rTMS治疗在脑卒中后上肢偏瘫患者中的应用效果

目的:探讨脑卒中后上肢偏瘫患者行低频重复经颅磁刺激(rTMS)治疗对肩关节疼痛及上肢运动功能的影响。方法:按照随机数字表法将2021年3月至2023年3月就诊于河南省郑州颐和医院的80例脑卒中后上肢偏瘫患者分为观察组和对照组,各40例。对照组接受常规康复训练和药物治疗,观察组在对照组基础上加用rTMS治疗。对比两组临床疗效、肩关节活动度、肩关节疼痛[视觉模拟评分法(VAS)]、上肢运动功能[Fugl-Meyer]、平衡能力[Berg平衡量表(BBS)]、日常生活能力[Barthel指数(MBI)]及并发症发生率。结果:观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05);治疗后观察组肩关节活动度大于对照组,VAS评分低于对照组(P<0.05);治疗后观察组MBI、Fugl-Meyer、BBS评分高于对照组(P<0.05);两组并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:rTMS治疗脑卒中后上肢偏瘫患者可缓解患者肩关节疼痛,改善其上肢运动功能、肩关节活动度及平衡能力,使其日常生活能力提高,且具有较高的安全性。

过表达HMGR催化结构域以优化酵母工程菌原人参二醇代谢途径的研究

目的过表达3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)催化结构域提高酵母工程菌中原人参二醇的产量。方法分别克隆酿酒酵母中编码3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶催化结构域的基因t HMG1、人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds和原人参二醇合酶基因cyp1、拟南芥中CYP450还原酶基因cyp-re,构建相应表达质粒,转化酿酒酵母INVSc1,并检测重组菌中原人参二醇产量。结果重组菌INVSc1-DS-GFP/CYP1/CYP-Re和INVSc1-DS-GFP/CYP1/CYP-Re/t HMG1中原人参二醇产量分别为3.04 mg·L-1和26.5 mg·L-1。结论导入基因t HMG1,使原人参二醇产量提高了8.7倍,该结果为优化酵母工程菌中人参皂苷代谢途径奠定了基础。

平板橡胶伸缩缝的更换技术

对伊河大桥的伸缩缝更换技术进行总结和论述。

早期强化膝关节控制训练在脑卒中偏瘫患者下肢运动功能改善中的应用

目的探讨早期强化膝关节控制训练在脑卒中偏瘫患者下肢运动功能改善中的应用效果。方法将98例脑卒中偏瘫患者随机分为两组各49例。对照组给予常规护理与训练,观察组在此基础上实施早期强化膝关节控制训练,比较两组的临床效果。结果干预后1个月、3个月,两组的Breg平衡量表评分、Fugl-Meyer运动功能量表评分均高于干预前,且观察组的Breg平衡量表评分、Fugl-Meyer运动功能量表评分均高于对照组(P<0.05)。结论早期强化膝关节控制训练可增强脑卒中偏瘫患者的膝关节稳定性,显著改善其平衡功能及下肢运动功能。

人参皂苷生物合成相关糖基转移酶研究基本策略及进展

人参、西洋参和三七等传统中药材因其广泛且良好的药理活性一直倍受关注,而人参皂苷是其主要活性成分。糖基转移酶是催化人参皂苷生物合成最后一步的关键酶。人参皂苷苷元经过糖基转移酶的修饰,产生了复杂多样的人参皂苷,从而具有广泛的药理活性。目前人们已通过合成生物学技术实现了人参皂苷苷元和稀有人参皂苷compound K的合成。人参皂苷苷元的糖基化作为人参皂苷生物合成途径的最后一步,是整个合成途径中最重要的环节之一,近年来也取得了一些研究进展。本文介绍了人参皂苷生物合成途径中相关糖基转移酶研究的基本策略,并对相关进展进行了综述,为人参皂苷生物合成途径的深入解析及通过合成生物学途径获得人参皂苷提供理论参考。

人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶在酿酒酵母中的表达、定位及功能研究

为了研究人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶(dammarenediol-Ⅱ synthase,DS)在酿酒酵母中的重组表达和定位,本研究克隆了人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds,并将其与绿色荧光蛋白基因gfp融合,构建了相应的重组表达质粒pESC-HIS-DS和pESC-HIS-DS-GFP,转化酿酒酵母INVSc1,获得了重组菌INVSc1-DS和INVSc1-DS-GFP。通过差速离心法制备重组菌微粒体,荧光显微镜下观察达玛烯二醇-Ⅱ合酶的表达及亚细胞定位,并通过酶促反应对该酶进行了功能鉴定,结果表明,DS为膜结合型蛋白,在体外能催化2,3-氧化鲨烯生成达玛烯二醇-Ⅱ。对重组菌发酵产物进行分析,结果表明,重组菌中产生了达玛烯二醇-Ⅱ,且通过将ds与gfp融合,重组菌中的达玛烯二醇-Ⅱ产量由7.53 mg·g^(-1)提高到12.24 mg·g^(-1),该结果为优化在酿酒酵母中构建的人参皂苷代谢途径提供了新思路。

影响毕赤酵母高效表达重组蛋白的主要因素及其研究进展

毕赤酵母是现代分子生物学研究中最重要的重组蛋白表达系统之一。该系统具有表达水平高、遗传稳定性好、可分泌表达、易于高密度发酵和成本低廉等优点。影响重组蛋白在毕赤酵母中高效表达的主要因素有基因拷贝数、密码子偏爱性、启动子、分子伴侣、信号肽、糖基化修饰和发酵工艺等。本文对影响毕赤酵母高效表达的主要因素及其研究进展进行综述,为进一步提高重组蛋白在毕赤酵母中的表达水平提供借鉴。

利用反义RNA技术抑制酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因的表达

羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点,下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢途径可促进其流向三萜类化合物的代谢途径。有鉴于此,本研究根据酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)序列设计引物,扩增5'长片段(包括erg7基因5'非编码区启动子序列和部分编码区序列)、5'短片段(包括erg7基因5'非编码区部分启动子序列和部分编码区序列)和erg7基因编码区片段,分别将其反向克隆到表达载体p ESC-URA上,构建反义表达质粒。用反义表达质粒转化酿酒酵母INVSc1,在营养缺陷型培养基SD-URA上筛选重组菌株。通过半定量PCR进行检测,结果表明:与INVSc1相比,转入erg7基因编码区反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量没有显著变化,而转入5'长反义片段和5'短反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量明显降低。通过TLC和HPLC方法比较麦角甾醇含量,结果表明:与INVSc1相比,转入5'短反义片段和erg7基因编码区反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量没有显著变化,而转入5'长反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量明显降低。本研究利用反义RNA技术抑制酿酒酵母中羊毛甾醇合酶基因的表达,为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建三萜类化合物代谢途径奠定了基础。

人参糖基转移酶PgUGT74AE2催化生成新型人参三醇皂苷研究

人参(Panaxginseng)来源的糖基转移酶Pg UGT74AE2能够催化原人参二醇(protopanaxadiol,PPD)的C-3位羟基发生糖基化反应,生成人参皂苷Rh2,但其催化原人参三醇(protopanaxatriol,PPT)的C-3位羟基发生糖基化反应的研究至今未见报道。本研究构建重组表达质粒p ET-32a-Pg UGT74AE2,转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,获得重组菌株Transetta-Pg UGT74AE2。通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-Dthiogalactoside, IPTG)诱导表达,获得重组Pg UGT74AE2。建立重组Pg UGT74AE2催化PPT的酶促反应体系,结果表明,Pg UGT74AE2能够催化PPT的C-3位羟基发生糖基化反应,生成产物3-O-β-D-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,6α,12β,20S-tetraol。本研究通过酶促反应获得C-3位糖基化的新型人参三醇皂苷,可为创新药物研究提供原料。

酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因单倍体缺陷型突变株的构建

羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)编码的羊毛甾醇合酶是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甾醇生物合成途径中重要的限速酶。酿酒酵母固有的甲羟戊酸(MVA)/麦角甾醇代谢途径的中间体2,3-氧化鲨烯也是三萜类化合物的合成前体。因此,羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点。下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢,可为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建三萜类化合物的代谢途径奠定基础。本研究通过设计含有与erg7基因ORF序列两侧同源的长引物,以质粒PUG66为模板进行PCR,构建带有loxP-Marker-loxP的erg7基因敲除组件,采用LiAc/SS Carrier DNA/PEG方法转化双倍体野生型酿酒酵母INVSc1,通过同源重组的方式构建酿酒酵母erg7基因单倍体缺陷型突变株。半定量PCR和实时定量PCR结果表明,突变株内erg7基因表达水平下降约1倍。TLC和HPLC结果表明,突变株内麦角甾醇含量下降至野生型菌株的42%。

神经肌肉电刺激联合运动疗法对臂丛神经损伤的疗效

目的探讨神经肌肉电刺激(NMES)联合运动疗法对臂丛神经损伤患者的临床疗效。方法抽取2017年9月至2020年7月郑州颐和医院收治的臂丛神经损伤患者60例,按随机数字表法分为NMES组与运动疗法组,每组30例。运动疗法组采用运动疗法治疗,NMES组在运动疗法的基础上加用NMES治疗。比较两组患者的治疗优良率,统计并比较两组治疗前后肌力恢复情况、关节活动度(肩外展、肘屈曲)和视觉模拟评分法(VAS)、睡眠状况自评量表(SRSS)、臂丛功能评分。结果治疗3个月后,NMES组优良率为93.33%(28/30),高于运动疗法组的70.00%(21/30),P<0.05。治疗后,两组VAS、SRSS评分均低于治疗前,且NMES组低于运动疗法组(P<0.05)。治疗后,NMES组肌力分级优于运动疗法组(P<0.05)。治疗后,两组肩外展、肘屈曲活动度均较治疗前提高,且NMES组关节活动度高于运动疗法组(P<0.05)。治疗后,两组臂丛功能评分均较治疗前提高,且NMES组臂丛功能评分高于运动疗法组(P<0.05)。结论NMES联合运动疗法治疗臂丛神经损伤,可提高患者的上肢自主生活能力优良率,减轻疼痛,改善睡眠质量,并可改善肌力和关节活动度,加快患者臂丛功能恢复。

髋关节强化训练对脑卒中恢复期患者平衡能力及步行能力的影响

目的 观察髋关节强化训练对改善脑卒中恢复期患者平衡能力及步行能力的效果。方法 采用便利抽签法将河南大学附属郑州颐和医院2019年1月至2021年1月收治的脑卒中患者98例分为两组。对照组49例在其恢复期实施常规康复训练,观察组49例联合实施髋关节强化训练,连续训练4周后,观察比较两组干预前后平衡能力(BBS)与步行能力(FAC)的变化和步态参数情况。结果 干预前,两组平衡能力评分、步行能力以及步长、步速、步频等步态参数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。干预后,观察组平衡能力评分[(45.82±7.49)分]显著高于对照组[(32.42±6.82)分],差异有统计学意义(t=9.260,P=0.000,P<0.05)。干预后,观察组步行能力改善明显优于对照组(P<0.05)。干预后,观察组步长(0.37±0.13)m、步速(0.44±0.12)m/s、步频(99.32±12.52)步/min,对照组步长(0.27±0.14)m、步速(0.28±0.13)m/s、步频(71.15±9.24)步/min,观察组步态参数改善明显优于对照组(P<0.05)。结论 脑卒中恢复期患者应用髋关节强化训练可有效改善患者平衡功能,提高患者步行能力。