嗜水气单胞菌孔蛋白OmpF重组表达及其免疫原性分析

气单胞菌外膜蛋白 OmpF 是β-桶状结构的孔蛋白,参与渗透压环境适应调控,在人鱼共患病原气单胞菌属中保守性较高,作为免疫检测靶点具有较高的研究价值。通过人工合成得到了 GenBank 已发表的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)OmpF 基因片段,将其插入质粒 pET-28a(+)后转入大肠杆菌 BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达出分子量为 40 kD 左右的重组蛋白。经过优化表达温度和 IPTG 诱导浓度等后,重组蛋白主要以包涵体的形式表达。采用纯化的包涵体免疫BALB / c 小鼠,ELISA 结果表明小鼠血清与煮沸灭活的 11 株气单胞菌中的 10 株(10/11)均有特异性交叉反应,效价在 1∶81 000,与副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌、鳗弧菌、哈维氏弧菌及地衣芽孢杆菌无交叉反应。上述结果表明重组蛋白 OmpF 具有较好的免疫原性和气单胞菌保守性,可以用于制备气单胞菌交叉型抗体。

弧菌外膜蛋白OmpK多肽免疫原制备及其免疫原性研究

外膜蛋白OmpK在弧菌属中保守性大于79%,是有良好应用前景的诊断和疫苗抗原,但弧菌属保守并且暴露在膜外的OmpK肽段有限,多肽免疫原免疫效果相比完整蛋白可能更具优势。采用Protein蛋白序列分析软件分析弧菌外膜蛋白OmpK,筛选出2条在弧菌属内广泛保守,同时亲水性和表面暴露性较好的多肽P1和P2。将合成的多肽与BSA蛋白偶联制备成多肽免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。间接ELISA结果显示,2条多肽免疫原抗血清对OmpK蛋白的效价均达到1∶81000,对弧菌菌体的效价P1-BSA免疫血清高于P2-BSA免疫血清。通过Western blot分析发现,多肽的抗血清均能与重组OmpK蛋白(27 kDa)以及测试的7株副溶血弧菌和1株创伤弧菌全菌蛋白发生免疫反应,P1多肽抗血清与2株气单胞菌,P2多肽抗血清与3株肠杆菌,存在不同程度的交叉反应。结果表明,OmpK的P1和P2多肽是弧菌共有的抗原表位,免疫血清对菌体识别较弱的原因有待进一步研究。