CCL25/CCR9-肠淋巴细胞归巢通路共变化调控肠黏膜免疫屏障损伤与艾滋病从脾论治

脾居中焦,乃后天之本,气血化生之源,与机体的水谷运化及免疫防御关系密切。脾是艾滋病发病的关键脏腑,脾虚是基本病机,从脾论治是中医药治疗艾滋病的基本治法之一。肠黏膜免疫屏障损伤贯穿艾滋病整个病程,趋化因子25(CCL25)/趋化因子受体9(CCR9)介导的肠淋巴细胞归巢参与肠黏膜免疫屏障修复,中医能改善艾滋病患者肠道症状并对肠黏膜屏障有修复作用。分析了中医从脾论治观点与肠黏膜屏障在艾滋病中的重要性,探讨肠黏膜免疫屏障损伤及其调控的关键环节“CCL25/CCR9通路-肠淋巴细胞归巢途径”与艾滋病从脾论治的关系,以期明确中医药治疗艾滋病调节免疫的作用机制,为中医药治疗艾滋病作用机制研究提供新思路。

西洋参总皂苷及总多糖调节NK细胞和T细胞的作用研究

目的:研究西洋参总皂苷、总多糖对自然杀伤细胞(NK细胞)、T淋巴细胞的体外增殖和凋亡作用的影响,明确西洋参不同组分的免疫调节作用。方法:制备西洋参总皂苷和总多糖,体外分别培养NK细胞株(NK-92MI)和T细胞株(Jurkat),以不同质量分数的西洋参总皂苷、总多糖分别干预不同时间后,采用MTT法检测NK-92MI细胞、Jurkat细胞增殖活性;采用流式细胞术检测NK-92MI细胞、Jurkat细胞凋亡变化。结果:西洋参总皂苷和总多糖可以促进NK-92MI细胞、Jurkat细胞的增殖,抑制两种细胞的凋亡,且在一定质量分数范围内呈明显剂量依赖性。西洋参总皂苷在145 mg/L、24 h时,西洋参总多糖在1202 mg/L、12 h时能明显促进NK-92MI细胞的增殖;西洋参总皂苷在73 mg/L、24 h时,西洋参总多糖在601 mg/L、12 h时能明显促进Jurkat细胞的增殖;西洋参总皂苷在387 mg/L、24 h时,西洋参总多糖在1202 mg/L、24 h时能明显抑制NK-92MI细胞和Jurkat细胞的凋亡。结论:西洋参总皂苷和总多糖能在一定质量分数范围内通过影响细胞的增殖和凋亡来发挥对NK细胞和T细胞的免疫调节作用。

从健脾祛湿法调节肠道菌群探讨艾滋病相关性腹泻临床机制

脾脏——“后天之本”、“气血生化之源”,在机体中占有极为重要的位置。HIV病毒侵袭人体后,脾胃首先受损,若脾运失常、脾气不和,湿浊由生,艾滋病患者则会出现腹泻的临床症状。有关本病论治,临床上多采取健脾益气、祛湿止泻的治法。研究显示,肠道菌群失调情况在艾滋病患者中普遍存在[1],腹泻的发生和肠道菌群失调有着密切的关系。故笔者以肠道菌群和中医学“脾”的相关理论知识作为研究背景,运用脾—胃—肠之间的相关理论,结合健脾祛湿法治疗以脾气虚为主的脾虚湿盛型HRD的临床实践以及机理内涵,探讨艾滋病相关性腹泻的治疗思路,以平衡肠道菌群为主要目的,改善艾滋病相关性腹泻的临床症状,达到维持艾滋病患者体内肠道菌群的平衡,以防治HRD的发生,为今后的临床防治提供新的方向理论依据。

益艾康对HIV/AIDS患者Th17/Treg免疫平衡的影响

目的:探讨益艾康对HIV/AIDS患者Th17/Treg免疫平衡的影响。方法:纳入HIV/AIDS患者60例为研究对象,其中HAART治疗组(西药组)30例,HAART联合益艾康治疗组(中西药组)30例,健康对照组23例。流式细胞术检测各组T淋巴细胞亚群及Th17、Treg细胞数量。结果:中西药组CD4^(+)T数量相比西药组升高,CD8^(+)T细胞数量降低(P>0.05);中西药组Th17细胞数量相比西药组升高(P<0.05),Treg细胞数量降低,Th17/Treg比值升高(P>0.05);相关性分析显示:CD4^(+)T细胞数量、CD4^(+)T/CD8^(+)T比值与Th17、Th17/Treg比值表现为正相关(P<0.05),与Treg细胞水平未表现出相关性(P>0.05)。结论:益艾康通过上调Th17细胞的表达水平,提高Th17/Treg比例,改善了患者Th17/Treg免疫平衡。

队列研究在中医药防治艾滋病领域应用的实践与思考

队列研究适用于中医药防治慢性难治性疾病的研究,随着艾滋病的慢性化以及治疗规范化,针对其病程长、死亡率高、合并症多、病情复杂、用药复杂多样的特点,队列研究在艾滋病临床研究方面得到广泛应用。中医药防治艾滋病具有独特优势,作者通过对中医药防治艾滋病队列研究的现状进行分析,对存在的患者依从性低、合并用药、艾滋病死亡率高、队列研究成本高等问题进行探讨,以期为后续建立中医药防治艾滋病队列提供研究思路。

“脾气亏损-线粒体能量代谢障碍-艾滋病相关疲乏”的病机关联假说构建

疲乏是艾滋病病毒(HIV)感染者的典型症状,严重影响了该类患者的正常工作与生活。线粒体作为机体的“能量工厂”,其内发生的能量代谢维持机体日常生命活动。常规的抗病毒治疗和HIV病毒本身均会造成线粒体损伤,能量代谢障碍易导致疲乏症状。脾脏是HIV感染后机体主要受损脏腑,脾气亏损伴随艾滋病发病的全过程,中医认为脾气散精,是五脏六腑能量之源,人的生长发育、生命活动都要以脾气充盈为前提条件。且根据现代研究,脾与线粒体能量代谢在来源、功能等方面契合度较高。故本文以艾滋病关键病机脾气亏损为契机,提出“脾气亏损-线粒体能量代谢障碍-艾滋病相关疲乏”的病机关联假说,同时推测以健脾益气法为指导思想研发的益艾康胶囊治疗艾滋病相关疲乏的潜在机制,为艾滋病相关疲乏的治疗提供新思路。

中医情志理论在艾滋病防治中的作用初探

艾滋病作为一种烈性传染病,目前尚未发现有效治愈方法。大量研究表明,情志因素与艾滋病的发生发展密切相关。心理治疗在艾滋病防治中的显著疗效也日渐凸显。笔者通过对中医情志理论的基本内涵、情志与艾滋病的关系以及情志理论在艾滋病防治中的作用进行归纳和探讨,将情志理论与艾滋病的病因病机和辨证论治结合分析,提出情志理论可运用于指导艾滋病防治的学术观点,以期将中医理论与西医疾病防治有机结合,赋予中医理论的现代科学意义。

基于对通透性及紧密连接的影响探讨益艾康对HIV/AIDS肠黏膜屏障损伤的保护作用

目的通过观察益艾康对IFN-γ损伤肠黏膜屏障通透性及紧密连接的影响,探讨益艾康对HIV/AIDS肠黏膜屏障损伤的保护作用。方法利用IFN-γ刺激Caco-2单层细胞屏障模拟体内HIV损伤肠黏膜的病理过程,实验分为空白对照组、IFN-γ组、益艾康组、IFN-γ+益艾康组,观察不同时间点下列指标变化:跨细胞膜电阻抗值变化;荧光素钠透过率改变;紧密连接蛋白ZO-1蛋白及mRNA变化。结果与空白对照组相比,IFN-γ干预不同时间点TEER值均有所降低,48h降低最为明显(P<0.05),与IFN-γ组相比,益艾康在不同时间点均能提高Caco-2细胞单层TEER值;IFN-γ干预不同时间后,荧光素钠的渗漏量均由不同程度的增加,48h后降低已非常明显,与空白对照相比差异显著(P<0.05),与IFN-γ组相比,益艾康能明显降低荧光素钠的渗漏量(P<0.05);与空白对照组相比,IFN-γ能引起Caco-2细胞单层ZO-1蛋白及mRNA表达下降(P<0.05),而益艾康含药血清能提高肠黏膜屏障损伤模型ZO-1蛋白及mRNA的表达(P<0.05)。结论益艾康能降低IFN-γ引起的肠黏膜屏障的通透性增加,维持肠黏膜屏障的完整性,其机制与抑制紧密连接蛋白ZO-1的表达下降从而维持正常的紧密连接相关。

通窍化痰汤治疗阿尔茨海默病30例

目的:观察通窍化痰汤治疗阿尔茨海默病的疗效。方法:将60例患者随机分为两组,治疗组30例以通窍化痰汤治疗,对照组30例以脑复康治疗,疗程3个月。结果:总有效率治疗组为83.33%,对照组为66.67%,两组比较,差异有显著性意义(P<0.05);治疗组MMSE、ADL评分治疗前后及与对照组治疗后比较,差异有显著性或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论:通窍化痰汤治疗阿尔茨海默病疗效显著。

苓桂术甘汤对阿尔茨海默病(AD)发病机制的实验研究

目的:研究苓桂术甘汤对Aβ诱导小胶质细胞细胞生成和释放致炎因子IL-1β、IL-6及TNF-α的抑制作用。方法:体外培养BV-2小胶质细胞株,Aβ1-42诱导BV-2细胞活化,苓桂术甘汤不同浓度组(10×10-3、1×10-3、0.1×10-3、0.01×10-3、1×10-6、0.1×10-6 kg/L)进行干预,ELISA法检测各组IL-1β、IL-6及TNF-α含量。结果:与模型组比较,苓桂术甘汤组细胞上清中IL-1β、IL-6及TNF-α含量均有降低,以高浓度(10×10-3、1×10-3)最为显著(P<0.01)。结论:苓桂术甘汤对活化后BV-2细胞IL-1β、IL-6及TNF-α的的分泌有显著的抑制作用,良好的抗炎作用可能是苓桂术甘汤治疗老年性痴呆的重要依据和机理之一。

清肺培元颗粒联合西药治疗老年肺炎随机平行对照研究

目的观察清肺培元颗粒联合西医治疗老年肺炎(痰热壅肺证)的临床疗效。方法 72例老年肺炎患者随机分为两组,在西医治疗基础上,治疗组联合清肺培元颗粒治疗,对照组联合清肺培元颗粒模拟剂治疗。疗程14 d,观察比较治疗后两组患者的临床症状、体征及不良反应发生情况。结果观察组证候总积分明显低于对照组(P<0.05);观察组在改善咳嗽、咯痰、胸闷等方面有明显优势(P<0.05),但在缓解发热方面无显著优势(P>0.05);两组治疗过程中均无不良反应病例出现。结论清肺培元颗粒能明显改善老年肺炎痰热壅肺证患者临床症状及体征,减少咳嗽的发作次数,改善咯痰的痰色、痰质、痰量及胸闷的程度,且无不良反应出现。

苓桂术甘汤儿科临床治验举隅

苓桂术甘汤出自《伤寒论》,原为治疗伤寒误用吐下所致脾胃气虚水气证和胃脘痰饮证而设,方中茯苓淡渗利水,宁心益气;桂枝调和营卫,化气通阳;白术健脾燥湿,温运中阳;甘草补中益气,调和诸药,四药合用,温阳健脾以治其本,祛痰化饮以治其标,标本兼顾,相得益彰。笔者在临床中运用该方治疗儿科多种疾病,取得满意疗效,现举验案如下。

HIV感染者和AIDS患者外周血T淋巴细胞活化亚群与病毒载量的相关性

目的探讨HIV感染者和AIDS患者外周血T淋巴细胞活化亚群与病毒载量相关性。方法 2012年6-8月选择河南省某AIDS高发地区HIV感染者322例和AIDS患者87例为研究对象,分别采用流式细胞仪和全自动病毒载量仪检测HIV感染者和AIDS患者外周血T淋巴细胞及其活化亚群和血浆病毒载量,根据病毒载量水平将研究对象分为Ⅰ-Ⅳ组。结果HIV感染者与AIDS患者CD_3^+T细胞相对值、CD_(28)^+/CD_4^+比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HIV感染者淋巴细胞绝对值和相对值、CD_3^+T细胞绝对值、CD_3^+CD_8^+T细胞绝对值、CD_3^+CD_4^+T细胞绝对值和相对值、CD_3^+CD_4^+CD_8^+T细胞绝对值均高于AIDS患者,CD_3^+CD_8^+T细胞相对值低于AIDS患者,辅助性T细胞与抑制性T细胞比值(H/S)、CD_(28)^+/CD_8^+高于AIDS患者,CD_(38)^+/CD_8^+低于AIDS患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组淋巴细胞绝对值和相对值、CD_3^+T细胞相对值、CD_3^+CD_8^+T细胞相对值、CD_3^+CD_4^+T细胞绝对值和相对值及H/S、CD_(28)^+/CD_4^+、CD_(28)^+/CD_8^+、CD_(38)^+/CD_8^+比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。CD_3^+T细胞相对值、CD_3^+CD_8^+T细胞相对值及CD_(38)^+/CD_8^+与病毒载量水平呈正相关(r_s=0.128、0.291、0.409,P<0.05);CD_3^+CD_4^+T细胞绝对值和相对值、H/S、CD_(28)^+/CD_4^+、CD_(28)^+/CD_8^+与病毒载量水平呈负相关(r_s=-0.246、-0.318、-0.297、-0.184、-0.204,P<0.05)。结论 HIV感染者和AIDS患者T淋巴细胞活化过程发生变化;随着病毒载量水平变化,HIV感染者和AIDS患者的T淋巴细胞活化亚群水平也不同。

益艾康治疗对HIV-1感染者CCR5、CXCR4表达及T细胞活化水平的影响

目的:研究益艾康治疗对艾滋病病毒感染者辅助受体CCR5/CXCR4及CD38、HLA-DR表达的影响,探讨T细胞活化水平与辅助受体表达的关系。方法:收集65例HIV感染者及10例健康对照抗凝全血,用流式细胞技术检测各样本CD8^+T细胞表面CCR5、CXCR4、CD38、HLA-DR表达水平,并分析益艾康治疗对其表达的影响。结果:HIV感染者CD8^+T细胞表面CXCR4表达明显低于健康对照,CD8^+T细胞活化水平较健康对照明显升高,CCR5/CXCR4表达水平及CD8^+T细胞活化状态相关,益艾康治疗可改善HIV感染者辅助受体表达及细胞活化水平。结论:HIV感染者辅助受体CCR5/CXCR4表达水平与机体对HIV的免疫反应密切相关,益艾康治疗可在一定程度上改善艾滋病病毒感染后的免疫损伤。

HIV/AIDS患者免疫激活相关分子的表达及其对疾病进程的影响

目的探讨HIV/AIDS患者外周血免疫激活相关分子的表达特征,分析其与艾滋病疾病进程的相关性。方法采用流式细胞仪检测80例HIV/AIDS患者和20例健康人外周血T淋巴细胞亚群及CD8+T淋巴细胞表面CD38、HLA-DR、Ki67分子的表达水平,比较健康人群与HIV/AIDS患者以及HIV/AIDS患者不同CD4+T分组间CD38+/CD8+、HLA-DR+/CD8+、Ki67+/CD8+的差异,分析CD8+T淋巴细胞CD38、HLA-DR、Ki67分子表达与CD4+T淋巴细胞及病毒载量之间的相关性。结果与健康人群相比,HIV/AIDS患者CD38+/CD8+、HLA-DR+/CD8+、Ki67+/CD8+明显升高(P<0.05);HIV/AIDS患者不同CD4+T分组间比较显示,随着CD4+T水平的降低,CD38+/CD8+、HLA-DR+/CD8+、Ki67+/CD8+逐渐升高,且艾滋病患者(CD4<200 cells/ml)明显低于慢性进展者(CD4≥200 cells/ml);CD38+/CD8+、HLA-DR+/CD8+、Ki67+/CD8+与血浆病毒载量均呈明显正相关。结论HIV感染能明显提高外周血CD38、HLA-DR和Ki67等分子的表达水平,且随着艾滋病疾病的进展,CD38、HLA-DR和Ki67的表达逐步升高,免疫系统异常激活的不断加剧与艾滋病疾病进程密切相关。

病症证结合在中医药防治艾滋病中应用探讨

病、症、证结合是中医药临床辨治的重要依据,而病、症、证在临床中又有不同的内涵,艾滋病作为一种新发感染性疾病,其发病机制及临床表现与中医病、症、证联系密切。通过病症证结合在中医药防治艾滋病应用的理论基础探讨及在中医药防治艾滋病临床实践分析,显示病症证结合在中医药防治艾滋病具有广阔的应用前景,中医药防治艾滋病团队应加以系统研究,以期提升中医药防治艾滋病临床水平。

健脾益气方对HIV/AIDS患者病毒载量与IL-2、IL-13、IFN-γ变化影响及相关性分析

目的:探讨健脾益气方治疗HIV/AIDS患者的作用机制。方法:采用Real-time PCR与流式荧光法检测病毒载量(VL)与IL-2、IL-13、IFN-γ变化情况,分析不同VL水平细胞因子含量差异及其相关性。结果:治疗后细胞因子水平相比治疗前均有所升高;VL分组为Ⅰ组VL=0,Ⅱ组:VL=20copies/ml,Ⅲ组:20<VL<1000 copies/ml,Ⅳ组:VL>1000 copies/ml。IL-13在治疗前后差异有统计学意义,并随着VL的增加IL-13水平增高;VL与IL-13的相关性分析显示,在治疗前后均呈现中度正相关关系。结论:健脾益气方可影响HIV/AIDS患者IL-2、IL-13和IFN-γ水平,但对VL影响较小;随着病毒载量增加,血浆IL-13水平变化趋势与之相同。

痹痛灵颗粒对胶原诱导关节炎滑膜白介素-17mRNA表达的影响

目的:观察中药复方痹痛灵颗粒对胶原诱导类风湿性关节炎大鼠关节滑膜组织微血管密度及白介素-17(IL-17)mR-NA表达的影响。方法:建立胶原诱导大鼠类风湿性关节炎模型,通过免疫组化测量微血管密度,实时荧光PCR法检测量关节滑膜组织IL-17 mRNA表达量,评价痹痛灵颗粒治疗类风湿关节炎抗血管新生的作用机理。结果:痹痛灵颗粒可降低造模大鼠关节滑膜组织微血管密度,下调关节滑膜组织IL-17 mRNA过量表达。结论:痹痛灵颗粒对胶原诱导大鼠类风湿性关节炎血管新生有一定的治疗作用,其作用机理与下调关节滑膜IL-17 mRNA高表达可能有关。

人类免疫缺陷病毒1感染者外周血CD_8^+ T淋巴细胞表面CD_(38)和人类白细胞抗原DR表达的研究

目的探索人类免疫缺陷病毒(HIV)-1感染者外周血CD_8^+T淋巴细胞表面CD_(38)(CD_(38)^+/CD_8^+)、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)(HLA-DR^+/CD_8^+)表达水平的变化及其与疾病进展的关系。方法选取2012年5-8月河南省淮阳县中医院、西平县中医院、驻马店驿城区中医院、泌阳县中医院、博爱县中医院收治的经河南省疾病预防控制中心确诊的HIV-1感染者409例为HIV-1感染组,河南中医学院第一附属医院体检健康者28例为对照组。采用流式细胞仪检测外周血CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞计数和百分比,计算CD_4^+/CD_8^+,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血浆病毒载量,应用全血染色、流式细胞术检测HIV-1感染者CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+。根据CD_4^+T淋巴细胞计数分为4组:<200 cells/μl组87例、200~<350 cells/μl组119例、350~<500 cells/μl组99例、≥500 cells/μl组104例,比较不同CD_4^+T淋巴细胞计数者间CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+。结果 HIV-1感染组CD_4^+T淋巴细胞计数、百分比低于对照组,CD_8^+T淋巴细胞计数、百分比高于对照组(P<0.001);HIV-1感染组CD_4^+/CD_8^+低于对照组(P<0.001)。HIV-1感染者血浆病毒载量为(38 415±1 067)copies/ml。Pearson相关分析表明,HIV-1感染者CD_4^+T淋巴细胞计数与血浆病毒载量呈负相关(r=-0.246,P<0.001);CD_(38)^+/CD_8^+与CD_4^+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.260,P<0.001);CD_(38)^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关(r=0.409,P<0.001);HLA-DR^+/CD_8^+与CD_4^+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.225,P<0.001);HLA-DR^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关(r=0.378,P<0.001)。200~<350 cells/μl组、350~<500 cells/μl组、≥500 cells/μl组CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+低于<200 cells/μl组(P<0.05)。结论 HIV-1感染者CD_4^+T淋巴细胞计数、百分比降低,CD_8^+T淋巴细胞计数、百分比升高,CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关。CD_4^+T淋巴细胞计数、CD_8^+T淋巴细胞计数结合CD_8^+T淋巴细胞的活化水平可以更全面地反映HIV-1感染者免疫功能受损的程度,HIV-1感染后CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+的变化可作为评价疾病进展的新指标。

MT_1受体在无蹼壁虎肝脏的分布

目的为观察褪黑激素受体1(melatoninreceptor1,MT1)免疫反应在无蹼壁虎肝脏分布。方法我们采用苏木素染色和免疫荧光单标的方法。结果发现无蹼壁虎肝脏主要由肝细胞和肝脏库普弗细胞组成;肝细胞单位区域细胞数右叶(rightlobe)(217·159±3·571个/mm2)较左叶(84·317±2·072个/mm2)明显多(P<0·05),库普弗细胞单位区域细胞数左叶(leftlobe)(50·276±2·257个/mm2)较右叶(18·241±1·563个/mm2)明显多(P<0·05);左、右叶库普弗细胞数占细胞总数的百分率明显不同(左叶:4·054%±1·642%,右叶:1·261%±0·536%)(P<0·05)。免疫组化结果显示MT1受体在肝细胞和库普弗细胞均有表达。MT1免疫阳性反应主要位于细胞膜和细胞质。MT1受体阳性反应肝细胞单位区域细胞数右叶(72·381±3·614细胞数/mm2)较左叶(38·153±2·684细胞数/mm2)明显多(P<0·05);库普弗细胞阳性反应单位区域细胞数左叶(12·541±0·572细胞数/mm2)较右叶(6·443±0·761细胞数/mm2)明显多(P<0·05)。MT1受体阳性反应细胞数在左、右叶库普弗细胞也存在明显的部位差异(P<0·05)。结论上述结果提示褪黑激素经褪黑激素受体的介导对无蹼壁虎肝脏左、右叶肝细胞和库普弗细胞生理功能的调控存在差异。