PMLA-PEG-TAT纳米接枝物的合成和生物活性研究

目的合成药物载体聚苹果酸(PMLA),制备纳米接枝物PMLA-Hyd-PEG5000/PEG2000-TAT/Doxorubicin(DOX),研究PEG对穿膜肽的保护作用及入胞特性。方法以L-天冬氨酸为原料合成PMLA,将不同相对分子质量聚乙二醇(PEG5000)和PEG2000-TAT分别通过腙键和酰胺键与PMLA相连。阿霉素(DOX)作为模型药物,通过酰胺键与PMLA相连。采用Hela细胞研究纳米接枝物的细胞毒性和细胞内摄作用。结果成功制备了药物载体PMLA和纳米接枝物PMLA-Hyd-PEG5000/PEG2000-TAT/DOX,筛选出当TAT含量为0.3%(TAT与PMLA的摩尔比,mol/mol)可发挥很好地穿膜入胞作用,PEG5000含量为3.2%(PEG与PMLA的摩尔比,mol/mol,下同)时对0.3%TAT有很好的保护作用,激光共聚焦实验(CLSM)验证了MTT实验结果。结论一定量PEG5000对TAT有很好的保护作用,为后续去保护后,TAT发挥高效入胞作用提供前期研究基础。

芬太尼双层口颊片含量及释放度测定方法的研究

目的:建立测定芬太尼双层口颊片中枸橼酸芬太尼的含量及释放度的HPLC法。方法:色谱柱:SHISEIDO-C_(18)柱(100 mm×3 mm,3μm);流动相:0.1 mol·L-1三乙胺溶液(用磷酸调节p H值至4.0)-乙腈(30∶70);检测波长:195 nm;流速:0.5ml·min^(-1);柱温:30℃。结果:枸橼酸芬太尼在5.0~1 000.0μg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均回收率为97.88%,RSD为2.60%(n=9)。速释层芬太尼在5 min时累积释放度接近70%,缓释层芬太尼在4 h时的累积释放度接近85%,且符合零级释放方程、一级释放方程、Higuchi释放方程。结论:该方法简便、准确、专属性强,适用于芬太尼双层口颊片中枸橼酸芬太尼的含量及释放度测定。芬太尼口颊片具有良好的速释、缓释双向释药效果。

芬太尼口颊片在比格犬体内的药动学研究

目的:建立比格犬体内枸橼酸芬太尼血药浓度的测定方法,并进行芬太尼口颊片的药动学研究。方法:取6只比格犬给予芬太尼口颊片1片(675μg/片,含服),分别于给药后2、5、10、15、30、45、60、90、120、240、360、480、720 min取静脉血1 mL,经甲醇沉淀后,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法[色谱条件:色谱柱为Agilent C18,流动相为甲醇-0.02%甲酸水溶液(95:5,v/v),流速为0.5 mL/min,进样量为5μL,柱温为30℃;质谱条件:采用电喷雾电离源,正离子多反应监测,检测离子为枸橼酸芬太尼质荷比(m/z)337.1→1 88.0、卡马西平(内标)m/z 237.1→194.1],测定枸橼酸芬太尼的血药浓度,并采用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果:枸橼酸芬太尼检测质量浓度的线性范围为1.0~325.0 ng/mL(r=0.998),精密度试验的日内RSD<5%(n=6),日间RSD<6%(n=3);平均回收率为(94.65±6.32)%^(99.21±3.24)%(n=6);基质效应的RSD<15%(n=6),稳定性试验的RE在±6.2%内(n=3)。芬太尼口颊片在比格犬体内的药动学参数tmax为(32.5±6.1)min,t1/2为(211.8±47.4)min,cmax为(40.3±1.9)ng/mL,CLz/F为(0.006±0.001)L/(min·kg),AUC0-720min为(7 564.0±1 576.7)ng·min/mL(n=6)。结论:本方法简便、可行、准确。芬太尼口颊片在比格犬体内具有良好的速释、缓释双相释药特性。