忽地笑加兰他敏生物合成代谢途径中COMT酶基因克隆及序列分析

目的克隆忽地笑加兰他敏合成代谢途径中COMT酶基因及序列分析。方法通过比较数据库中四种植物烟草、唐松草、玉米和罂粟的儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)基因的同源序列,设计简并引物,克隆出忽地笑COMT酶基因(LaCOMT)的部分序列,然后通过RACE技术获得LaCOMT的全长序列。结果该序列开放读码框长度为1101bp,编码366个氨基酸,且此氨基酸序列具有依赖S-腺苷-L-甲硫胺酸(SAM)的甲基转移酶蛋白的三个保守序列,并与高等植物COMT氨基酸序列(CAA52462.1、AAQ01670.1、AAD29844.1和NP_001106047.1)的同源性大于74%。LaCOMT蛋白的预测分子量为40 501.9,等电点pI为5.95。结论此研究所获得的碱基序列为COMT酶基因的全长序列,且其预测的三级结构与咖啡酸-3-氧位甲基转移酶单体三级结构的1kyzE模型相似,均为依赖S-腺苷-L-甲硫胺酸(SAM)的甲基转移酶。

妇科千金片对急性盆腔炎大鼠子宫、卵巢TNF-α、IL-2 mRNA转录水平的影响

目的观察妇科千金片(千斤拔、单面针、金樱根、穿心莲、功劳木、党参、鸡血藤、当归)对急性盆腔炎大鼠子宫、卵巢细胞因子TNF-α、IL-2 mRNA表达的影响,初步探讨该药抗炎免疫作用的分子机制。方法采用混合菌(大肠杆菌、解脲支原体和金黄色葡萄球菌)接种法建立急性盆腔炎大鼠模型。妇科千金片给药后取大鼠子宫、卵巢,提取总RNA,进行RT-PCR反应,通过光密度扫描进行半定量分析。结果与假手术组相比,模型组TNF-α、IL-2 mRNA表达均上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,妇科千金片治疗组TNF-α、IL-2 mRNA表达均下降(P<0.05)。结论 妇科千金片的抗炎免疫作用可能是通过降低TNF-α、IL-2 mRNA表达,减轻由细胞炎症因子介导的炎症反应来实现的。

黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA提取方法的比较

目的筛选适合黄花石蒜花蕊和花葶组织中总脱氧核糖核苷酸（RNA）的提取方法。方法采用CTAB法、SDS法和植物总RNA提取试剂盒法对黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA进行提取并比较其效果。结果 CTAB法和SDS法均不能提取到完整的RNA;植物总RNA提取试剂盒能有效地去除蛋白质、多糖及DNA,28S条带的荧光亮度是18S条带的2倍左右,OD260/280值在1.8~2.0之间,花蕊和花葶的产率分别为304.1μg/g和255.8μg/g,并且试剂盒法提取的总RNA通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。结论试剂盒法适合黄花石蒜花蕊和花葶组织总RNA的提取,提取的总RNA质量高、完整性好、产率高,符合后续实验的要求。

mRNA差异显示法筛选黄花石蒜中加兰他敏合成相关基因

目的筛选和克隆黄花石蒜加兰他敏相关基因。方法采用mRNA差异显示法(mRNA differential displayPCR,DD-PCR),对7月份黄花石蒜产加兰他敏含量最高的部位花蕊和含量最低的部位花葶进行基因表达差异的研究,筛选其差异片段,再对差异片段进行回收、克隆、测序及序列分析和同源性比较。结果黄花石蒜花蕊和花葶中存在明显的基因表达差异,发现差异条带44条,经序列分析和同源性比较,确认其中2个条带与黄花石蒜加兰他敏合成相关,另一条可能与加兰他敏运输代谢调控有关。结论通过DD-PCR得到的3个同源序列为研究黄花石蒜中加兰他敏的合成途径提供了有力依据。

木香饮片和新鲜药材DNA片段的克隆及同源性比较分析

目的对木香的饮片和新鲜药材进行DNA片段的比对分析,为木香的鉴定提供研究思路。方法选取木香饮片和新鲜药材,利用CTAB法提取其基因组总DNA,再进行PCR扩增筛选随机引物,找出能同时扩增饮片及新鲜药材基因组总DNA的随机引物,对饮片及新鲜药材基因组总DNA扩增产生的一致性条带进行克隆,得到阳性菌落,经转化子鉴定后测序。对所测序列进行生物信息学分析和同源性比较。结果木香饮片与新鲜药材长度均为794 bp的克隆片段序列相似度达99.75%,长度为1 116 bp的克隆片段的核苷酸水平比对及氨基酸水平比对的相似度均为100%。结论采用分子生物学手段能对木香饮片和新鲜药材进行鉴定。