黄芪多糖对细胞增殖及血管内皮细胞与白细胞粘附作用的影响

目的观察黄芪多糖对成纤维细胞与血管内皮细胞增殖效应及对血管内皮细胞与白细胞粘附作用的影响。方法采用MTT法观察体外培养的人正常成纤维细胞和慢性创面的创缘成纤维细胞的增殖和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖;采用虎红法、荧光免疫组化法在TNF刺激的HUVEC模型上观察黄芪多糖对人外周血中性粒细胞(PMN)、单核细胞TPH-1与HUVEC粘附及HUVEC表面粘附分子的表达。结果在244-156mg/L范围内,黄芪多糖作用下创缘成纤维细胞增殖率明显高于对照组(P<001);244-39mg/L黄芪多糖作用下人正常皮肤的成纤维细胞增殖率明显高于对照组(分别P<001,P<005);在975-156mg/L浓度范围内对HUVEC未表现出明显的增殖作用。在4h时25mg/L黄芪多糖组PMN与HUVEC的粘附量明显低于TNF组(P<005);25mg/L和100mg/L黄芪多糖组TPH-1与HUVEC的粘附量明显低于TNF组(分别P<001和P<005);作用12h时,25-100mg/L黄芪多糖组HUVEC与PMN粘附量明显低于TNF组(分别P<005,P<001和P<001);50mg/L和100mg/L也使TPH-1与HUVEC粘附量明显低于TNF组(分别P<001和P<005)。与TNF组比较,在25-100mg/L黄芪多糖作用4h能明显降低VCAM-1、ICAM-1的荧光强度(分别P<001和P<005)。作用12h,与TNF组比,50mg/L黄芪多糖组CD44的荧光强度明显低于TNF组(P<005)。

糖尿病大鼠创面愈合过程中成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成减少

目的:观察链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病复合创伤修复过程中成纤维细胞增殖与胶原合成的变化。方法:实验采用Wistar大鼠112只,随机分对照组和模型组。模型组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55mg/kg,3周后各组动物复合背部2.04cm2全厚皮切除形成伤口。观察创面愈合时间和愈合率;采用HE染色和免疫组化法观察成纤维细胞和增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平;采用苦味酸-天狼星红染色和图像分析技术观察创面Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及Ⅰ/Ⅲ型比值。结果:STZ诱发的糖尿病大鼠复合创伤后创面的愈合时间为(27.13±1.81)d,明显长于对照组(15.25±1.67)d,P<0.01;模型组在创伤第3、7和15d创面愈合率明显低于对照组,分别P<0.01;在3、5、7和9d模型组创面成纤维细胞数量和PCNA表达也明显少于对照组,分别P<0.05和P<0.01。两组创面在不同时点上Ⅰ型胶原分布均呈递增趋势,但对照组明显多于模型组,分别P<0.05;尽管对照组在创伤3、7dⅢ型胶原含量高于模型组,但在创伤3、7和11d模型组Ⅰ/Ⅲ胶原比值都明显低于对照组,分别P<0.01。结论:STZ可能通过影响创面细胞增殖和创面胶原合成,从而导致创面愈合迟缓。

益肾健脾养血通利方对Poresky PCOS大鼠模型的影响

目的 :观察益肾健脾养血通利方对PCOS大鼠的作用及其作用机制进行初步探讨。方法 :选用Poresky的PCOS动物 ,观察大鼠体重、动情周期、血清胰岛素和IGF I水平、性激素以及病理组织学的变化。结果 :本方能降低PCOS大鼠的体重、维持动情周期、降低血清胰岛素和IGF I水平 ;卵巢囊泡体积明显缩小 ,卵泡壁颗粒细胞层及黄体数量增加。结论 :益肾健脾养血通利方具有降低血清胰岛素水平、改善多囊卵巢征象、恢复排卵的作用。

鸡血藤黄酮类有效部位对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡与线粒体膜电位的影响

目的探讨鸡血藤黄酮类有效部位(spatholobus suberectus column extract,SSCE)对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。方法采用细胞增生试剂盒cell counting kit-8,观察SSCE对A549细胞增生的影响;通过Annexin V-PI双染法结合Hoechst33324染色检测SSCE对A549细胞凋亡的影响;应用Mitotracker Red及JC-1染色,检测SSCE对细胞线粒体及线粒体膜电位的影响。结果浓度高于40 mg/L的SSCE对A549细胞生长有抑制作用,且具有浓度时间依赖性。SSCE作用24 h后,A549细胞呈现典型的凋亡现象:膜磷脂酰丝氨酸外翻;细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光;线粒体由棒状变成颗粒状,并向细胞核聚集;线粒体膜电位下降。结论 SSCE可以诱导人非小细胞肺癌A549细胞发生凋亡,改变线粒体形态且降低其线粒体膜电位。

5种常用药物对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损模型形成的影响

目的探讨5种治疗银屑病的常用药物对咪喹莫特诱导的银屑病样模型皮损形成的影响。方法 Balb/c雄性小鼠,随机分为正常对照组、模型组、阿维A组、地塞米松组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷组、环孢素组。采用银屑病皮损面积和疾病严重程度(PASI)评分标准观察银屑病样小鼠模型皮损变化情况。光镜下观察皮损组织形态学变化、测量表皮层厚度;免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)反映表皮角质形成细胞增殖程度;检测皮损中CD3反映T淋巴细胞浸润程度。结果阿维A组、地塞米松组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷组小鼠皮损与同期模型组相比,皮损症状明显改善,各项指标PASI评分都低于同期模型组小鼠。环孢素对该模型皮损的形成呈现一个先抑制后促进的作用。环孢素组PASI积分高峰出现的时间比模型组晚2～3d。HE染色显示:与模型组小鼠比较,阿维A组、地塞米松组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷组小鼠皮肤表皮层较平整,角化不全的细胞明显减少,表皮层厚度明显低于模型组。而环孢素组与模型组小鼠皮损组织学表现相似,表皮层厚度与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色显示:阿维A组、地塞米松组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷组皮损组织中PCNA及CD3表达均显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01或<0.05)。环孢素组与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论临床治疗银屑病药物阿维A、地塞米松、甲氨蝶呤、雷公藤多苷可有效干预咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的形成,以上药物对银屑病样皮损的表皮细胞增殖及T淋巴细胞浸润均有抑制作用,因此该模型可作为进行研究银屑病药物研究的药理模型。但环孢素A对由咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型的反应不敏感。

凉血活血胶囊对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损的干预作用

目的:观察凉血活血胶囊对咪喹莫特诱导银屑病样小鼠模型中免疫异常的干预作用。方法:BALB/c雌性小鼠48只,随机分为正常对照组,模型组,凉血活血胶囊高、中、低剂量组和雷公藤多苷组。采用银屑病皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severity index,PASI)评分标准观察银屑病样小鼠模型皮损变化情况。光镜下观察皮损组织形态学变化,测量表皮层厚度。免疫组织化学法检测皮损中增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)反映表皮角质形成细胞增殖程度;检测CD3、CD11c、F4/80和Gr-1反映炎症浸润程度;检测CD31以反映血管增生情况。结果:模型组小鼠皮肤出现鳞屑红斑,皮损增厚;皮损组织表现为表皮棘层增厚,角化不全和微脓肿;真皮大量炎症细胞浸润,血管增生明显。与模型组比较,凉血活血胶囊组小鼠银屑病样皮损症状缓解,PASI分数降低,表皮角化不全减轻,角质形成增殖减少,T淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和单核细胞的浸润减弱,新生血管减少。结论:凉血活血胶囊可通过影响表皮细胞过度增殖、角化不全、炎症细胞浸润及血管增生而改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损变化。

疡愈涂剂对糖尿病大鼠创面Ⅰ、Ⅲ胶原合成及MMPs、TIMP-1表达的影响

目的:观察疡愈涂剂促进糖尿病迟缓愈合伤口的修复作用及其分子机制。方法:实验分为对照组、模型组、疡愈涂剂高、中、低剂量组。除对照组外,大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55mg/kg,造成实验性高血糖。30d后,各组动物复合背部全厚皮切除直径为1·6cm的伤口。分别观察疡愈涂剂对创面愈合时间、愈合率的影响;天狼星红染色法以及免疫组化法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值,并观察金属蛋白酶-1、-13(MMP-1、-13)、金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平及MMP-1、-13与TIMP-1比值。结果:疡愈涂剂各剂量组创面愈合时间明显短于模型组(P<0·01),愈合率明显高于模型组(P<0·01,P<0·05)。在伤口用药的第3、7、11d,高、中剂量组创面Ⅰ型胶原含量以及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值显著高于模型组(P<0·01)。在伤口用药第3d疡愈涂剂中剂量、第7、11d各剂量组创面Ⅲ型胶原显著高于模型组(P<0·01)。各剂量组在第7d创面MMP-1、-13均高于模型组(P<0·01,P<0·05),而MMP-1在第11d与模型组趋于一致且MMP-13明显低于模型组(P<0·01,P<0·05)。各剂量组在3、7、11d创面TIMP-1均明显高于模型组(P<0·01,P<0·05),在第11d各剂量组MMP-1、TIMP-1比值明显低于模型组(P<0·01),在第3、7d高、中剂量组创面MMP-13、TIMP-1比值高于模型组(P<0·01),而到第11d高、中、低各剂量组均明显低于模型组(P<0·01);第11d高、中剂量组MMP-13、TIMP-1比值低于低剂量组(P<0·05)。结论:疡愈涂剂可能通过调节影响胶原代谢的MMPs、TIMPs表达平衡,促进胶原的合成和沉积,从而加速创面的愈合。

紫草素对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及功能的影响

目的探讨紫草素对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及功能的影响。方法从健康人外周血中分离获得单个核细胞,经过夜贴壁后获得单核细胞,体外采用多种细胞因子联合诱导,获得了分化与功能相对成熟的树突状细胞。采用流式细胞仪检测技术观察不同质量浓度紫草素对DC表面分子表达的影响,采用CCK-8法观察紫草素对树突状细胞促淋巴细胞增殖以及ELISA法检测其对树突状细胞分泌细胞因子IL-23的干预作用。结果 TNF-α25 ng/ml刺激树突状细胞,细胞表面分子CD80、CD83表达升高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强;100μg/ml紫草素可抑制CD80及CD86的表达,50μg/ml紫草素可抑制CD86的表达;100μg/ml紫草素和50μg/ml紫草素均可抑制树突状细胞促淋巴细胞增殖的能力;100μg/ml紫草素和50μg/ml紫草素均可抑制LPS和INF-γ联合诱导的树突状细胞IL-23的分泌。结论紫草素具有一定的抑制树突状细胞成熟及抑制其分泌IL-23的作用。

桂皮醛对NIH3T3细胞c-Fos、c-Myc表达的影响

目的:研究肉桂主要成分桂皮醛刺激NIH3T3细胞后c-Fos、c-Myc蛋白在不同时点表达的规律,探讨桂皮醛促进NIH3T3细胞增殖的机制。方法:采用MTT法观察不同浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响;并采用免疫细胞化学法检测桂皮醛对NIH3T3细胞c-Fos、c-Myc蛋白表达的影响。结果:桂皮醛浓度在(8.8×10-2)-(8.8×10)μg/L浓度范围内对NIH3T3细胞具有促增殖作用。当其浓度为5.5μg/L时,促增殖作用最显著。在此浓度下,经桂皮醛刺激后,c-Fos和c-Myc蛋白均在2h开始表达,3h时表达明显增加。结论:桂皮醛可以上调c-Fos、c-Myc蛋白的表达,提示桂皮醛促进细胞增殖可能与其能促进c-Fos、c-Myc快速表达有关。

凉血解毒方对JurkatT淋巴细胞增生、活化及细胞因子分泌的影响

目的研究凉血解毒方含药血清对模拟银屑病病理状态的T淋巴细胞增生、活化及释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为阐明凉血解毒类中药治疗银屑病血热证的作用机制和临床治疗提供实验依据。方法选用Jurkat E6-1T淋巴细胞株为研究材料,以不同剂量的凉血活血胶囊药物粉末灌服大鼠,制备大鼠含药血清。将含药血清预先与细胞孵育3h,用多克隆刺激剂佛波醇酯(phorbol12,13-dibutyrate,PDB)活化T淋巴细胞。采用CCK-8比色法检测含药血清对活化及正常的T淋巴细胞增生的影响;采用流式细胞术观察药物对T淋巴细胞早期活化标志分子CD69表达的影响;采用酶联免疫夹心法(ELISA)检测药物对T淋巴细胞所释放TNF-α含量的影响。结果低、中、高3种剂量的凉血解毒方含药血清均可使活化的T淋巴细胞数量明显下降,且排除药物毒性作用。不同剂量的药物均可显著降低T淋巴细胞早期活化标志分子CD69的表达,不同浓度的药物均可抑制T细胞分泌TNF-α。结论临床用于治疗银屑病的常用有效方剂凉血解毒方能显著抑制T淋巴细胞增生、活化及炎性反应细胞因子的释放。

桂皮醛对NIH3T3细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的:观察肉桂主要成分桂皮醛对小鼠成纤维瘤细胞株NIH3T3细胞周期及相关蛋白的影响。方法:采用流式细胞仪检测桂皮醛(5.5 ng.mL-1)对NIH3T3细胞周期分布的影响;用免疫细胞化学法检测桂皮醛对NIH3T3细胞的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响。结果:流式细胞仪检测显示,桂皮醛作用24 h后NIH3T3细胞S期比例上升了3%(P<0.05),G2/M期比例无明显升高,细胞增殖指数(PrI)增加了3.5%(P<0.01)。经桂皮醛刺激后,NIH3T3细胞Cyclin D1和PCNA蛋白表达量明显增加,与对照组比较,有极显著差异(P<0.01)。结论:桂皮醛可推动NIH3T3细胞周期向前进展,这种正向调控作用与桂皮醛能促进Cyclin D1和PCNA蛋白表达有关。

秃疮花所含异紫堇啡碱对中枢和平滑肌的抑制作用

异紫堇啡碱是自罌粟科植物秃疮花分离的成分之一,药理学研究证明异紫堇啡喊对小白鼠具有较明显的镇痛及镇静作用,可使豚鼠回肠、子宫、支气管及离体心脏冠状动脉血管平滑肌松弛,同时发现可使家兔头颈部血流量增加并有轻微短暂的降压作用。

益气活血解毒化痰方对实验性肝纤维化大鼠的胶原合成及TGF-β1的影响

目的:观察益气活血解毒化痰方对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化的胶原合成及转化生长因子β1(TGFβ1)的影响。方法:DMN诱导大鼠肝纤维化,预防及治疗性灌服益气活血解毒化痰方,以重组人干扰素α2b肌肉注射对照。90天后消化法测肝组织匀浆羟脯氨酸(Hyp)含量;放射免疫分析法测定层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ⅣC)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)含量;同时苦味酸-天狼星红染色,偏振光镜下观察胶原纤维增生程度;原位杂交法观察TGFβ1mRNA的表达。结果:与模型组相比,预防性给药能明显减少肝纤维化大鼠LN含量(P<0.05),明显降低纤维化计分(P<0.05),明显降低TGFβ1mRNA阳性染色的面积百分比(P<0.05);治疗性给药明显降低ⅣC、HA含量(P<0.05);预防及治疗给药均明显降低肝组织Hyp含量(P<0.05),改善胶原纤维增生程度,抑制TGFβ1mRNA的表达。结论:预防性及治疗性服用益气活血解毒化痰方均能抑制DMN诱导的大鼠胶原增生及TGFβ1mRNA的表达,而预防性给药效果更为明显。

慢性胃炎脾气虚证患者的临床和实验研究

北京市中医研究所与北京市第六医院协作对慢性胃病脾气虚证患者进行了证候特异性的研究,结合健牌益气药的治疗和四项指标的观察,取得初步结果,现报告如下。

疡愈涂剂对糖尿病大鼠创面PCNA表达及成纤维细胞的影响

目的:观察疡愈涂剂对链脲佐菌素(STZ)引起的糖尿病大鼠伤口细胞增殖及体外对成纤维细胞增殖迁移的作用。方法:实验分为正常组、模型组、疡愈涂剂高、中、低剂量组。除正常组外,大鼠腹腔注射STZ,造成高血糖状态。各组动物复合背部全厚皮切除伤口。分别观察疡愈涂剂对创面愈合时间、愈合率;采用免疫组化法观察细胞核增殖抗原(PCNA)表达;及MTT法和体外伤口法观察疡愈涂剂对糖尿病大鼠创面成纤维细胞的增殖和迁移作用。结果:与模型组相比,不同剂量的疡愈涂剂均能明显缩短STZ诱发糖尿病大鼠复合创伤后创面的愈合时间(分别P<0.01);提高创面愈合率(P<0.05,P<0.01)。创伤3天后疡愈涂剂高剂量组PCNA表达明显高于模型组;中剂量组于5天后开始增高;低剂量组7天后增高;分别P<0.05,P<0.01。体外研究表明疡愈涂剂在29.23μg/mL和58.45μg/mL能促进糖尿病大鼠创面成纤维细胞的增殖和迁移,分别P<0.01。结论:疡愈涂剂可能通过促进糖尿病大鼠创面成纤维细胞的增殖,从而加速创面的愈合。

益肾健脾养血通利方对左旋炔诺孕酮多囊卵巢综合征大鼠模型的影响

目的观察益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠的作用,并对其作用机理进行初步探讨。方法制作左旋炔诺孕酮PCOS大鼠模型,观察大鼠妊娠率以及电镜结果。结果本方能提高PCOS大鼠的妊娠率,对PCOS大鼠卵巢异常结构的细胞器具有修复作用。结论益肾健脾养血通利方提高妊娠率,对受损的细胞器具有修复作用。

凉血活血胶囊含药血清对微血管异常生成的影响

目的观察临床治疗银屑病的经验方凉血活血胶囊含药血清对微血管异常生成的作用,探讨其治疗银屑病的作用机制。方法以鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)为模型观察凉血活血胶囊含药血清对血管生成的影响;采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导的人真皮微血管内皮细胞株(human dermal microvascular endothelial cells,HDMEC)异常增生模型,以cck-8比色法测定凉血活血胶囊含药血清对其增生的影响;采用transwell细胞迁移、体外管腔形成方法观察凉血活血胶囊含药血清对HDMEC迁移及管腔形成能力的影响。结果与相同浓度的空白血清组相比,5%、10%、15%的凉血活血胶囊含药血清均在不同程度上抑制CAM血管新生(分别P<0.05,P<0.01);对HDMEC增生也表现出一定的抑制作用(分别P<0.05,P<0.01);均可抑制HDMEC的迁移(P<0.01);并可显著抑制HDMEC的管腔形成(P<0.01)。结论凉血活血胶囊含药血清可抑制CAM血管新生、对异常HDMEC的增生、迁移、微血管管腔形成均有抑制作用,提示凉血活血胶囊作用于血管异常生成环节,可能是临床治疗银屑病的作用机制之一。

阴证、阳证皮肤溃疡创面渗出液MMPs和TIMPs的酶活性对比分析

目的:探讨皮肤溃疡阴证、阳证创面渗液基质金属蛋白酶及组织抑制因子活性和水平的差异,揭示其证候基础。方法:收集皮肤溃疡阳证20例、阴证25例创面渗液及10例健康成人血清对照,通过明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性和ELISA法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的含量。结果:阴证创面MMP-2、MMP-9活性和含量不同程度高于阳证组和对照组(分别P<0.01);同时其TIMP-1、-2含量却不同程度低于阳证组和对照组(分别P<0.01),且MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比值明显高于阳证组和对照组(分别P<0.05)。结论:阴证疮疡MMPs/TIMPs平衡失调,这可能是皮肤溃疡创面不易愈合的机制之一。

低营养及低氧状态下NIH3T3细胞增殖及细胞周期的变化及对bFGF的影响

目的:体外模拟慢性创面缺氧、低营养环境,观察成纤维细胞在该状态下增殖及细胞周期的变化及对外源性生长因子(bFGF)的反应,探讨低氧、低营养条件下成纤维细胞的病理生理变化。方法:单纯缺氧环境采用厌氧培养箱,通入混合气,氧分压(PO2)分为27mmHg和44mmHg2个水平;低营养环境则控制培养液新生牛血清(NCS)浓度。用MTT法检测细胞活性以及其对外源性生长因子的反应,用流式细胞仪检测细胞周期。结果:PO244mmHg时细胞增殖速度较同期对照组无明显差异;PO227mmHg时,细胞增殖速度较同期对照组明显减慢(P<0.01),细胞被阻滞于G0期,S期细胞比例明显减少,bFGF未显示促增殖作用。NCS浓度为0.5%的低营养状态下细胞增殖速度较同期对照组明显减慢(P<0.01),细胞被阻滞于G0-G1期(P<0.01);bFGF能明显改善低营养状态下的增殖减慢(P<0.01),使G2-M期细胞比例增加(P<0.05)。结论:27mmHgPO2或NCS浓度为0.5%的低营养环境使细胞阻滞于G0-G1期,影响成纤维细胞增殖;bFGF可以改善低营养条件下细胞增殖减慢的状态,但对极度缺氧条件下的成纤维细胞增殖障碍无明显作用。