兔膝关节软骨缺损动物模型的建立

背景:以往制备骨关节模型的方法成模时间较长。目的:建立一个理想的兔膝关节软骨缺损动物模型。设计、时间及地点:随机分组设计,对照动物实验,于2007-03/2008-10在广州市红十字会医院创伤外科研究所完成。材料:用新西兰大白兔16只,雌雄不限,体质量3.2～4.0kg。方法:以6g/L戊巴比妥钠行耳缘静脉注射麻醉下,通过在实验兔后腿关节的股骨髁关节面部位用电动骨钻,在控制其直径4.5mm,深度为3mm,造成其关节软骨的缺损,制模后2,6,12,18周取出其股骨髁。主要观察指标:用大体观察、组织学染色共聚焦显微镜观察缺损部位软骨修复情况。结果:实验兔后腿关节的股骨髁关节面的关节软骨缺损后,在制模后2,6周缺损部位凹陷明显,只有少许肉芽组织和纤维组织生长填充,未见软骨细胞爬行生长,12,18周见缺损部位以纤维组织增生为主,底部及边缘可见骨组织和软骨增生,但是镜下形态仍与正常软骨组织区别较大,表面仍未见软骨细胞爬行生长。结论:实验建立的兔膝关节软骨缺损模型成模时间短,且缺损部位不能通过自我修复达到自愈。

Ⅱ型胶原预防和治疗骨关节炎的动物实验

目的:采用H ulth法对新西兰兔建立膝骨关节炎动物模型,以透明质酸钠及注射用生理盐水为对照,观察Ⅱ型胶原注射治疗兔膝关节炎的愈合效果。方法:实验于2002-02/2003-07在暨南大学医学院附属第四医院完成。取36只新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型,随机等分为3组:实验组术前及术后每两周关节内注射1m L1%Ⅱ型胶原至12周。关节内注射透明质酸钠组和关节内注射生理盐水组分别于术前及术后每两周关节内注射1%透明质酸钠1m L,生理盐水1m L,以上各组于术后4,8,12周各处死动物4只,作标本手术显微镜观察和组织学检测。结果:①实验组与透明质酸钠组骨关节炎改变较生理盐水对照组明显减轻。②术后4周时,实验组软骨膜光滑,软骨细胞排列整齐,可见双核软骨细胞;关节内注射透明质酸钠组软骨膜也光滑,软骨细胞排列整齐;关节内注射生理盐水组软骨膜细胞增生,有裂隙,软骨层变薄,细胞排列不规则。术后8周时,实验组软骨膜细胞增生,有裂隙,软骨细胞层次减少,但排列尚规则;关节内注射透明质酸钠组的光镜改变基本与实验组相似;关节内注射生理盐水组出现软骨表面缺损及纤维化,软骨细胞层薄排列不规则。术后12周时,实验组、关节内注射透明质酸钠组的光镜改变与实验组术后8周时相似;关节内注射生理盐水组在其术后8周时光镜改变基础上有更广泛的软骨缺损,部分切片可见软骨下骨质暴露。结论:①Ⅱ型胶原与透明质酸钠匀能有效抑制骨关节炎。②外源性Ⅱ型胶原可以替代透明质酸钠应用于骨关节炎的防治。

复合Ι型胶原海绵创伤止血的动物实验研究

目的 探讨猪脚肌腱提取的Ι型胶原与壳聚糖混合 ,交联冻干后形成的复合Ι型胶原海绵对创伤创面出血的止血效果。方法 用新西兰大白兔作实验动物 ,对其皮下出血、体表浅动静脉断裂损伤、肝损伤进行止血试验 ,同时与明胶海绵、纱布等止血效果作比较 ,观察其止血时间、敷料与创面的粘合等情况 ,并定期观察创面愈合和体内吸收情况。结果 本试验表明 :复合Ι型胶原海绵的止血时间约 2分钟 ,明胶海绵为 3.5分钟 ,纱布压敷为 10分钟以上 ;复合Ι型胶原海绵和明胶海绵均能在体内降解吸收。结论 复合Ι型胶原海绵止血效果最好 ,无论是止血时间、止血效果、与伤口的粘附能力都优于其他 2种材料 ,并能在体内降解吸收 ,因此 ,是一种较理想的创伤止血材料。

以Ⅰ型胶原为基底的表皮细胞培养法

目的 :介绍以Ⅰ型胶原为基底的表皮细胞培养法的优点。方法 :从鼠尾中提取Ⅰ型胶原蛋白 ,制备胶原膜作培养皿基底 ,进行表皮细胞培养 ,并比较 4种不同基底的培养方法。结果 :以胶原膜作基底培养的表皮细胞无论是单细胞或组织块都生长最好 ,在第 14天均能开始汇合成片 ,且无毒副作用。结论 :该培养法改进了过去培养表皮细胞膜片过薄、韧性欠佳、刮取皮片时造成皮片回缩等缺点 ,方便了创面移植 ,且胶原膜本身也能促进创面愈合 。

创伤修复剂——纯化的人血浆纤维连结蛋白活性的研究

目的建立测定人血浆纤维连结蛋白(FN)活性测定方法,研究在4℃保存的FN,贮存时间与浓度的关系。方法利用FN对明胶亲和特性,用明胶包被聚苯乙烯反应板,1%牛血清白蛋白封闭,随后加保存3、5、7个月,各浓度纯化的FN,25μg/m l抗人FN抗血清,HRP-金黄色葡萄球菌A蛋白。结果此法可测定FN活性,具有高度可重复性。FN浓度越高活性保存越好,浓度为30ng/m l以上纯化的FN4℃冷藏保存7个月仍具有一定活性。结论此法敏感度高、特异性强、重复性好,为FN活性保存条件提供可靠的检测数据。

烧伤感染凝固酶阴性葡萄球菌的菌群分布

葡萄球菌按生态学及致病性的现代分类法,与60年代中叶前的分类法已有明显差异。临床激生物学将人类葡萄球菌重新划分为两大类。一类是金黄色葡萄球菌,包括各个群、型;另一类是凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase Negative Staphlococci CNS)。CNS已被介绍的菌种有:表皮葡萄球菌(S.epidermidis),腐生葡萄球菌(S.sparophyticus),人型葡萄球菌(S.hominis),溶血葡萄球菌(S.haemolyticus),

低强度超声促进兔骨-肌腱结合部早期恢复的初步观察

目的: 观察低强度超声对骨-肌腱结合部位恢复的影响。方法: 建立兔髌骨部分切除模型, 16只成年雌性新西兰白兔随机分为2组, 超声组每日接受低强度超声刺激, 对照组给予假刺激。术后6、12周处死动物取标本(n=4) 做大体和病理组织学观察。结果: 大体见超声组腱-骨结合部愈合较早; 组织学观察显示超声组6周可以看到骨-肌腱结合部纤维母细胞、成骨细胞增生活跃, 12周出现软骨带, 部分胶原纤维长入新生的骨质中, 恢复较对照组迅速。结论: 低强度超声可以促进骨肌腱结合部位的早期恢复。

Ⅱ型胶原海绵修复关节软骨缺损的动物实验

目的探讨Ⅱ型胶原海绵修复关节软骨缺损的效果。方法采用成年纯种新西兰兔24只,48侧膝关节,在股骨滑车面钻孔为直径5mm、深3mm的全层关节软骨缺损,左侧为A组,在缺损区内完全填充Ⅱ型胶原海绵,右侧为B组,缺损区空白对照。术后12周内,每双数周对缺损修复情况行大体形态和组织学观察。结果Ⅱ型胶原对关节软骨缺损的修复有明显的促进作用,修复结果接近正常软骨。结论自行研制的高纯度Ⅱ型胶原海绵组织相容性好,无明显毒副作用,对关节软骨缺损具有良好的修复作用。

聚乙烯醇编织构建组织工程前交叉韧带的初步研究

[目的]探讨聚乙烯醇体外编织构建组织工程前交叉韧带支架材料的可行性。[方法]用聚乙烯醇纺丝纤维编织构建韧带支架材料,在电子拉力机上测试该支架材料的力学性质;用组织块和胶原酶消化培养法在体外分离培养人前交叉韧带细胞并对细胞的生长形态和分泌胶原蛋白的特征进行检测,细胞经体外扩增后种植于编织构建的聚乙烯醇韧带支架材料上观察。[结果]韧带支架材料的柔韧性强,拉力测试的负荷—拉伸曲线与韧带的拉伸曲线相似,其最大负荷、极限应力和弹性模量分别为52.61 N、14.96 MPa和202.08 MPa;体外分离培养的人前交叉韧带细胞呈典型的成纤维细胞特征,能在体外分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原等细胞外基质;支架材料无细胞毒性,人前交叉韧带细胞可在支架材料上黏附、生长并分泌细胞外基质。[结论]支架材料具有一定的力学性能和优良的生物相容性,有望成为一种组织工程前交叉韧带支架材料。

骨髓间充质干细胞促进骨-肌腱结合部愈合的初步观察

[目的]观察骨髓间充质干细胞对骨-肌腱结合部愈合的影响。[方法]采用骨髓穿刺、全骨髓培养法获取兔骨髓间充质干细胞。36只18周龄新西兰大白兔随机分为2组,实验组将骨髓间充质干细胞与Pluronic F-127载体材料结合后,植入兔髌骨部分切除模型,对照组只进行手术,不植入细胞。在术后6、12、18周进行X线片、大体和组织学观察评估。[结果]X线片显示术后6、12、18周实验组骨-肌腱结合部新生骨面积显著大于对照组(P<0.01)。大体观察可见实验组骨-腱结合部愈合较早。HE染色显示实验组术后6周有大量的纤维母细胞和类软骨细胞增生,并可见新骨形成;12周,髌腱与松质骨接触面软骨细胞移行带形成;18周,纤维软骨移行带排列更有序。Safranin0染色显示实验组术后6周,基质染色较深,部分骨-腱结合处可见相对浓染区;12周,基质染色范围明显减少,沿类软骨细胞走行分布;18周,类软骨细胞集中的区域染色较12周有所减退。组织学检查显示实验组术后6、12、18周骨-腱结合部组织愈合明显,较对照组迅速。[结论]骨髓间充质干细胞可以促进骨-肌腱结合部细胞增生,促进其早期愈合。

Ⅱ型胶原海绵的材料特性及对软骨缺损的影响

[目的]研究Ⅱ型胶原海绵的材料特性与其在修复软骨缺损中的作用。[方法]对比Ⅱ型胶原海绵与Ⅱ型胶原膜的力学、孔径方面等材料特性的差异,并建立兔膝关节软骨缺损模型,A组接受Ⅱ型胶原海绵移植,B组接受Ⅱ型胶原膜移植,而C组为空白对照组,术后不予治疗,分别于2、6和12周取材,通过组织学染色观察软骨缺损处修复的效果。[结果]Ⅱ型胶原海绵与Ⅱ型胶原膜在材料特性上有显著差异,胶原自发荧光分层扫描通过图像分析得出A组平均孔径为(93.26±38.41)μm,弹性模量(0.098±0.0017)MP/m2,均较B组更为理想。组织学显示A组6周时生成大量新生软骨,12周时新生软骨形态与成熟度已经接近正常,较B、C两组更为优越。[结论]Ⅱ型胶原海绵有理想的孔径和合理的生物力学结构性质,有利于软骨缺损的修复,是一种具有良好材料特性的组织工程基质。

丹酚酸B促进人软骨细胞生长并上调β-连环蛋白和类细胞介素-1的表达

为探讨中药丹参的主要活性成份丹酚酸B对人软骨细胞系C28112细胞的增殖作用及其调节作用机制中相关因子的初步辨识采用MTS法检测丹酚酸B的对软骨细胞作用的有效浓度;吖碇橙荧光标记软骨细胞的DNA及RNA,观察细胞分裂及形态学改变;Western Blotting(WB)检测β-Catenin及新型软骨生长因子类细胞介素1的蛋白质表达。结果显示MTS法检测加入丹酚酸B后的所有剂量实验组与对照组比较吸光度值均有不同程度的增高,差异均有统计学意义(P<0.01);丹酚酸B实验组可见明显核分裂及较多的双核现象,细胞增生较活跃;半定量WB分析结果显示丹酚酸B实验组比对照组的类细胞介素1蛋白表达量显著升高,β-Catenin蛋白质表达量亦显上调趋势。表明丹酚酸B能促进人软骨细胞的增殖并上调了相关因子的表达。其作用机制可能与丹酚酸B作用于软骨细胞中Wnt信号调节通路,上调信号调节因子β-Catenin表达量,激活靶基因类细胞介素1的转录并促进其表达释放有关。

针刺对烧伤早期创面组织NO的影响

目的:探讨针刺减轻烧伤创面早期进行性损害的机理。方法:建立兔深Ⅱ度烧伤模型,采用NO试剂盒(酶法)测定组织NO,观察烧伤早期(伤后5天内)创面组织NO的动态变化以及针刺双侧“足三里”穴对组织中NO产生的影响。结果:兔深Ⅱ度烧伤早期组织中NO含量显著低于正常组织,以伤后第3天最低,针刺能明显提高烧伤早期创面组织NO的产生。结论:针刺能提高创面组织NO含量,可能是其减轻组织水肿和烧伤创面早期进行性损害的重要因素。

专用四肢关节磁共振在兔膝关节软骨缺损修复中的应用

【目的】研究新西兰成年白兔膝关节软骨缺损修复后的低场强专用四肢关节磁共振诊断价值。【方法】40只兔左膝关节随机分为两组:A组:通过手术形成软骨缺损,不植入Ⅱ型胶原;B组:缺损内填充Ⅱ型胶原,术后2、6、12、18周分别行专用关节MR扫描,扫描后取材,行组织学检查。【结果】A、B两组手术区均显示有规律的动态MR改变,结合组织学分析,A组是软骨缺损的自我修复过程,B组是填充物的成熟过程。12周时两组均可见关节软骨信号,B组软骨信号较光滑,与组织学结果相符。【结论】专用四肢关节MR检查具有评价关节软骨修复的潜力,可望成为一种无创的软骨修复术疗效评价方法。

针刺对烧伤创面组织LPO、SOD的影响

目的 :探讨针刺促进烧伤创面愈合的机理。方法 :建立兔深Ⅱ度烧伤动物模型 ,电针双侧“足三里”穴 ,同时取正常组织对照。动态观察烧伤后早期创面组织中脂质过氧化物 (LPO)和超氧化物歧化酶 (SOD)的变化以及针刺“足三里”穴后对创面组织中LPO、SOD的影响。结果 :烧伤创面组织早期SOD的活性下降 ,LPO升高。针刺后可提高烧伤后早期组织抗过氧化能力。结论 :针刺可促进烧伤创面愈合 。

纤维连接蛋白——一种创伤修复剂制备方法的研究

对制备纤维连接蛋白 (Fibronectin,FN)的试验方法进行研究 ,筛选出加样量小 ,收得率高的最佳试验方法。用明胶与溴化氰活化琼脂糖珠偶联的亲和层析柱 ,对从健康男性“O”型血浆提纯 FN进行研究。采用不同的加样量与样品在柱内不同的停留时间进行筛选。在明胶亲和柱体积不变的条件下 ,制备 FN的量与血浆加样量及血浆在柱内停留时间有密切关系。该柱的最佳加样量为 15 0 ml血浆 ,每次血浆在柱内停留时间应为 2 0 min。该法制备的 FN,加样量小 ,收得率高。

酸性成纤维细胞生长因子复合胶原海绵的制备及其疗效观察

以Ⅰ型胶原蛋白、酸性成纤维细胞生长因子(acidFibroblastGrowthFactor,aFGF)为主要原料,研制一种新型的创伤敷料,并对其进行了临床试验。制备高纯度的Ⅰ型胶原蛋白溶液,透析至中性,加入aFGF溶液冷冻干燥成为海绵体。再进行生物安全性评价试验,包括急性毒性试验、刺激性试验、致敏试验、溶血性试验、细胞毒性试验以及动物体内埋植试验;在临床上选取开放性创面进行贴敷,评价其治疗效果。结果:aFGF胶原海绵的毒理学试验结果均呈阴性,在兔肝埋植试验中未见异常反应,8周内降解;临床上应用具有促进创面愈合,阻止渗液溢出的效果。所研制的aFGF胶原海绵无毒副作用,具有良好的临床疗效,具备推广应用的前景。

烧伤感染凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)菌群分布

本文统计324例烧伤患者的感染菌,发现凝固酶阴性葡萄球菌占全部感染菌株的19%(277/1466)。并从菌群总分布比例、菌群平面分布、菌种分布、菌群垂直分布、菌群病区分布、菌群体表分布、复数感染分布7个方面统计,报告了凝固酶阴性葡萄球菌感染的菌群分布状态。

针刺对深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响

为研究针刺对烧伤创面愈合的影响，建立深Ⅱ度烧伤动物模型，观察电针足三里穴对创面早期水肿和愈合时间的影响。结果显示：电针足三里穴可减轻创面组织水肿和缩短创面愈合时间，表明针刺可促进烧伤创面愈合。

透明质酸钠预防骨关节炎Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化

目的 研究关节内注射透明质酸钠 (海尔根 )预防膝骨关节炎 (OA)过程中Ⅱ型胶原抗体水平及其动态变化。方法 取 12只成年新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型 ,随机等分为 2组。Ⅰ组术后当时及每 2周关节内注射 1ml 1%透明质酸钠 (Hyalgan)至 12周 ;Ⅱ组注射 1ml生理盐水为对照。各组术前及术后每隔 2周收集血清 ,建立间接法ELISA ,检测Ⅱ型胶原抗体水平。结果 Ⅰ组术后第 6、10、12周Ⅱ型胶原抗体水平与术前比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;Ⅱ组Ⅱ型胶原抗体水平第 10周显著高于术前 (P <0 .0 5 ) ;Ⅰ组与Ⅱ组同期比较Ⅱ型胶原抗体水平均无显著差异。结论 OA使机体产生自身免疫 ,引起自身Ⅱ型胶原抗体水平增加。透明质酸钠能促进体液免疫应答 ,导致抗体水平进一步升高。提示 ,注射透明质酸钠治疗膝骨关节炎时 。