猪源Rab基因shRNA文库与稳定细胞株的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

【目的】探究Rab家族蛋白在猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)感染宿主细胞中的作用。【方法】以猪肾上皮细胞(PK15)为试验模型,构建Rab基因shRNA文库,并用嘌呤霉素筛选获得稳定的能够抑制猪源Rab基因表达的细胞株。用实时荧光定量PCR检测细胞敲减效率,通过流式细胞术检测敲减Rab基因对PRV增殖的影响;用Western blotting检测PRV-gB蛋白表达量,使用实时荧光定量PCR检测敲减Rab基因后PRV-gB、PRV-TK基因以及相关细胞炎性因子表达量。【结果】试验成功构建包含13种Rab基因敲减细胞系的shRNA文库。流式细胞术检测结果显示敲减Rab基因能显著抑制PRV-GFP增殖(P<0.05);病毒滴度与Western blotting检测结果表明,敲减Rab基因极显著抑制子代病毒的产生以及PRV-gB蛋白的表达(P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示,敲减Rab基因会显著或极显著抑制PRV-gB、PRV-TK基因表达(P<0.05;P<0.01);敲减Rab14和Rab27基因后细胞中IFN-β、ISG15、IL-1β、IL-18基因表达量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。【结论】敲减Rab基因能够抑制PRV增殖。研究结果为进一步研究Rab基因在PRV生活周期中发挥的作用奠定基础。

阿奇霉素联合特布他林对支原体肺炎患儿体液免疫及炎症水平的影响

目的阿奇霉素联合特布他林对支原体肺炎(MPP)患儿体液免疫及炎症水平的影响。方法选取2020年3月-2021年3月在本院确诊的98例MPP患儿,随机把所有患儿分成观察组、对照组,各49例,对照组采用阿奇霉素治疗,观察组采用阿奇霉素联合特布他林进行治疗,均持续治疗14d。比较两组患儿临床疗效、临床症状、体液免疫及炎症水平。结果观察组治疗的有效率明显高于对照组的有效率(χ^(2)=4.346,P=0.037);观察组患儿各种症状消失和住院时间均更短(P<0.05)。治疗后两组患儿免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)均低于治疗前,但观察组高于对照组(P<0.05)。治疗后两组患儿血清白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(CRP)水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。结论阿奇霉素联合特布他林临床疗效较好,可以改善MPP患儿体液免疫及炎症水平。

干扰素调节因子敲减细胞系的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

旨在揭示干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRFs)对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)增殖的影响,本研究通过shRNA技术构建敲减IRF 1-9的PK15细胞系,并检测其敲减效率。采用流式细胞术以及滴度测定检测敲减IRF 1-9后PRV的增殖情况;利用RT-qPCR技术检测PRV感染细胞后PRV-gB、IFN-β、ISG-15和IL-6的mRNA表达水平;Western blot技术检测PRV感染细胞后gB蛋白的表达水平。敲减效率测定结果显示,PK15细胞中的IRF 1-9 mRNA表达水平均有显著降低;流式细胞术及滴度测定结果表明,敲减IRF 1-9基因后有助于PRV的增殖;RT-qPCR及Western blot结果证明,敲减IRF 1-9基因后,PRV-gB mRNA及蛋白表达水平均有显著提高;细胞炎性因子的mRNA表达水平检测结果发现,敲减IRF 1-9抑制PRV诱导的IFN-β、ISG-15以及IL-6 mRNA表达。综上所述,IRF 1-9是PRV在PK-15细胞内复制的宿主限制因子。

支气管哮喘患儿血清中E选择素、可溶性细胞黏附分子-1和白细胞介素-25、-33的变化及其意义

目的探讨支气管哮喘患儿血清中可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、E选择素(sE-SLT)、白细胞介素-25(IL-25)、白细胞介素-33(IL-33)的变化与其病情的关系。方法选取2015年11月至2018年6月在郑州大学附属儿童医院确诊的支气管哮喘急性发作期患儿作为急性期组(n=90)、哮喘缓解期患儿为缓解期组(n=60),同期健康体检儿童作为对照组(n=60)。检测3组的血清sE-SLT、sICAM-1、IL-25及IL-33、第1秒用力呼气容积(FEV1)、呼气峰值流速(PEF)、用力肺活量(FVC)并进行比较。结果急性期组的血清sE-SLT、sICAM-1、IL-25及IL-33明显高于缓解期组和对照组(P<0.05);缓解期组的血清sE-SLT、sICAM-1、IL-25及IL-33明显高于对照组(P<0.05);急性期组的FEV1、PEF、FVC明显低于缓解期组和对照组(P<0.05);缓解期组的FEV1、PEF、FVC与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);重度组的血清sE-SLT、sICAM-1、IL-25及IL-33水平高于轻度组和中度组(P<0.05);中度组的血清sE-SLT、sICAM-1、IL-25及IL-33水平高于轻度组(P<0.05);支气管哮喘急性期组患儿血清sE-SLT、sICAM-1、IL-25及IL-33水平与FEV1、PEF测定值均呈负相关(P<0.05)。结论血清sE-SLT、sICAM-1、IL-25及IL-33水平升高与支气管哮喘患儿病情发作及其严重程度有关。

支原体肺炎病儿体内Toll样受体4、CXCL8、可溶性髓系细胞触发受体-1水平变化及临床意义

目的观察支原体肺炎病儿体内Toll样受体4(TLR4)、CXCL8、可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)水平,并分析其临床意义。方法选取2016年12月至2017年10月在郑州大学附属儿童医院接受治疗的支原体肺炎病儿100例为观察组,并按不同疾病程度再分为重症组35例和非重症组65例;选取同期接受体检的健康儿童100例为对照组。观察两组及不同疾病程度组TLR4、CXCL8、sTREM-1水平、炎症因子和肺功能指标的差异,分析各指标与炎症因子和肺功能的相关性。结果支原体肺炎病儿的TLR4[(3.48±0.67)vs.(1.03±0.02)ng/mL]、CXCL8[(288.67±12.65)vs.(148.53±19.12)pg/mL]、sTREM-1[(55.36±5.69)vs.(18.42±3.12)pg/mL]、TNF-α[(24.55±4.18)vs.(9.06±1.65)pg/mL]、IL-6[(45.25±9.58)vs.(9.06±1.65)pg/mL]、hs-CRP[(5.63±1.35)vs.(1.68±0.72)mg/L]水平均高于对照组(P<0.05),FVC、MMEF、PEF水平低于对照组(P<0.05);重症支原体肺炎病儿的TLR4、CXCL8、sTREM-1、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平高于非重症组(P<0.05),FVC、MMEF、PEF水平低于非重症组(P<0.05);支原体肺炎病儿的TLR4、CXCL8、sTREM-1水平与炎症因子水平正相关,与肺功能水平负相关。结论支原体肺炎病儿的TLR4、CXCL8、sTREM-1水平较高,与炎症因子和肺功能指标相关,且受疾病严重程度的影响。

伴有MP感染的大叶性肺炎患儿BALF中细胞因子水平变化及其意义

目的探讨伴有肺炎支原体(MP)感染的大叶性肺炎患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子的水平变化及其意义。方法选取我院确诊的大叶性肺炎患儿140例,根据MP-DNA检测结果分为A组96例(MP-DNA检测阳性)、B组44例(MP-DNA检测阴性),收集时间2016年1月-2017年6月,对比两组BALF中相关细胞因子,并根据临床肺部感染评分(CPIS)进行亚组分析。结果 A组患儿的BALF中的IL-17、IL-33、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、HMGB1的水平均显著的高于B组患儿,差异均具有统计学意义(P <0. 05); A组的轻症、重症患儿的BALF中的IL-17、IL-33、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、HMGB1的水平均分别高于B组的轻症、重症患儿(P <0. 05); A组和B组的重症患儿BALF中的IL-17、IL-33、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、HMGB1的水平均显著的高于本组的轻症患儿(P <0. 05)。结论伴有MP感染的大叶性肺炎患儿BALF中细胞因子水平较不伴有MP感染的大叶性肺炎患儿显著升高,并且随着病情加重而升高。

脾氨肽口服冻干粉治疗儿童哮喘合并反复呼吸道感染的效果及其对炎症因子的影响

目的探讨脾氨肽口服冻干粉治疗儿童支气管哮喘合并反复呼吸道感染(RRI)的临床效果及其对炎症因子、免疫功能的影响。方法选取2018年6月~2019年10月河南省儿童医院呼吸科门诊收治的74例支气管哮喘合并RRI患儿作为研究对象,采用随机数字表法将其分为试验组和对照组,每组各37例。对照组患儿仅给予吸入性糖皮质激素(ICS)治疗,试验组患儿在ICS基础上联合脾氨肽口服冻干粉治疗。比较两组的临床治疗效果、血免疫球蛋白E(IgE)、白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)水平及淋巴细胞亚群变化。结果试验组患儿的呼吸道感染次数、住院次数、哮喘急性发作次数、速效β2受体激动剂(SABA)使用次数均少于对照组,抗生素使用时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组患儿治疗后的血IgE、IL-6、IL-17水平低于治疗前及对照组治疗后,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组患儿治疗后的外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)淋巴细胞百分比高于治疗前及对照组治疗后,差异有统计学意义(P<0.05)。结论支气管哮喘合并RRI患儿应用ICS联合脾氨肽口服冻干粉治疗,可有效预防RRI,减少哮喘急性发作次数,提高哮喘控制水平,降低血IgE及炎症因子IL-6、IL-17水平,提高免疫功能。

痰热清联合头孢呋辛钠治疗儿童支气管肺炎的疗效观察

支气管肺炎是儿科临床常见的呼吸道炎性疾病,发病率较高,且以春冬两季为主要发病季节;临床表现为发热、咳嗽、咳痰、肺部啰音等,部分患儿伴有喘息、憋闷。临床上以抗生素治疗为主,但单一用药整体疗效不佳,且容易出现耐药,不良反应较多[1-2]。近年来,随着中医药临床研究的深入,中成药在小儿肺炎中逐步应用并取得良好效果。本文对本院收治的110例支气管肺炎患儿进行研究,探讨痰热清联合头孢呋辛钠的临床疗效,现报道如下。

支气管哮喘患儿不同时期血清白介素-17、白介素-27水平变化及意义

目的探讨支气管哮喘患儿不同时期血清白介素-17(IL-17)、白介素-27(IL-27)水平的变化及其与肺功能的相关性。方法随机选取2018年6月至2019年12月于我院就诊的支气管哮喘患儿共150例(急性发作期50例、慢性持续期50例、临床缓解期50例)作为试验组,另随机选取于我院进行健康体检的健康儿童50名作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测所有入组者外周血清IL-17、IL-27浓度,同时对可配合完成肺功能检查者进行肺通气功能检测,并对结果进行分析。结果哮喘患儿血清IL-17水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17水平与肺功能主要指标FEV_(1)、FVC呈负相关。哮喘患儿IL-27水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-27水平与肺功能主要指标FEV_(1)、FVC呈正相关。结论血清IL-17、IL-27水平可作为评价儿童支气管哮喘控制水平的参考指标。

儿童闭塞性细支气管炎30例临床分析

闭塞性细支气管炎（bronchiolitis obliterans,BO）是一种较少见的儿童慢性阻塞性肺部疾病,下呼吸道的严重损伤后导致不同程度的炎症反应和瘢痕形成,最终导致细支气管的狭窄和（或）完全闭塞。在儿童中,最常见的原因是感染后闭塞性细支气管炎（post-infections bronchiolitis obliterans,PIBO）,部分与结缔组织疾病、吸入有毒物质、骨髓/器官移植等有关。

槐杞黄颗粒对喘息性支气管炎患儿免疫功能影响分析

目的:探讨喘息性支气管炎患儿应用槐杞黄颗粒治疗的价值。方法:选择2016年1月至2017年12月郑州大学附属儿童医院收治的70例喘息性支气管炎患儿,采用随机数表法分为2组,各35例。对照组予以孟鲁司特钠咀嚼片,观察组加用槐杞黄颗粒,比较两组免疫功能、临床症状。结果:治疗后,对照组IL-4与Ig E水平高于观察组,IFN-γ与Ig A水平低于观察组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组临床症状改善时间长于观察组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:针对喘息性支气管炎患儿,采用槐杞黄颗粒可调节免疫功能,改善临床症状,促进健康恢复。

黄芩苷通过Notch通路纠正细支气管炎模型小鼠Th17/Treg失衡

目的:探讨Notch通路在黄芩苷纠正细支气管炎(BC)模型小鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡中的作用。方法:将40只BALB/c小鼠随机分组为正常组、BC组、BC+黄芩苷(200 mg/kg)组和BC+黄芩苷(200 mg/kg)+Notch激活剂Jagged1(1 mg/kg)组,每组10只。呼吸道合胞病毒(RSV)感染1 h后开始给药,连续7 d。HE染色观察肺组织病变并评分,流式细胞术测定肺组织Th17和Treg细胞比例,Western blot检测Notch通路相关蛋白及转录因子叉头框蛋白P3(FOXP3)和视黄酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)的表达情况,ELISA检测转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素22(IL-22)、IL-17和IL-10的水平。结果:BC小鼠肺泡壁和肺泡腔内可见较多炎症浸润,肺泡壁增宽和血管破坏,黄芩苷治疗可明显减轻上述组织损伤,而Notch激活剂Jagged1可逆转黄芩苷的改善作用。与正常组相比,BC组病理评分、RSV载量、Th17细胞比例、IL-17和IL-22水平及RORγt、activated Notch1、Hes1和Hey2蛋白水平升高,Treg细胞比例、IL-10和TGF-β水平及FOXP3蛋白水平降低(P<0.05);加入黄芩苷后上述指标均被逆转(P<0.05),而BC+黄芩苷+Jagged1组则阻断黄芩苷对上述指标的改善作用(P<0.05)。结论:黄芩苷可能通过Notch通路纠正Th17/Treg失衡来发挥对BC的治疗作用。

羧甲淀粉钠联合补锌治疗小儿反复呼吸道感染合并支气管哮喘的效果及其对患儿免疫功能指标的影响

目的:观察羧甲淀粉钠联合补锌治疗反复呼吸道感染合并支气管哮喘患儿的效果及其对患儿免疫功能指标的影响。方法:选取120例反复呼吸道感染合并支气管哮喘患儿作为研究对象,采用随机数字表法将其分成观察组和对照组各60例。对照组给予缓解哮喘的药物和抗感染治疗,观察组在对照组基础上给予羧甲淀粉钠联合补锌治疗。(1)比较两组治疗总有效率;(2)比较两组治疗前后呼吸道感染次数、抗生素使用时间、哮喘发作时间;(3)比较两组治疗前后免疫功能指标(lg G、lg A、lg M、CD8+、CD4+及CD4+/CD8+)水平。结果:观察组治疗总有效率为95.00%(57/60),明显高于对照组的81.67%(49/60),差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后1年内的吸道感染次数明显少于对照组,抗生素使用时间、哮喘发作时间明显短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后的Ig G、Ig A、Ig M、CD4+水平及CD4+/CD8+均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后的CD8+水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在缓解哮喘和抗感染治疗基础上,采用羧甲淀粉钠联合补锌治疗小儿反复呼吸道感染合并支气管哮喘可明显提高治疗效果和改善患儿免疫功能指标。

毛细支气管炎患儿淋巴细胞亚群检测分析

目的分析毛细支气管炎患儿淋巴细胞亚群特点以及影响因素,评价检测的价值。方法前瞻性研究,筛选2015-02—2017-02间郑州儿童医院呼吸科住院患儿入组,诊断为毛细支气管炎的患儿50例,纳入观察组;同期,根据男女比例、年龄(±2个月),一对一选择诊断为肺炎患儿50例,纳入肺炎组;来院进行疫苗接种的健康婴幼儿50例纳入对照组。检测三组患儿淋巴细胞亚群,进行相关性分析。资料交给2位医师进行盲法诊断。结果观察组CD3^+低于肺炎组,观察组与肺炎组CD3^+、CD3^+CD4^+(Th)、Th/Ts低于对照组,观察组与肺炎组CD3^+CD8^+(Ts)、D4^+/CD8^+、CD3^+CD19^+高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。毛细支气管炎患儿年龄与CD3^+、CD3^+CD4^+(Th)、CD3^+CD8^+(Ts)、Th/Ts、CD4^+/CD8^+水平存在相关性,入院前病程与CD3^+、CD3^+CD8^+(Ts)、Th/Ts、CD4^+/CD8^+水平存在相关性,差异有统计学意义(P<0.05),但均为低、中度相关性。结论毛细支气管炎患儿淋巴细胞亚群检测用于鉴别诊断肺炎效果并不理想,指标可反映疾病发生、病程长短,但需要纠正年龄因素干扰。

儿童大叶性肺炎免疫功能检测

目的分析儿童大叶性肺炎免疫功能特点及在疾病发病机制中的作用,指导临床诊治。方法选择2014年2月—2017年2月间郑州儿童医院呼吸科病房收治的80例住院大叶性肺炎患儿作为研究对象,纳入病例组,另选择同期门诊进行疫苗接种的小儿50例入组,纳入对照组,病例组按照临床肺部感染评分(CPIS)进行严重程度评价,其中分为轻症组(n=54)、重症组(n=26)两个亚组。入院首日或进行门诊疫苗接种的当日采血进行免疫功能指标检测。结果轻症组、病例组外周血淋巴细胞计数、CD4^+/CD8^+、NK、IL-2、IL-8、IL-10、IgA、IgG、IgM水平差异有统计学意义(P<0.05),病例组合计与对照组外周血淋巴细胞计数、CD4^+/CD8^+、IL-2、IL-8、IL-10、IgA、IgG、IgM水平差异有统计学意义(P<0.05)。病例组免疫功能指标与CPIS评分进行相关性分析,结果显示外周血淋巴细胞计数、CD4^+/CD8^+、NK、IL-2、IL-8、IL-10、IgA、IgG、IgM水平均与CPIS评分存在相关性,其中IL-2、IL-10存在负相关,按照相关性绝对值从高到低前5位分别为NK、IL-2、淋巴细胞计数、IL-8、CD4^+/CD8^+。结论儿童大叶性肺炎发生、进展与免疫功能变化关系密切,免疫功能指标变化越显著,病情越严重,需重视免疫功能的检测,预测重症化风险,对于出现免疫紊乱的患者,有必要进行免疫治疗。

小儿定喘口服液联合硫酸沙丁胺醇治疗小儿轻中度支气管哮喘的临床研究

目的探讨小儿定喘口服液联合硫酸沙丁胺醇治疗小儿轻中度支气管哮喘的临床疗效。方法选取2022年7月—2023年7月河南省儿童医院收治的轻中度支气管哮喘患儿90例,随机分为对照组(45例)和治疗组(45例)。对照组患者雾化吸入硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂,100µg/次,1次/6 h。治疗组在对照组的基础上口服小儿定喘口服液,10 mL/次,3次/d。两组连服药7 d。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者症状改善时间,血清超氧化物歧化酶(SOD)、内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(INF-γ)、降钙素原(PCT)和血白三烯C4(LTC4)水平,及不良反应情况。结果治疗后,治疗组患者临床总有效率为97.78%,明显高于对照组(82.22%,P<0.05)。治疗后,治疗组症状改善时间明显早于对照组(P<0.05)。治疗后,两组SOD和INF-γ水平明显升高,而ET、NO、IL-6、PCT、LTC4水平明显降低(P<0.05),且治疗组这些指标水平明显好于对照组(P<0.05)。治疗组不良反应发生率(6.67%)明显低于对照组(20.00%)(P<0.05)。结论硫酸沙丁胺醇联合小儿定喘口服液治疗小儿轻中度支气管哮喘,可有效改善氧化应激反应,并减弱支气管炎性反应。

C57BL/6NcGAS基因敲除鼠的构建及对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

胞质DNA感受器环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)能够识别胞质中的双链DNA(double stranded DNA,dsDNA),从而激活Ⅰ型干扰素信号通路抵御外界病原微生物的感染。为研究cGAS基因对猪伪狂犬病病毒(PRV)增殖的影响,本试验首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建cGAS基因敲除小鼠,通过H&E染色检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS^(-/-)小鼠肺脏和脑组织形态差异及感染PRV后肺脏组织中炎性浸润的影响;Q-PCR检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS^(-/-)小鼠感染PRV后对PRV-gB、PRV-TK、IFN-β、ISG15和ISG20基因mRNA表达水平的差异;Western blot及免疫组化检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS^(-/-)小鼠感染PRV后PRV-gB和PRV-gE蛋白表达水平;最后利用病毒PFU法检测cGAS敲除鼠对PRV子代病毒滴度的影响。Western blot检测结果显示在C57BL/6N小鼠肺脏和脑组织中cGAS基因敲除成功,同时H&E染色结果显示,cGAS基因敲除对其肺脏和脑组织形态无影响,但感染PRV后C57BL/6N-cGAS^(-/-)小鼠组织中的炎性浸润明显高于C57BL/6N;小鼠存活率试验结果显示,感染PRV后,C57BL/6N-cGAS^(-/-)与C57BL/6N小鼠相比,存活率显著降低。Q-PCR及Western blot检测显示C57BL/6N-cGAS^(-/-)小鼠可以促进PRV-gB和PRV-gE mRNA转录和蛋白表达;PFU测定结果显示,感染PRV后,C57BL/6N-cGAS^(-/-)小鼠体内的病毒滴度显著高于C57BL/6N小鼠。另外,Q-PCR结果显示该基因敲除小鼠可以抑制PRV感染引起的IFN-β、ISG15和ISG20基因mRNA表达上调。以上结果表明cGAS抑制PRV在小鼠体内的增殖。

西咪替丁与干扰素联合补锌对小儿轮状病毒感染性腹泻的疗效观察

为观察西咪替丁与干扰素联合补锌对小儿轮状病毒感染性腹泻的临床疗效,选取2017年8月至2019年10月收入我院的轮状病毒感染性腹泻患儿113例,将其分为观察组58例和对照组55例。对照组患儿采用西咪替丁联合干扰素治疗,观察组患儿采用西咪替丁与干扰素联合补锌治疗,观察2组患儿的临床疗效及血锌水平。结果显示,观察组患儿的总有效率为96.55%,高于对照组的78.18%,比较差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后2组患儿血锌水平均提高,且观察组显著高于对照组,比较差异有统计学意义(P <0.05)。结果表明,西咪替丁与干扰素联合补锌治疗小儿轮状病毒感染性腹泻,可有效改善腹泻临床症状,增加血锌水平,提高治疗效果。