钩藤碱对human ether-a-go-go相关基因通道的抑制作用(英文)

将human ether-a-go-go相关基因(HERG)cRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞,采用双电极电压钳技术,观察钩藤碱对 表达电流的影响。结果显示:(1)钩藤碱抑制HERG通道的表达是浓度依赖性的,IC50为(773．4±42．5)μmol／L。(2)钩藤碱抑 制HERG通道的表达是电压依赖性的,最大抑制率在-20 mV,为15％。上述结果提示,钩藤碱抑制HERG编码的钾通道, 导致心室复极时间延长,揭示了与钩藤碱相关的心肌钾通道的分子生物学基础。

阵发性房颤患者血脑钠肽与P波离散度的相关性

目的探讨阵发性孤立性房颤患者转复后血浆脑钠肽(BNP)含量与P波离散度的相关性。方法选取2010年1月至2012年6月就诊于南通大学附属医院的阵发性孤立性房颤患者60例为房颤组,测定血浆BNP水平,房颤转复后24 h内查12导联心电图,追踪随访6个月,根据6个月内是否复发分为复发组亚群(28例)和未复发组亚群(32例);另选取同期经体检、生化、常规超声心动图检查均无明显异常、既往无任何心血管疾病史的50例健康者作为对照组,行12导联心电图检查,测量P波离散度。结果复发组亚群和未复发组亚群患者转复前血BNP值高于转复后和对照组(P<0.05),复发组亚群转复前血BNP值高于未复发组亚群(P<0.05),复发组亚群转复后血BNP值高于未复发组亚群(P<0.05)。复发组亚群P波离散度大于未复发组亚群(P<0.05)。房颤组血BNP与P波离散度呈正相关(r=0.811,P<0.05)。结论房颤患者血BNP与P波离散度呈正相关,血BNP有望成为预测房颤复发的参考指标。

遗传性长QT综合征HERG基因真核表达载体的构建和在HEK293细胞中的表达

目的构建HERG基因的真核表达载体,并在人胚胎肾细胞(HEK293)中进行表达。方法先将pGH19-HERG通过限制性酶SacI和EcoRI酶切得到HERGcDNA,将pIRES2-EGFP用SacI和EcoRI进行双酶切,把HERGcDNA定向克隆到pIRES2-EGFP中,即构建了HERG基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-HERG。然后利用电穿孔法将pIRES2-EGFP-HERG转染HEK293细胞。结果在卵母细胞异源表达载体pGH19-HERG基础上,获得了真核表达载体pIRES2-EGFP-HERG,并在HEK293细胞中成功进行了表达。结论在HERG基因卵母细胞异源表达载体的基础上,构建了HERG基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-HERG,利用电穿孔法将其转染至HEK293细胞中并成功地进行了表达,为下一步进行膜片钳的研究奠定基础。

前体脂肪细胞分化相关的miRNA表达变化

目的诱导前体脂肪细胞3T3-L1分化,检测microRNA(miRNA)表达水平的变化。方法体外培养前体脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞。应用实时定量PCR技术检测前体脂肪细胞分化前后miRNA的表达水平。结果在前体脂肪细胞3T3-L1分化前后,11种miRNA表达升高(miR-10b,-26a,-26b,-103,-99a,-101,-101b,-151,-152,-422b,-98),5种miRNA表达下降(miR-34c,-423,-96,-182,-183)。结论miRNA可能参与调控脂肪细胞分化。

α-2b干扰素抑制动脉粥样硬化的实验研究

目的 :探讨α - 2b干扰素 (IFNα- 2b)抑制动脉粥样硬化 (AS)的体内机制。方法 :随机将家兔分为空白对照 (NC)组、动脉粥样硬化 (AS)组、病毒感染动脉粥样硬化 (V)组、干扰素治疗非病毒感染动脉粥样硬化 (IFN -Ⅰ )组、干扰素治疗病毒感染动脉粥样硬化 (IFN -Ⅱ )组。复制AS模型 ,于第 1、3、5、7周酶法测血清总胆固醇、甘油三脂。 7周后主动脉苏丹Ⅳ染色测AS斑块面积 /总面积 ,HE染色观察主动脉形态学改变。用免疫组化法测胸主动脉中的增殖细胞核抗原 (PCNA)和单纯疱疹病毒Ⅰ型 (HSV -Ⅰ )的表达 ,用原位杂交法测血小板衍生生长因子 β(PDGF - β)的表达程度。 结果 :NC组、IFN -Ⅰ组、IFN -Ⅱ组主动脉粥样硬化斑块面积小于AS组 (P <0 .0 5) ,AS组小于V组 (P <0 .0 5)。NC组、IFN -Ⅰ组、IFN -Ⅱ组PDGF -B的表达低于AS组、V组 (P <0 .0 5)。结论 :病毒可能是AS的始动因素 ,PDGF - β可能是促使血管平滑肌细胞 (VSMC)增生、AS进展的主要因素。IFNα- 2b通过抑制病毒和下调PDGF - βmRNA抑制VSMC的增生 ,可能是其抑制AS的形成及发展的重要机制之一。

实验性动脉粥样硬化中PDGF-B的表达

目的 :探讨动脉粥样硬化 (AS)的体内机制。方法 :建立兔动脉粥样硬化模型。将雄性大耳白兔 (体重1 .5～ 2kg) 1 2只随机分为 2组 :空白对照组 (NC组 ,n =6 )和动脉粥样硬化组 (AS组 ,n =6 )于第 1 ,3,5 ,7周酶法测血清总胆固醇、甘油三脂。 7周后主动脉苏丹Ⅳ染色测AS斑块面积 /总面积 ,HE染色观察主动脉形态学改变。用原位杂交法测血小板生长因子 β(PDGF B)的表达程度。 结果 :主动脉粥样硬化斑块面积NC组低于AS组 (P <0 .0 5 )。PDGF B的表达NC组低于AS组 (P <0 .0 5 )。结论 :PDGF B可能是促使VSMC增生。

氯沙坦通过室旁核抑制慢性心衰大鼠肾交感神经兴奋性

目的:研究慢性心衰时室旁核微量注射氯沙坦对心率、血压和肾交感神经的作用,揭示心衰下丘脑室旁核对肾交感神经活性的调节机制。方法:用SD大鼠制作心衰模型,超声心动图检测心功能变化。脑立体定位仪对大鼠室旁核定位,微量注射氯沙坦(50nL),观察心率、血压和肾交感神经活性的变化。结果:超声心动图显示手术组较假手术组左室内径增加(P<0.01),射血分数降低(P<0.01),左室内径缩短率降低(P<0.05)。注射氯沙坦后,手术组和假手术组的肾交感神经兴奋性降低,手术组较假手术组降低更为明显。结论:心衰时室旁核内注射氯沙坦可降低肾交感神经兴奋性。

循环系统疾病教学方法的探讨

目的探讨循环系统疾病教学方法中典型病例教学法的应用效果。方法选择我院2013级临床医学生180人,随机分为观察组与对照组,每组90例,均采用循环系统疾病教学法。对照组采用传统教学法,观察组采用典型病例教学法,观察对比两组学生的考试成绩和满意度,比较两组教学的效果。结果观察组学生期末考试平均分数为(88.2±5.7)分,对照组学生期末考试平均分数为(79.6±4.6)分,观察组明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);观察组学生对教学的满意度为(94.1±5.2)分,对照组学生对教学的满意度为(88.5±5.4)分,观察组明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论典型病例教学法用于循环系统疾病教学中能显著提升学生学习成绩,对于提高教学质量有重要意义。

表达谱基因芯片筛选前体脂肪细胞分化相关基因的研究

目的:运用基因芯片技术研究前体脂肪细胞分化相关基因表达谱的变化。方法:体外培养前体脂肪细胞(3T3-L1),诱导分化为成熟脂肪细胞。提取脂肪细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,应用含有45038种小鼠基因cDNA的表达谱芯片Mouse430_2进行差异表达谱分析。结果:在前体脂肪细胞分化的基因表达谱中差异表达基因共有640条,其中表达水平显著变化的有38条(表达水平改变5倍以上),上调基因24条,下调基因14条。差异表达基因中有细胞凋亡相关基因、原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白基因等多种基因。这些基因可能与脂肪细胞分化相关疾病的发病机制有关。结论:采用基因芯片技术筛选脂肪细胞分化相关基因,可能为脂肪细胞分化相关疾病病因和发病机制的研究提供新思路。

中国人长QT综合征HERG基因E505D定点突变及其载体构建

目的:对中国人遗传性长QT综合征2型(LQT2)HERG基因突变E505D进行体外定点突变研究,并构建有基因突变E505D的pCMV-script/HERG的真核表达载体。方法:采用PCR定点突变技术(重叠延伸法),根据突变位置附近的两个单一限制性内切酶位点(BamHI和EcoRI)设计两对引物,将突变位点设计在引物上,通过PCR扩增,使扩增片段上含有所需要的突变位点,最后将扩增片段克隆入pCMV-script载体中。结果:DNA测序结果表明,HERG基因在第1515位由G变成T,发生第505位谷氨酸→天冬氨酸的改变(E505D),定点突变成功。结论:PCR技术介导的定点突变准确、高效。pCMV-script/HERG(E505D)的成功构建,为进一步进行该基因突变的功能研究奠定了基础。

先天性长QT综合征和Brugada综合征基因突变

目的研究先天性长QT综合征(LQTS,包括JLNS和RWS)和Brugada综合征(BS)家系的基因突变情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)和直接测序法,对4个LQTS家系进行KCNQ1、KCNH2和KCNE1基因检测,对3个BS家系进行SCN5A基因检测。结果在1个LQTS家系中发现1个KCNQ1基因上错义突变940穴G→A雪穴G314S雪,在Jervell-Longe-Nielsen综合征(JLNS)家系的先证者及其姐姐KCNQ1基因的第15外显子发现单核苷酸多态性(SNPs)G643S,还发现1个突变:KCNQ1基因外显子2a的第227位核苷酸C被T代替,其编码的苏氨酸被异亮氨酸所代替。在1个BS家系中发现1个SCN5A基因上的突变N1774S。其余的LQTS家系及BS家系在以上已知基因中均未发现突变。结论发现和JLNS有关的1个SNPs和1个新突变,并发现1个与欧美人群相同的Romano-Ward综合征相关突变,在BS家系中发现1个新的错义突变,丰富了LQTS及BS离子通道突变的基因库资料。

国人SCN5A基因新的同义突变位点

目的研究中国人心原性猝死相关基因SCN5A突变位点。方法采用聚合酶链反应和DNA测序对1例RQT间期综合征(LQTs)和2例特发性J波患者SCN5A基因进行突变检测。结果①3例患者在国内、外已知的SCN5A突变位点上,均未发现有突变。②发现1个新的同义突变(T990C),位于钠通道α-亚基的DⅠ区段S5～S6胞外环上。结论这个新的同义突变可能通过影响门控性钠通道的跨膜电流而与恶性心律失常的发生相关。

冠状动脉粥样硬化性心脏病新致病基因MEF2A第7外显子突变的检测

目的:检测中国冠状动脉粥样硬化性心脏病患者MEF2A基因第7外显子是否存在新突变位点。方法:从1995-03/1996-08在武汉同济医院和武汉协和医院对来自湖北、黑龙江、河南、湖南等省的怀疑冠状动脉粥样硬化性心脏病的患者156例进行临床调查。利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析结合变性高效液相色谱分析对所有对象的MEF2A基因第7外显子进行筛查,然后选取变性高效液相色谱分析图谱的峰型出现双或多峰者以及聚合酶链反应-单链构象多态性分析图谱条带数目或位置与对照有差异者的片段进行DNA直接测序,测序结果与正常序列对照确定是否存在突变。结果:参与实验的患者156例全部进入结果分析。①MEF2A基因第7外显子区域有4例患者变性高效液相色谱分析图谱呈双峰或多峰,结果疑为异常。②有7例患者的单链构象多态性分析电泳出现异常条带,即泳动比正常多出条带或移动速度与对照有差异,表明这7例可能出现MEF2A基因突变。③所有异常标本的DNA直接测序结果与正常序列对照未发现第7外显子区域基因突变。结论:冠状动脉粥样硬化性心脏病患者在MEF2A基因第7外显子未发现新的突变,变性高效液相色谱分析和聚合酶链反应-单链构象多态性结果与DNA测序结果并非平行关系,单链构象多态性分析同样存在假阳性。

心衰大鼠室旁核微量注射AT_1和AT_2受体阻滞剂对肾交感神经活性的影响

目的:研究慢性心衰大鼠室旁核微量注射血管紧张素II-1型和2型(AT1和AT2)受体阻滞剂对心率、血压和肾交感神经系统的影响,揭示心衰大鼠下丘脑室旁核对交感系统的调节机制。方法:采用SD大鼠,手术组用左冠状动脉前降支结扎术制作心衰模型,假手术组大鼠左冠状动脉前降支下穿线但不结扎。术后4周,测定血流动力学评判心功能状态,测定心脏/体重比与肺/体重比,并进行心脏病理组织学观察。对符合标准的大鼠进行麻醉,经腹膜后途径暴露左肾,在手术显微镜下剥离肾交感神经,脑立体定位仪对大鼠室旁核定位,微量注射AT1和AT2受体阻滞剂(100 nL),POWERLAB 8/30系统采集信号,记录心率、血压和肾交感神经放电活动的改变,人工脑脊液组作为对照。结果:肾交感神经放电:下丘脑室旁核微量注射AT1受体阻滞剂导致肾交感神经兴奋性减弱,对心衰大鼠交感神经的兴奋性减弱较假手术组明显。下丘脑室旁核微量注射AT2受体阻滞剂及人工脑脊液对心衰大鼠及假手术大鼠交感神经的兴奋性改变不明显。结论:心衰时室旁核内注射AT1、AT2受体阻滞剂对交感神经的输出反应有差异。在中枢肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS),血管紧张素II主要通过AT1受体起作用,而AT2受体无相关介导作用。

实验性大鼠急性心肌缺血血浆蛋白C和D-二聚体检测的研究

目的探讨垂体后叶素致急性心肌缺血的实验性大鼠血浆蛋白C和D-二聚体水平的变化和意义。方法50只大鼠随机分成正常对照组和实验模型组,腹腔注射垂体后叶素建立急性心肌缺血模型,观察注射垂体后叶素后心电图ST段变化以及血浆蛋白C活性和D-二聚体浓度生化指标。结果实验组血浆D-二聚体水平明显高于正常对照组(P<0.01),而血浆蛋白C活性检测与正常对照组没有明显差别(P>0.05)。结论血浆蛋白C不是垂体后叶素致实验性大鼠急性心肌缺血的主要因素,而D-二聚体增高参与了垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的过程。

冠心病新致病基因MEF2A第一、第八外显子突变的检测

目的研究冠心病新致病基因MEF2A在中国人群突变情况。方法利用聚合酶链反应-单链构象多态性(polym erase chain reaction-single strand conform ation polymorph ism,PCR-SSCP)和DNA测序技术对156例冠心病(CAD)患者第1外显子及第8外显子进行基因突变检测。结果MEF2A基因第1外显子区域6例患者SSCP泳动异常,第8外显子区域7例患者SSCP泳动异常,但DNA直接测序未发现MEF2A基因第1、8外显子区域基因突变。结论冠心病患者在MEF2A基因第1、8外显子未发现新的突变,PCR-SSCP结果与DNA测序结果并非平行关系,SSCP同样存在假阳性。

护理四手操作对一次性根管治疗的临床效果分析

目的分析护理四手操作对一次性根管治疗的临床效果,并进行临床推广。方法选取我院于2010年11月至2012年11月期间收治的186例牙髓或根尖周病患者,均行一次性根管治疗,将患者随机分为独立操作组(对照组)和四手操作组(治疗组),分别记录两组完成根管治疗的时间、根管充填质量以及患者满意度,并对结果进行分析。结果四手操作组治疗所需时间较传统独立操作组短、患者满意度高、填充效果好,二者之间在统计学上具有显著性差异(P<0.05)。结论四手操作能提高一次性根管治疗的工作效率和治疗成功率,值得在临床上推广使用。

牙周疾病的预防措施及护理对策

目的探讨引起牙周疾病的病因,提出相对应的预防措施,并完善护理措施。方法对2010年5月至2012年5月期间,我院收治的97例牙周疾病患者进行病因的分析和研究。结果本组共有97例牙周疾病患者,年龄12～75岁,平均年龄53岁,其中男性患者58例,女性患者39例。由牙齿局部因素导致患病的有69例,年龄12～59岁;由全身因素导致患病的有28例,年龄27～70岁。讨论针对导致牙周疾病的不同病因,制定合理可行的预防措施,并要加强对牙周疾病患者的护理,可在很大程度上减少牙周疾病的发生、发展。

先天性长QT综合征KCNQ1基因真核表达载体的构建及表达

目的 在原核表达载体pSP6 4 KCNQ1的基础上 ,构建KCNQ1的真核表达载体。方法 先将pSP6 4 KC NQ1通过限制性酶切得到KCNQ1cDNA ,将后者克隆入 pEGFP N1中 ,构建中间过渡载体 pEGFP KCNQ1;将pEGFP KCNQ1和 pIRES EGFP分别用NheⅠ和EcoRⅠ双酶切 ,把KCNQ1cDNA克隆到 pIRES EGFP ,即构建了pIRES EGFP KCNQ1。然后利用Effectene转染试剂介导将pIRES EGFP KCNQ1转染HEK2 93细胞。 结果 在原核表达载体 pSP6 4 KCNQ1的基础上 ,获得了KCNQ1的真核表达载体 pIRES EGFP KCNQ1,并使其在HEK 2 93细胞中成功表达。结论 该法可成功构建、表达KCNQ1的真核表达载体 ,为进一步的功能研究奠定了基础。