长链非编码RNA双特异性磷酸酶5假基因1对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的作用

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)双特异性磷酸酶5假基因1(dual-specificity phosphatase 5 pseudogene 1,DUSP5P1)对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞生物学行为的作用。方法采用实时荧光定量PCR法检测TNBC细胞系MDA-MB-231、4T1、MDA-MB-468及正常人乳腺导管上皮细胞MCF-10A中lncRNA DUSP5P1的表达水平;将MDA-MB-231细胞系分为对照组、sh-vector组和sh-DUSP5P1组,分别不感染慢病毒、只感染空载质粒及感染sh-DUSP5P1-慢病毒(lentivirus,lenti)。采用MTT实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western Blot实验检测上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin、Snail的表达。结果TNBC细胞系MDA-MB-231、4T1及MDA-MB-468中lncRNA DUSP5P1的表达水平均明显高于正常人乳腺导管上皮细胞系MCF-10A(F=65.10,P<0.05)。细胞培养12、24、48、72 h后,sh-DUSP5P1组吸光度值(OD 490值)明显低于对照组和sh-vector组(分别F=33.62,90.72,41.17,77.94;均P<0.05)。细胞培养7 d后,与对照组和sh-vector组比较,sh-DUSP5P1组克隆形成数明显下降(F=575.1,P<0.05)。敲减DUSP5P1后,TNBC细胞系MDA-MB-231侵袭和迁移能力明显下降(分别F=933.30,160.20;均P<0.05),上皮标志物E-cadherin明显上升(F=6.21,P<0.05),间质标志物Vimentin和Snail明显下降(分别F=100.11,227.37;均P<0.05)。结论LncRNA DUSP5P1可能通过上皮间质转化过程促进TNBC细胞侵袭和迁移。

HOXC-AS3和微小RNA-154在结直肠癌组织中的表达及相关性

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)同源结构域C10反义转录本3(HOXC-AS3)和微小RNA-154(miR-154)在结直肠癌(CRC)组织中的相对表达量及其与患者预后的相关性。方法:分析CRC组织中HOXC-AS3的相对表达量与患者临床病理参数间的相关性;构建敲减HOXC-AS3表达的CRC细胞株,对其迁移和侵袭功能进行测定。结果:miR-154在CRC组织中的相对表达水平明显低于癌旁组织(t=27.65,P<0.001),而HOXC-AS3在CRC组织中的表达量明显高于癌旁组织(t=20.96,P<0.001),并且CRC组织中HOXC-AS3的表达与肿瘤淋巴结转移及TNM分期密切相关(均P<0.05)。体外细胞实验敲减HOXC-AS3后,CRC细胞株SW480迁移、侵袭能力均明显下降(均P<0.05),HOXC-AS3与miR-154的表达呈强负相关(r=-0.906,P<0.001)。在TNMⅡ期、Ⅲ期及Ⅰ~Ⅳ期CRC患者中,HOXC-AS3低表达的CRC患者总体生存率较HOXC-AS3高表达的CRC患者明显升高(均P<0.05);CRC组织中HOXC-AS3的相对表达量是患者较差预后的独立危险因素。结论:HOXC-AS3促进CRC的发生、发展,可能通过miR-154发挥调控作用,同时其高表达提示CRC患者的不良预后。

人7型腺病毒检测细胞系的构建与鉴定

目的构建人7型腺病毒（human adenovirus type 7，HAdV7）检测细胞系。方法将HAdV7中的Hexon基因克隆至带有绿色荧光蛋白基因的慢病毒表达载体pLV-EGFP（2A）-Puro上，获得pLV-EGFP-hexon。将其与包装质粒P-Pax、pMD用脂质体Lip2000共转染293T细胞，获得慢病毒颗粒感染HEp-2细胞，经嘌呤霉素压力筛选和系列的稀释法，获得HAdV7感染的检测细胞系HEp-2／GFP。结果细胞系HEp-2／GFP感染HAdV7后24h，可观察到GFP的表达绿色荧光，而作为对照组的HEp-2／GFP细胞感染双链DNA病毒（如EB病毒和乙型肝炎病毒），并未观察到绿色荧光。此检测细胞系用不同滴度的HAdV7感染，至少可以检测到10PFU／mL滴度的HAdV7。结论成功构建了能检测HAdV7的细胞系HEp-2／GFP，且其检测的特异性和敏感性良好，可以作为检测HAdV7感染的诊断方法之一。