfatin、RBP4浓度的相关性。结果观察组空腹胰岛素、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、visfatin、RBP4浓度均显著高于对照组,差异有统计学意义(t值2.5484.456,P<0.05),而两组参与者空腹血糖、高密度脂蛋白(HDL)浓度比较差异无统计学意义(t值分别为0.214、0.828,P>0.05)。HDP患者空腹胰岛素、HOMA-IR与血清visfatin、RBP4浓度均呈显著正相关(r值分别为0.298、0.257、0.301、0.286,P<0.05),而空腹血糖与血清visfatin、RBP4浓度无显著相关性(r值分别为0.074、0.098,P>0.05)。HDP患者TC、TG、LDL与血清visfatin、RBP4浓度均呈显著正相关(r值分别为0.312、0.289、0.379、0.264、0.245、0.238,P<0.05),而空腹HDL与血清visfatin、RBP4浓度无显著相关性(r值分别为-0.097、-0.065,P>0.05)。结论HDP患者易出现糖脂代谢紊乱,且其与血清visfatin、RBP4浓度相关,值得临床关注。

妊娠早期血脂、脂蛋白相关磷脂酶A2水平表达对妊娠期合并症预测价值分析

目的分析妊娠早期血脂、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)对妊娠期合并症的预测价值。方法选取2017年6月至2018年6月于我院住院分娩的GH孕妇300例为妊娠期高血压(GH)组、妊娠期糖尿病(GDM)孕妇200例为GDM组、正常妊娠孕妇1500例为对照组,比较3组一般资料、孕16~18周、孕26~28周血脂[甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高度密脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)]、血清Lp-PLA2水平,分析妊娠期合并症发生的影响因素,探讨血脂、Lp-PLA2对妊娠期合并症的预测价值。结果孕16~18周、孕26~28周GDM组与GH组的血清TG、TC、Lp-PLA2以及孕26~28周血清LDL-C高于对照组,孕26~28周血清HDL-C低于对照组(P<0.05)。孕16~18周、孕26~28周血清TG、Lp-PLA2升高是妊娠期合并症发生的独立危险因素(P<0.05)。孕16~18周血清TG、Lp-PLA2联合预测妊娠期合并症的AUC为0.852,敏感性、特异性分别为72.00%、88.00%。结论血清TG、Lp-PLA2水平是妊娠期合并症发生的危险因素,二者联合检测可为临床预测妊娠期合并症、选取个性化干预手段、促进妊娠结局改善提供一种有效辅助手段。

血管紧张素原基因M235T位点多态性与重度子痫前期的关系

目的探讨血管紧张素原(AGT)基因M235T位点多态性与重度子痫前期的关系。方法选择择期行剖宫产的重度子痫前期孕妇133例(观察组)、无指征剖宫产的正常孕妇93例(对照组),术日清晨采集无宫缩状态下外周静脉血3mL,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测AGT基因M235T位点基因型和等位基因分布。结果两组AGT基因M235T位点基因型和等位基因分布比较差异均有统计学意义(χ^2分别为6.219、5.461,P均<0.05)。两组在校正高血压史这一混杂因素后,MT基因型者罹患重度子痫前期的危险性是MM基因型者的2.284倍(校正OR=2.284,95%CI:1.169~4.461,P<0.05);TT基因型者罹患重度子痫前期的危险性是MM基因型者的3.910倍(校正OR=3.910,95%CI:1.532~9.982,P<0.01)。两组MM、MT、TT基因型理论值与实际值比较P均>0.05,符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。结论AGT基因M235T位点多态性与重度子痫前期的发病有关,尤其是TT基因型。

溶瘤腺病毒携带的PUMA基因对人卵巢癌细胞株SKOV3化疗敏感性的影响

目的探讨溶瘤腺病毒携带的p53上调凋亡调控因子(PUMA)基因(Adp-PUMA)对人卵巢癌细胞株SKOV3化疗敏感性的影响,以探索增加化疗敏感性,降低化疗药物应用剂量的肿瘤治疗新策略。方法 2010年8月至2011年10月在中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所采用MTS[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑,内盐]法测定Adp-PUMA联合化疗药物对人卵巢癌细胞的生长抑制作用,并与单用化疗药物组进行对比。结果 Adp-PUMA与化疗药物顺铂(cDDP)、紫杉醇(TAX)、健择(Gemzer)联合应用后作用于SKOV3细胞,IC50分别由化疗药物单独作用时的8.98、20.59、7.51降低到了1.83、2.87、1.70,且各组合用指数均<1。此结果表明Adp-PUMA联合化疗药(cDDP,TAX,Gemzer)对卵巢癌细胞的增殖抑制作用具有协同效应,较小剂量的Adp-PUMA能增加卵巢癌化疗敏感性,降低卵巢癌细胞SKOV3对化疗药物的IC50。结论 Adp-PUMA增加了SKOV3对化疗药物的敏感性,与化疗药物联合可降低化疗药物的应用剂量。

PUMA基因在肿瘤治疗方面的研究进展

p53上调凋亡调控因子（PUMA）是近年发现的Bcl-2家族成员，因其可被p53快速诱导并具有强大促凋亡作用而在生命科学的研究领域受到广泛关注。PUMA不仅能够诱导多种肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，还能增加肿瘤细胞对放化疗的敏感性，是非常有前景的肿瘤基因治疗靶点。也有新的研究发现PUMA还在肿瘤发生过程中承担着更多的生物学功能。

妊娠期代谢综合征孕妇内脂素、脂联素、血管细胞粘附分子-1水平与妊娠不良结局的相关性

目的探究妊娠期代谢综合征孕妇内脂素、脂联素(APN)及血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达水平与高危妊娠母儿结局的相关性。方法回顾性选取2016年6月~2018年6月唐山市妇幼保健院产科收治住院的60例合并妊娠期代谢综合征孕妇作为观察组以及60例健康孕妇作为对照组。检测两组母体血清、胎盘组织中的内脂素、APN、VCAM-1表达水平及相关代谢参数,对比两组妊娠结局,分析各指标与不良妊娠结局的相关性。结果观察组(妊娠期代谢综合征妊娠孕妇)血清及胎盘组织中的内脂素、VCAM-1表达水平显著的高于对照组(P<0.05),APN显著低于对照组(P<0.05);观察组血清LDL-C、TC、TG、FPG、HOMA-IR显著的高于对照组(P<0.05),HDL-C显著的低于对照(P<0.05);观察组的巨大儿、早产儿发生率显著高于对照组(P<0.05)。内脂素、VCAM-1与妊娠期代谢综合征孕妇是否发生不良妊娠结局显著正相关,APN呈显著负相关。结论妊娠期代谢综合征孕妇内脂素、脂联素及血管细胞黏附分子-1表达水平与不良妊娠结局显著相关。