基于CRISPR/Cas13a系统建立大口黑鲈弹状病毒检测方法

为了建立一种灵敏度高、特异性强并且适合现场诊断的大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV)检测方法,研究基于CRISPR-Cas13a系统并结合多酶恒温核酸快速扩增(MIRA)技术建立了一种MSRV的检测方法。实验对MSRV序列进行多重序列比对分析后,针对MSRV衣壳蛋白(CP)基因的特异性区域设计两个靶点,并通过体外转录成特异性的crRNA,同时设计合成MIRA引物序列实现目标序列的等温扩增,最后结合Cas13a蛋白、crRNA、恒温扩增体系构建检测体系,并从高效crRNA的选择、反应温度、ssRNA报告探针浓度和Cas13a与crRNA的浓度比四个方面优化了反应体系,并采用最优检测体系对大口黑鲈样本进行检测验证。结果显示,在20μL检测体系中加入200 nmol/L Cas13a、100 nmol/L crRNA1、100 nmol/L crRNA2及500 nmol/L ssRNA报告探针,在37℃的情况下能够获得最佳的检测效果。并且该检测体系可以检测到102 fM的MSRV病毒,具有良好的特异性和灵敏性,此外检测结果可直接通过紫外灯照射直接观察。研究基于CRISPR/Cas13a系统结合等温扩增MIRA技术建立的MSRV检测方法,可在室温下且不需要昂贵的仪器进行MSRV病毒检测,检测结果可以肉眼直接观察,能在多种场合下使用,研究结果为检测MSRV提供了有效方法。

构建人工珊瑚礁的初步研究

珊瑚礁是地球上最古老、最多姿多彩、也是最珍贵的生态系统之一，它们和热带雨林一样被认为是世界上生物多样性最高的生态系统。珊瑚礁在人类食物来源和天然产物方面具有重要的经济价值，在生态旅游、保护海岸线、稳定海洋生态环境等方面都具有重要的意义。但是在近几十年中，由于人类对海洋资源的过度开发、污染、全球气候变暖、以炸药和毒药等破坏性手段采捕珊瑚礁鱼类、海洋生态系统失衡等因素的作用．

斜带石斑鱼CCR6a基因的克隆、表达模式及抗病毒能力研究

趋化因子受体是具有7个疏水性跨膜结构的G蛋白偶联受体,是一类低分子蛋白质,可以募集并激活白细胞作用于感染部位。相关研究表明,趋化因子及其受体在病原体感染、创伤修复、肿瘤形成及其转移等方面起重要作用。本研究从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)组织中克隆出了CCR6a(CC chemokine receptor 6a,CCR6a)基因ORF序列,并对其序列和进化关系进行了分析,研究该基因组织分布、亚细胞定位和抗病毒功能情况。研究结果表明:斜带石斑鱼CCR6a基因ORF序列全长为1131 bp,编码376个氨基酸;进化树分析结果表明斜带石斑鱼CCR6a与鞍带石斑鱼CCR6a聚为一支;荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CCR6a基因组织分布发现CCR6a在所有检测组织中均有表达,在免疫组织肾脏和鳃的表达量最高,在皮肤中的表达量次之;亚细胞定位显示该基因为膜分布,在石斑鱼细胞中过表达CCR6a可显著抑制赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNN)的复制。研究结果将有助于理解鱼类趋化因子在病毒感染中的作用。

鹿角珊瑚人工养殖的初步研究

为了探讨珊瑚人工养殖的基本条件和方法,分别在陆基水泥池中和海底珊瑚苗床上对3种鹿角珊瑚:粗野鹿角珊瑚(Acropora humilis)、霜鹿角珊瑚(Acropora pruinosa)和松枝鹿角珊瑚(Acropora brueggemanni)的人工养殖进行了实验。结果表明,这3种珊瑚可以在深圳市鹅公湾近岸海域的海底珊瑚苗床上常年生长;在水泥池中当水温低于14℃或高于28℃时珊瑚陆续死亡;这3种珊瑚的生长速度在适温范围内随着水温的升高而加快,最大月生长值是6.05 mm;光照对这3种珊瑚的生长有影响,直接的阳光照射会引起水泥池中珊瑚的死亡。

新时代经济责任审计创新发展思考

随着社会的不断发展,我国经济发展水平不断提升,开展经济责任审计工作也步入新的发展阶段,经济审计工作的重要性也日益突出。本文通过对新时代经济责任审计的内涵进行分析,对新时代经济责任审计工作的功能进行重新定位,并提出新时代环境下经济责任审计发展建议。