RAPD分析在绢丝昆虫亲缘关系研究中的应用Ⅱ.柞蚕品种间的遗传差异

采用RAPD技术 ,对 5个柞蚕品种的遗传差异进行比较研究。结果表明 ,所采用的 40个随机引物中 ,有 2 7个引物扩增谱带清晰且重复性较好 ,扩增总片段数 2 5 3条 ,单个引物的扩增片段数在 4～ 16之间 ,片段大小在 0 .33～ 3.0kb之间。不同柞蚕品种间的遗传差异较小 ,遗传距离 (D)在 0 .0 6 6～ 0 .16 5 9之间 ,根据D值 ,由UPGMA聚类分析软件绘制了它们的分子进化树。

五种绢丝昆虫随机扩增多态性DNA分析

本文对家蚕、野桑蚕、蓖麻蚕、柞蚕和天蚕等 5种绢丝昆虫进行了随机扩增多态DNA(RAPD)分析。 40个引物中有 2 7个引物能扩增出 5 36个清晰且重复性强的条带 ,其中可变条带数为 5 2 0个 ,单个引物扩增的条带数在11～ 2 8之间 ,平均为 19 9,各片段分子量大小在 0 2 9～ 2 6 7kb之间。每个样本都能找出其独特的分子标记。家蚕与野桑蚕的遗传距离 (D)最小 ,为 0 376 0 ;家蚕与蓖麻蚕的遗传距离 (D)最大 ,为 0 7488。根据遗传距离 ,用UPG MA聚类分析方法构建了它们的分子树。

家蚕人工授精与精子超低温保存研究(简报)

家蚕人工授精与精子超低温保存研究（简报）桂慕燕陈元霖刘治纬吴维光（厦门大学细胞生物学研究室，厦门３６１００５）（华南农业大学亚太地区蚕桑培训中心，广州５１０６４２）家蚕（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉＬ．）是一种很重要的经济昆虫，也是优良的实验生物。家蚕的人工...

含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的家蚕同源重组质粒载体的构建

以含家蚕丝心蛋白重链基因同源片段的质粒pG35 0为出发质粒 ,插入增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,构建成以EGFP为报告基因的同源重组质粒载体 pMD Fib IE EGFP ,通过PCR及酶切鉴定表明EGFP以正确的方式插入到原始质粒中 ,通过脂质体介导法转染胃癌细胞能发出很强的绿色荧光 ,表明该质粒能够在真核细胞中表达 。

外源遗传物质诱导的家蚕变异品系酯酶同工酶比较

采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对由蓖麻蚕DNA导入家蚕和蓖麻蚕()与家蚕()杂交获得的变异品系,进行了血液酯酶同工酶酶谱的比较分析,与受体或母本比较,变异品系的酯酶同工酶酶谱中,或者出现某些新的酶带,或者缺失了某些原有的酶带,但是没有出现供体或父本所特有的酶带.

家蚕精子保存的初步研究

家蚕精子冷冻保存的初步试验结果表明:Tris兔精液冷冻稀释液对家蚕精子有较好的保护效果.在经液氮冷冻-融解的过程中,精子的运动性未受明显影响.用这种精子进行人工授精,得到6.67％的受精个体(4/60),受精卵率为受精个体产出卵的76.95％.

家蚕与蓖麻蚕杂交后代变异机理探讨——基因组RAPD检测

采用２４种随机引物，对以蓖麻蚕精子进行人工授精得到的家蚕后代中的３个稳定变异品系及其亲本的基因组进行了ＲＡＰＤ检测，结果显示，在变异品系的ＲＡＰＤ图谱中，不仅存在大量与母本相同的“亲本带”，同时还出现了不同数量与母本不同的“变异带”，包括“非亲本带”、“缺失带”及个别仅与父本相同的“目的带”，从分子水平上揭示了变异品系存在着明显的“偏母性”与“变异性”特点。

四种启动子调控RFP报告基因在家蚕细胞(Bm-e-HNU5)内的瞬时表达

以红色荧光蛋白基因(RFP)为报告基因,构建含4种不同启动子的重组表达质粒,用脂质体介导法转染家蚕Bombyxmori细胞(Bm-e-HNU5),观察家蚕细胞质肌动蛋白4基因启动子(A4)、α微管蛋白基因启动子(α-tub)、蚕丝心蛋白重链基因启动子(Fib)和家蚕核型多角体病毒早期即刻蛋白基因启动子(IE)4种启动子调控RFP报告基因在家蚕细胞内的瞬时表达情况。构建的重组表达质粒pDsRed-α-tub、pDsRed-A4、pDsRed-IE和pDsRed-Fib经双酶切和PCR鉴定正确无误。转染和转录实验结果表明,除了pDsRed-A4外,其他3种重组质粒在Bm-e-HNU5细胞中都得到高转染率,α-tub、IE和Fib可依次增强RFP报告基因在家蚕细胞内的瞬时表达活性。

家蚕精子介导报告基因gfp和egfp转移技术的研究

探讨家蚕精子介导基因转移技术能否有效地将外源基因导入并整合到家蚕基因组中,使之稳定遗传.分别进行了含gfp报告基因的pG350载体和含egfp报告基因的pMD-Fib-IE-EGFP与pEGFP-N3载体的精子介导基因转移实验.结果表明,导入线性pG350载体,在14个G0代实验蛾区的DNA样品中,有5个PCR检测为阳性,阳性率为35.7%;对G1代的PCR与Southern blot检测的结果证明,导入的gfp基因存在于G1代的家蚕基因组中.导入不同浓度或构型的pMD-Fib-IE-EGFP与pEGFP-N3载体时,对G0代的PCR检测结果表明,导入线性pMD-Fib-IE-EGFP组的PCR阳性率为61.2%,而导入环状质粒组的PCR阳性率为57.1%;导入环状pEGFP-N3组的PCR阳性率为46.2%;对部分PCR阳性蛾区进行Southern blot检测结果表明,导入的egfp基因整合在G0代家蚕基因组中.本研究的结果表明,家蚕精子介导基因转移能够将外源基因有效地导入、整合于家蚕基因组,并可遗传至G1代.

家蚕微卫星DNA的研究进展

概述了分子标记技术,就其中的微卫星标记技术的原理、方法与特点进行了介绍,重点就该技术在家蚕中的研究进展进行了综述,并展望了该技术在家蚕的遗传分析、辅助选择育种等应用中的前景。

条纹斑竹鲨基因组的RAPD分析初报

采用１１种随机引物对４条条纹斑竹鲨基因组进行了ＲＡＰＤ检测。结果表明，１１种引物在每条个体上扩增的ＤＮＡ片段总数在７７～８４之间，单个随机引物扩增的ＤＮＡ片段数目由１至１１条不等，平均为７５条ＤＮＡ片段，片段的大小在３００～２８００ｂｐ之间。

绢丝昆虫线粒体DNA多态性研究

采用差速离心法和碱变性法制备家蚕、野桑蚕、蓖麻蚕、柞蚕和天蚕蛹线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ），并进行了限制性酶切片段多态性（ＲＦＬＰ）检测。结果表明，绢丝昆虫在种间ｍｔＤＮＡ酶切类型差异明显，而在种内不同品种之间则没有差异或差异甚少。在ＨａｅⅢ酶解作用下，家蚕的１５个一化和二化性品种的酶切类型相同，５个多化性品种的酶切类型也相同，但它们彼此间则有差异，前者与野桑蚕属同一个类型。由此提示，在家蚕品种演化过程中，一化和二化品种可能与野桑蚕有更密切的亲缘关系。

条纹斑竹鲨线粒体DNA的研究

用６种限制性内切酶分析了４条条纹斑竹鲨的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）。ＰｓｔＩ、ＨｐａＩ、ＸｂａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＢｇｌⅡ在条纹斑竹鲨ｍｔＤＮＡ分子上分别具有０至２个切点，ｍｔＤＮＡ分子大小为１６６ｋｂ，根据单酶和双酶完全酶解片段的大小，构建了条纹斑竹鲨ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱。

条纹斑竹鲨基因组的RAPD分析初报

采用11种随机引物对4条条纹斑竹鲨基因组进行了RAPD检测。结果表明,11种引物在每个个体上扩增的DNA片段总数在77—84之间,单个随机引物扩增的DNA片段数目由1至11条不等。平均为7.5条DNA片段,片段的大小在300—2800bp之间。个体之间的相似率在90％以上。

非损伤性取样的蚕类DNA提取及检测

对家蚕和蓖麻蚕的蚕蜕和蛾翅分别采用SDS裂解法和动物组织基因组试剂盒提取法提取DNA ,并与常规方法以蚕蛹提取的DNA一起进行RAPD扩增图谱比较、分析 。

条纹斑竹鲨线粒体DNA的研究

用6种限制性内切酶分析了4条条纹斑竹鲨(Chiloscyllium plagiosum)的线粒体DNA(mtDNA)。PstI、HpaI、XbaI、EcoRI、EcoRV、BaI Ⅱ在条纹斑竹鲨mtDNA分子上分别具有0至2个切点,mtDNA分子大小为16.6kb,根据单酶和双酶完全酶解片段的大小,构建了条纹斑竹鲨mtDNA的限制性酶切图谱。

蓖麻蚕DNA对家蚕的诱变作用

将蓖麻蚕DNA(或DNA蛋白)分别注入二化性和多化性家蚕蛾体内,后代出现外部形态和数量性状变异的个体,从中选育出六个稳定的新品系,并对这些新品系进行了性状遗传、血液酯酶同工酶酶谱、线粒体DNA限制性内切酶谱以及血液蛋白电泳图谱的观察和检测,对外源DNA诱导遗传变异的可能性及其意义进行了讨论。

家蚕与蓖麻蚕的杂交研究

以家蚕为母本、蓖麻蚕为父本,用人工授精方法杂交,从杂交后代的变异个体选育出三个家蚕新品系,并应用遗传学、细胞学、生物化学和分子生物学方法检测了新品系的遗传特征和特性.讨论了科间杂交的可能性,及其在育种上应用的前景.

遗传转化应用于家蚕育种的试验研究(摘要)

自1957年首次报导通过注射异种DNA在鸭子获得变异性状以来,高等动植物的遗传转化问题引起了生物学家和遗传育种学家的浓厚兴趣。当前,它已成为内容广泛而丰富的“基因工程学”领域的一个重要方面。关于家蚕遗传转化研究的最早文献发表于1960年(ACTayPOB等),后来的试验表明,将不同品种的DNA注入家蚕体内,实现了特定基因的转移和表达(Nawa,1971、1978),为了探讨遗传转化方法在家蚕育种上应用的可能性。