盐酸丁卡因胃/肠镜润滑剂在比格犬体内的药动学和毒性研究

通过对比格犬单次灌胃或直肠给予盐酸丁卡因胃/肠镜润滑剂,观察动物的临床反应,测定盐酸丁卡因在体内的浓度,对主要的组织脏器进行大体剖检,并测量脏器重量及系数,以了解其在动物体内的药动学和毒性反应.将8只普通级比格犬,随机分为灌胃组和直肠组,每只犬分别单次灌胃或直肠给予10 mL盐酸丁卡因胃/肠镜润滑剂(含盐酸丁卡因80 mg).结果显示,各动物的外观体征、行为活动、呼吸和粪便等均未见明显异常,摄食正常,体重正常增长;与给药前相比,各动物在给药后4 h体温下降、心率减慢、Q-T间期和T波时间延长,为盐酸丁卡因的麻醉药效作用所致;各动物的血液学、血液生化学、主要脏器重量和系数及大体剖检均未见明显异常;单次灌胃或直肠给予后的平均达峰时间分别为0.63和0.44 h,平均消除半衰期分别为1.20和3.36 h,平均药时曲线下面积分别为60.44和60.19μg/L*h,提示吸收进入血液的药量较少,大部分留在局部发挥润滑和麻醉作用.

骨髓间充质干细胞对类风湿关节炎小鼠干预效果研究

目的利用自发类风湿关节炎小鼠模型(Tg-huTNFα小鼠),探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对类风湿关节炎及其继发骨量丢失的影响。方法3周龄Tg-huTNFα小鼠分为3组:(1)模型组(Model),每周腹腔注射1次0.1 mL/10 g的生理盐水;(2)huTNFα抗体干预组(Anti-huTNFα),每周腹腔注射1次10 mg/kg的huTNFα抗体;(3)BMSCs干预组(BMSCs),每周双侧膝关节腔各注射1次5×10^(6) Cells的BMSCs。干预期间每周称量1次动物体重,同时对踝关节进行临床评分,各组动物干预10周后处死取材。利用流式细胞仪分析外周血T细胞、B细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比例,液相芯片法检测血清中huTNFα、IL-4及IL-1β含量,HE染色后评价左侧膝关节和踝关节病理改变,骨形态计量学方法分析右侧股骨骨结构变化。结果与模型组比较,BMSCs和Anti-huTNFα干预均可缓解Tg-huTNFα小鼠体重的下降,抑制小鼠关节肿大变形,下调外周血huTNFα含量,降低Tg-huTNFα小鼠的关节病理评分,减少关节滑膜和软骨损伤面积。此外,骨形态计量学分析发现,BMSCs干预可提高骨小梁数量和骨小梁面积百分数等,改善Tg-huTNFα小鼠股骨骨结构。结论关节腔注射BMSCs可以显著缓解Tg-huTNFα小鼠类风湿关节炎症状,改善股骨骨结构,缓解RA继发的骨量丢失。

自发性糖尿病食蟹猴的诊断及其骨微结构的改变

目的,对自发性糖尿病食蟹猴进行诊断,并分析其骨微结构的变化,以期建立自发性糖尿病合并骨质疏松动物模型。方法选取13~20岁的自发性糖尿病食蟹猴4只,以年龄相近的动物作为对照;利用快速血糖仪检测空腹血糖及糖耐量,生化仪检测血清中相关生化指标,以此对自发性糖尿病食蟹猴进行诊断;利用Micro-CT测量股骨下段和胫骨上段骨结构,分析自发性糖尿病食蟹猴骨微结构的变化。结果自发性糖尿病组食蟹猴的空腹血糖大于8.0 mmol/L,糖耐量试验120 min时血糖大于10.0 mmol/L,且TG、LDL-C与对照组比较显著升高,HDL-C及Crea显著低于对照组,TC及BUN无明显差异,可确诊为自发糖尿病动物;Micro-CT结果显示自发性糖尿病食蟹猴骨微结构破坏明显,呈骨质疏松表现,且股骨下段和胫骨上段松质骨骨小梁面积、骨小梁体积及骨矿含量均显著低于对照组,而股骨下段和胫骨上段皮质骨两组间比较无明显差异。结论自发性糖尿病食蟹猴与人类糖尿病患者有着相似的临床特征,可作为一种理想的糖尿病合并骨质疏松动物模型。

miR-144、miR-21-3p、miR-142-5p及miR-27b-3p对心肌梗塞后血管再生的作用

目的以五指山小型猪心肌梗塞模型为研究对象,筛选对心肌梗塞易感且可能调控血管生成素-2(ANGPT-2,促血管生长和形成的重要基因)表达的miRNAs。以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为细胞模型,探索候选miRNAs对人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移及细胞血管形成中的作用。方法通过小RNA测序和生物信息学软件预测靶标于ANGPT-2,并且在心肌梗塞组和对照组中差异表达的miRNAs,利用Edu法、Transwell法、体外实验法检测候选miRNAs对HUVECs的增殖、迁移和血管成腔的影响。结果miR-144、miR-21-3p、miR-142-5p及miR-27b-3p是潜在的靶标于ANGPT-2,并且在心肌梗塞和对照两组表达水平差异显著的miRNAs。miR-144不能直接影响HUVECs的增殖,但能抑制细胞的迁移及血管形成;miR-21-3p能抑制HUVECs增殖和迁移,但促进HUVECs血管形成;miR-142-5p和miR-27b-3p能抑制HUVECs增殖、迁移及成管;miR-142-5p和miR-27b-3p能显著抑制ANGPT-2的转录表达。结论心肌梗塞后,miR-142-5p和miR-27b-3p可能通过靶标于ANGPT-2的3’UTR并且抑制ANGPT-2的转录表达,抑制血管内皮细胞的增殖、迁移及血管形成,进而抑制血管再生。

HE切片褪色后进行免疫荧光染色的方法探讨

免疫荧光检测技术具有专一性强、灵敏度高、实用性好等优点[1],为病理检测中一项重要的辅助技术。HE染色是常规的病理学检测方法,有时HE染色下病变的确诊或进一步研究需要进行免疫荧光染色辅助,此时往往会选择重切蜡块,但重切的切片与HE观察不是同一张组织片、需要观察的位置或多或少的发生了改变,不利于与原HE切片进行精准的比较分析,更甚者有些组织块小、重切片未能切出组织切片进行免疫荧光染色。因此,探讨一种HE切片褪色后进行免疫荧光染色的方法具有重要的应用价值。本实验通过实践,摸索了一些简便有效的HE切片染色褪色后进行免疫荧光染色的方法并进行比较分析,现报道如下。

附子与山茱萸配伍对慢性心力衰竭大鼠的影响

目的探讨附子与山茱萸配伍对慢性心力衰竭大鼠增效减毒作用。方法 ip盐酸阿霉素构建大鼠慢性心力衰竭模型,分别给予附子提取物、山茱萸提取物和附子-山茱萸提取物3周后,检测动物血清脑钠素(BNP)含量,心肌细胞Ca2+-ATP酶和Na^+,K^+-ATP酶活性,镜下观察左心室组织病理学形态变化。结果造模3周后,模型组大鼠普遍出现腹水、消瘦、稀便、弓背等症状体征;左心室射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(FS)明显下降;血清BNP水平显著升高;左心室组织出现心肌纤维断裂及心肌细胞变性、坏死等病理改变。连续ig给予附子-山茱萸提取物3周后,大鼠症状及体征明显改善,血清BNP水平下降,心肌细胞Na^+,K^+-ATP酶活性升高,左心室组织病理学形态有明显改善。附子提取物和山茱萸提取物分别连续给药3周,上述指标未见明显改善。结论附子与山茱萸配伍可能通过提高心肌细胞Na^+,K^+-ATP酶活性,改善慢性心力衰竭的心肌能量代谢障碍,提高心力衰竭的心肌活性,起到增效减毒作用。

重组人促红素注射液(CHO细胞)食蟹猴重复给药毒性试验研究

目的研究重组人促红素注射液(CHO细胞)对食蟹猴的长期毒性,预测各组织器官的潜在毒性反应。方法18只普通级成年食蟹猴根据体质量随机分为阴性对照组(生理盐水)和重组人促红素注射液(CHO细胞)低(每周500 IU/kg)、高剂量(每周1500 IU/kg)组,每组6只,雌雄各半;受试品经后肢大腿外侧sc注射给药,每周3次,连续4周;给药结束后,每组处死4只动物(雌雄各半),其余动物停药后进行4周恢复期观察;观察指标包括动物外观体征、行为活动、精神状态等情况,并进行体质量、体温、眼科、心电图、血常规、凝血指标、血生化、免疫细胞检测及组织病理学检查。结果在8周观察期内,各组动物外观体征、行为活动、精神状态、体质量、体温、眼科、心电图、凝血指标、血生化、大体解剖等均未见异常;血常规检查发现,与阴性对照组比较,受试品低、高剂量组红细胞(RBC)、网织红细胞(RET)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板数(PLT)给药后显著升高(P<0.05),淋巴细胞数(LYMPH)显著降低(P<0.05),停药4周后RET、PLT及LYMPH恢复正常水平,而RBC、HGB及HCT仍维持较高水平;免疫细胞检查发现,与阴性对照组比较,给药4周后高剂量组CD3+T细胞比例显著减少,4周后恢复正常水平;病理检查发现,高剂量组3只动物出现股骨骨髓轻度红系增生。结论给予食蟹猴每周1500 IU/kg(相当于10倍临床剂量)重组人促红素注射液(CHO细胞)未发现明显毒性反应,血常规指标及病理学的改变与其药理作用相关。

不同固定液和时间对大鼠睾丸组织病理学制片质量的影响

目的探讨不同固定液和固定时间对大鼠睾丸组织病理学制片质量的影响。方法选用雄性SD大鼠12只,取两侧睾丸组织,共24例标本。每例标本分别用不同的固定液(10%中性福尔马林溶液、30%Davidson固定液及FAA固定液)固定不同的时间(24、48 h)后,进行脱水、包埋、切片、HE染色。用LEICA DM5000B普通光学显微镜观察。结果 3种固定液固定24 h后,可见30%Davidsons固定液组睾丸组织的异常变化程度低于10%中性福尔马林组和FAA组;固定时间对睾丸组织有一定程度的影响:固定24 h的异常变化程度低于固定48 h。结论 30%Davidson固定液组SD大鼠睾丸组织病理学变化程度最小;固定时间不宜超过24 h。