厚朴酚延缓幼年自发性高血压大鼠的高血压进程及其机制

目的:研究厚朴酚对幼年自发性高血压大鼠(SHR)血压及血管胰岛素敏感性的影响并探讨其可能的机制。方法:4周龄SHR和年龄匹配的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠各随机分为2组,分别给予厚朴酚(100 mg/kg)或蒸馏水灌胃。3周后检测其血压、血糖和血浆胰岛素;离体血管环实验检测胰岛素诱导的主动脉舒张效应;Western blotting检测过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)、Tribbles同源蛋白3(TRB3)表达水平以及胰岛素诱导的Akt/内皮型一氧化氮合酶(e NOS)磷酸化。体外高糖(25 mmol/L)、高脂(500μmol/L)培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),厚朴酚孵育后观察PPARγ、TRB3表达水平、胰岛素诱导的Akt/e NOS磷酸化及NO的生成。结果:4周龄SHR血压尚未增高,给予厚朴酚灌胃3周后,血压增高减缓,胰岛素诱导的舒血管效应和Akt/e NOS活性增强,血管组织PPARγ表达增加,TRB3表达减少。高糖高脂培养的HUVECs厚朴酚孵育后,PPARγ表达增加,TRB3表达减少,胰岛素诱导的Akt/e NOS活性增强,NO产生增加;PPARγ拮抗剂预处理HUVECs则可阻断厚朴酚的上述效应。结论:在SHR高血压前期给予厚朴酚干预可以改善血管胰岛素敏感性,延缓血压升高,该作用部分依赖于上调血管组织PPARγ表达和减少TRB3表达,进而增强Akt和e NOS活性,提示厚朴酚有望作为一种早期抗高血压药物在高血压前期使用。

藏药紫花龙胆中龙胆苦苷的LC-M S定性和HPLC定量分析

目的:对藏药紫花龙胆提取液中龙胆苦苷成分进行定性分析和含量测定。方法:利用高效液相色谱-电喷雾-质谱/质谱(HPLC-ESI-MS/MS)联用结合LC-DAD-UV技术,通过和标准化合物龙胆苦苷的保留时间、紫外吸收光谱以及质谱中的准分子离子峰[M+H]+相对照,快速鉴定了紫花龙胆提取液中的龙胆苦苷成分[1]。对其含量的测定则采用了毛细管高效液相色谱方法。结果:一级质谱扫描结果表明紫花龙胆甲醇提取液中主要有5个峰,第一个峰化合物结构为龙胆苦苷,准分子离子峰[M+H]+为356.9,毛细管高效液相色谱结果表明藏药紫花龙胆中龙胆苦苷成分的百分含量为1.97%。结论:藏药紫花龙胆中龙胆苦苷是其主要成分。

肺宁对大鼠博莱霉素肺损伤早期治疗作用的机制研究

目的:观察中药肺宁对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化早期的防治作用.方法:以博莱霉素气管内注入建立肺纤维化模型,次日始分别给与中药肺宁和强的松灌胃治疗,于给药第7,14日处死动物,右肺组织行病理组织学检查,左肺组织匀浆进行超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子(TNFα)含量检测.结果:与博莱霉素对照组相比,肺宁不同剂量组肺泡炎的程度均明显减轻;7d时肺宁各组肺组织匀浆MDA,TNFα含量降低(P<0.05),肺宁高剂量组(4g/kg)、强的松组肺组织匀浆GSH含量升高(P<0.05);14d时肺宁各剂量组、强的松组肺组织匀浆SOD活力、GSH含量均增高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),肺宁中剂量组(2g/kg)、高剂量组(4g/kg)TNFα含量降低(P<0.05).结论:肺宁抗肺纤维化的作用机制与提高SOD的活性,降低脂质过氧化物(LPO)损伤有关,通过提高清除氧自由基能力,改善氧化/抗氧化平衡,对大鼠肺泡炎具有有效的治疗作用.

中药肺宁治疗肺纤维化小鼠的病理学研究

观察中药肺宁对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的治疗作用。以博莱霉素气管内注入建立肺纤维化模型,次日始分别给予中药肺宁和强的松灌胃治疗,于给药后56天处死动物,对肺组织行病理组织学检查。与模型组相比,肺宁高、中剂量组肺泡炎症程度显著降低(P<0.05),肺宁高剂量组肺纤维化等级明显减轻(P<0.05)。肺宁可减轻肺损伤小鼠的炎症反应,能够对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化起到治疗作用。

研究生细胞培养实验教学的准备实践

细胞培养技术是医学和生物学研究中普遍应用的手段,在医学科研和临床应用领域里占据着极其重要的地位,也是研究型学生应该掌握的一门基本理论和技术。研究生在细胞培养实验课中学习到的理论和技术,很快就会应用到今后的科研工作中。结合实验教学的实施过程,浅谈研究生细胞培养技术课程实验教学准备实践中的几点体会。

血管钠肽抑制内质网应激减轻糖尿病大鼠缺血/再灌注心肌损伤

目的观察人工合成的钠尿肽——血管钠肽(VNP)对糖尿病(DM)大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的影响及机制。方法高脂饲料喂养SD大鼠4周后,注射链脲霉素STZ(25 mg/kg,i.p.),1周后随机血糖≥11.1mmol/L为DM模型构建成功,常规制备MI/R(30 min/4 h)模型。将大鼠随机分为4组:假手术组、MI/R组、DM+假手术组、DM+MI/R组。多导生理记录仪检测左室压上升/下降最大速率(±LVd P/dtm ax),Evans blue-TTC双染色法检测心肌梗死面积,TUNEL法进行心肌细胞凋亡测试、试剂盒检测caspase-3活性,Western blot检测GRP78、Chop和PKG等蛋白表达。结果与对照组相比,DM大鼠MI/R心肌损伤加重。VNP治疗(再灌前10 min,给予100μg/kg,i.v)可显著减轻DM大鼠MI/R损伤,包括增强±LVd P/dtm ax,降低心梗范围、死亡率与Caspase-3活性(n=8,P<0.05)。此外,VNP可降低内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP表达(n=3,P<0.01)。VNP上述效应可同时被PKG阻断剂KT-5823(再灌前20 min,给予0.5 mg/kg,i.p)抑制、并被c GMP衍生物8-Br-c GMP(1 mg/kg)模拟(P<0.05,P<0.01)。用内质网应激抑制剂TUDCA(50 mg/kg)预处理DM大鼠,并不能增强VNP的心肌保护作用。结论 VNP治疗可减轻DM性MI/R损伤,其机制可能与通过c GMP-PKG信号抑制内质网应激有关,提示VNP对DM性缺血性心脏病具有潜在治疗价值。

基础医学综合实验课外科研活动的重要性

加强大学生的课外科研训练是培养创新型人才的重要途径。基础医学综合实验打破了以课堂为中心、以书本为中心的传统教学模式,树立以学生教学活动为主体的观念,在探索性实验实施阶段,积极开展学生课外科研活动。根据近年来在指导学生课外科研活动过程中积累的经验,探讨课外科研活动对提高学生综合素质的重要性。

基于创新能力培养的基础医学课程实践教学体系研究

基于创新理念改革实践教学体系,适应学科专业发展需要,开展开放式实验教学,积极构建适应科技进步和时代发展要求的、能够培养大学生创新能力的、较为全面、深入、可行的课程实践教学体系。

如何提高生物化学与分子生物学实验教学质量探讨

生物化学与分子生物学实验课是分生课程教学的重要组成部分，它既与理论教学有着密切联系，又有其自身的规律和系统。通过改革实验教学方法、重视预实验和实验结果分析等环节来提高实验教学质量，在培养学生的实验技能、实践能力和观察、思考及分析解决问题能力等方面有着重要的意义。

基础医学综合实验教学准备的实践

做好机能综合实验教学准备 ,首先明确综合实验内容 ,精心计划周密安排 ;其次抓好细微环节 ,保证实验质量 ,还要充分利用先进实验设备 ,半开放实验教学 ;同时应严格管理制度 。

辣椒素对微波辐射所致小鼠血液系统损伤的保护作用

目的研究辣椒素对微波辐射所致小鼠血液系统损伤的保护作用。方法将小鼠随机分为3组:对照组;辐射组,用频率为2450 MHz、功率密度为65 mW/cm2的微波辐射,连续3 d,每天8 h;辣椒素组,在与辐射组相同的辐射下每天2次辣椒素灌胃,浓度为2.5 g/L,体积为0.2 mL。检测小鼠的红细胞(RBC)计数、嗜多染红细胞微核率、血清超氧化物歧化酶(SOD)与促红细胞生成素(EPO)。结果辐射组微核率升高,SOD,EPO降低,辣椒素组微核率下降至正常,EPO明显上升,RBC计数也明显上升,同时SOD也回升至正常。结论辣椒素对微波所致小鼠血液系统损伤有保护作用,其机制可能与辣椒素的抗氧化作用和促进EPO分泌有关。

135Hz极低频电磁场对HepG-2细胞内Ca^(2+)浓度的影响

目的:研究135Hz(电场强度为80V·m-1)极低频电磁场(ELF)暴露对HepG-2细胞内Ca2+浓度的影响。方法:采用荧光探针Fluo-3/AM标记细胞内Ca2+,135HzELF照射HepG-2细胞1h后,利用激光扫描共聚焦显微镜技术测定细胞内Ca2+浓度,加入L-型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平,探讨135HzELF影响HepG-2细胞内Ca2+浓度变化的具体机制。结果:未暴露组细胞荧光强度较弱,ELF暴露组细胞荧光强度增高,与未暴露组有统计学意义(P<0.01);用硝苯地平干预组细胞荧光强度减弱,与未干预组有统计学意义(P<0.01)。结论:135HzELF可能通过引起L-型Ca2+通道的开放造成HepG-2细胞发生Ca2+超载。

脂肪因子CTRP9对低氧性肺动脉高压大鼠肺血管的舒张作用及其机制

目的观察脂肪因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)对于低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠离体肺动脉的舒张作用,并探讨其可能的分子机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为对照组、HPH 2周组和HPH 4周组,每组8只。对照组动物在正常环境中饲养,低氧组动物按低压低氧法建立HPH模型。模型建立后,用右心导管法测定肺动脉平均压(m PAP)、右心室平均压(mRVP),称质量测量右心室/(左心室+室间隔)〔RV/(LV+S)〕、右心室/体质量(RV/BW);ELISA法检测血清NO和CTRP9水平;HE染色高倍镜下观察肺小动脉显微结构改变。取大鼠左、右肺动脉干制备血管环,行离体灌流实验,观察不同浓度CTRP9的舒张血管作用;收集作用于血管环的灌流液,检测NO产物。收集剩余的肺动脉血管组织,分组后用不同浓度CTRP9孵育,部分组别孵育前加入Compound C或L-NAME,然后行Western blot检测p AMPK/AMPK、p Akt/Akt、pe NOS/e NOS等信号蛋白分子。结果与对照组比,HPH组大鼠的m PAP、mRVP、RV/(LV+S)、RV/BW均显著增高(P<0.01),且血清NO、CTRP9水平下降(P<0.05,P<0.01)。病理切片显示HPH组大鼠肺动脉平滑肌和弹力纤维层增生,血管壁增厚,管腔狭窄、变形。选取对乙酰胆碱和硝普钠有良好舒张反应的血管环,加入CTRP9后血管环明显舒张,预先加入Compound C或L-NAME组,CTRP9舒血管作用被显著抑制;血管环组织AMPK、Akt和e NOS磷酸化水平、灌流液NO产物增加(P<0.05,P<0.01)。结论 HPH时血管内皮功能受损,CTRP9有明显的舒张血管作用,其机制可能与增加AMPK/Akt/e NOS磷酸化和NO释放有关。

牛膝多肽通过抑制氧化应激减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的探讨牛膝多肽(ABPP)预处理对心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的影响及其机制。方法建立大鼠MI/R模型,将成年SD大鼠随机分为Sham(假手术)组、MI/R组、药物预处理(ABPP+MI/R)组。检测血流动力学、用氯化三苯基四氮唑和伊文思蓝双染法检测心肌梗死(MI)面积、以血浆肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性检测心肌损伤情况、以超氧化物、丙二醛(MAD)和超氧化物歧化酶(SOD)含量检测心肌氧化应激以及Western blot方法测定心肌组织中gp91^(phox)的表达。用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡指数(AI),荧光分析法检测caspase 3活性。结果与MI/R组比较,ABPP预处理使左心室上升、下降最大速率(±LVd P/dtmax)升高(P<0.05),MI面积显著减少〔MI/R组为(36.0±3.0)%,ABPP组为(26.5±3.5)%,P<0.05〕,血浆CK和LDH水平分别降低到(1251±72)U/L和(1961±122)U/L(P<0.05),TUNEL阳性染色显著降低(P<0.05),caspase-3的活性增加(P<0.05),超氧化物蓄积减少(P<0.05),显着降低了gp91phox的表达(P<0.05),MDA的含量显著减少(P<0.05),SOD活性增加(P<0.05)。结论 ABPP降低氧化应激和对MI/R损伤的心肌具有保护作用。

脂联素改善间歇性低氧性肺动脉高压大鼠离体肺动脉舒张功能及其机制

目的研究重组人球状脂联素(g Ad)对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠离体肺动脉舒张功能的影响并研究其作用机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、HPH 2周组(HPH2W)、HPH 4周组(HPH4W),每组8只。正常对照组动物在正常环境中饲养,低氧组大鼠以间歇性低压低氧法建立HPH模型。低氧组模型建立后,以右心导管法测定平均肺动脉压(m PAP)、平均右心室压(mRVP),称重测量右心室/左心室+室间隔(RV/LV+S)、右心室/体质量(RV/BW);ELISA检测试剂盒检测血清g Ad及NO浓度。右肺下叶肺组织经HE染色后观察肺小动脉血管显微结构的改变。取大鼠左、右肺动脉干制备血管环,行离体灌流实验,观察不同浓度的乙酰胆碱及硝普钠诱导的血管舒张作用。取HPH4W组动物肺外肺动脉干,分组进行孵育(HPH4W组:Krebs液孵育;HPH4W+g Ad组:g Ad 2μg/ml孵育;HPH4W+g Ad+L-NAME组:g Ad 2μg/ml+L-NAME 0.5 mmol/L孵育),孵育后观察不同浓度的乙酰胆碱及硝普钠诱导的血管舒张作用,然后收集作用于血管环的灌流液,检测NO产物。取HPH4W组大鼠肺动脉血管按上述分组进行孵育,然后行Western blot检测AMPK、Akt、e NOS等信号蛋白分子的表达及磷酸化水平。结果与正常对照组相比,HPH组大鼠的m PAP、mRVP、RV/LV+S、RV/BW均显著增高(P<0.05);血清g Ad、NO水平下降(P<0.05);光镜下肺动脉平滑肌及弹力纤维层增生,管壁增厚,管腔狭窄。与正常对照组比较,HPH组大鼠肺动脉对乙酰胆碱诱导的血管舒张作用明显减弱(P<0.05),正常对照组最大舒张率69.94%,HPH2W组最大舒张率48.79%,HPH4W组最大舒张率仅42.09%。经g Ad体外孵育后,血管环内皮依赖的舒张作用明显增强,HPH4W组最大舒张率可达到46.35%,加入L-NAME组的血管环舒张作用被显著阻断。各组大鼠对硝普钠诱导的血管舒张均有良好反应,无统计学意义。经g Ad孵育后的血管环组织AMPK、Akt、e NOS磷酸化水平、灌流液NO产物均增加(P<0.05),L-NAME可阻断g Ad增强e NOS磷酸化和NO水平的作用。结论 g Ad对间歇性低氧性肺动脉高压大鼠的肺动脉内皮依赖性的血管舒张功能具有确切的直接保护作用。AMPK/Akt/e NOS/NO信号通路可能是g Ad发挥肺动脉保护作用的分子机制。

促发低氧性肺动脉高压的新机制——肺微动脉的血管胰岛素敏感性降低及其信号障碍

目的:观察低氧诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),是否同样存在肺血管的胰岛素敏感性变化?并探讨潜在的分子机制。方法:采用低压低氧法建立低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠模型,14只雄性SD大鼠随机分为:正常对照组和HPH组(低氧4周),每组7只大鼠(n=7)测定两组平均肺动脉压(mPAP)及胰岛素诱导的血管舒张效应。原代培养大鼠PMVEC,分为常氧(21%O2,37℃)和低氧(10%O2,37℃)处理,分别培养6 h、24 h、48 h和96 h收集细胞以Western blot检测Tribbles同源蛋白3(TRB3)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)及胰岛素的磷脂肌醇3激酶/蛋白激酶B/内皮一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路蛋白水平,培养基上清检测一氧化氮(NO)生成量。结果:与正常对照组比较,低氧组mPAP明显升高,胰岛素诱导的肺动脉血管舒张作用明显减弱(P<0.05,P<0.01)。PMVEC在含胰岛素的内皮培养基培养不同时间,低氧组与常氧组相比,培养6 h NO量明显升高,培养24 h后有所下降,随低氧时间的延长下降幅度增大(P<0.01);随低氧时间延长,PI3K-p85、p-Akt、p-eNOS表达逐渐下降,低氧时间越长下降幅度越明显,与NO生成相一致,p-ERK1/2随低氧时间延长表达明显升高;随低氧时间延长TRB3表达增加显著,而PPARγ表达减少(P<0.05,P<0.01)。而不同培养时间常氧组间NO量及上述蛋白表达无显著性差异。结论:低氧可诱导大鼠PMVEC内TRB3的过表达从而负性调控PPARγ,引起下游胰岛素信号通路受损,造成肺血管内皮功能异常,进而促进HPH发生。

135Hz极低频电磁场对Hep G-2细胞骨架及Bcl-2的影响

目的:研究135HzELF照射对HepG-2细胞骨架以及Bcl-2表达的影响。方法:135HzELF分别照射HepG-2细胞6h、12h、24h,运用免疫荧光染色法标记广谱细胞角蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2,用激光扫描共聚焦显微镜观察135HzELF照射后细胞骨架以及Bcl-2的变化。结果:135HzELF照射6h,HepG-2细胞胞浆中的角蛋白在核周呈斑片状表达,荧光增强;照射12h,细胞收缩变圆,HepG-2细胞角蛋白丝状纤维减少,部分呈团块状分布;照射24h,HepG-2细胞中角蛋白分布明显不均匀,浓缩于细胞质边缘,多见团块状分布。与之相对应,随着照射时间延长HepG-2细胞中Bcl-2荧光有减弱趋势。结论:135Hz的ELF照射可引起HepG-2细胞骨架发生凝集、部分断裂等凋亡形态变化,这种变化可能是由于Bcl-2表达减少所致。

构建军医大学任职教育综合性实验教学平台探讨

分析了构建军医大学任职教育综合性实验教学平台的必要性,阐述了构建能满足学历教育、任职教育、研究生教育和科研需要的综合性实验教学平台的基本目标和思路,提出综合性实验教学平台的实验室建设应在原有学历教育实验教学平台的基础上,遵循分类建设,突出特色,有所侧重的原则;实验室实行统管共用,资源共享,全面开放的管理运行模式。

罗布麻叶提取物预处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用

目的:观察罗布麻叶提取物(AVLE)预处理对心肌缺血再灌注(MI/R)大鼠心肌细胞凋亡和细胞信号转导系统中丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的影响。方法:采用SD大鼠MI/R模型(结扎冠脉左前降支起始部30min后再灌注4h),随机分为Sham组(假手术)、MI/R组、AVLE预处理组[AVLE(500mg/kg)灌胃,每日一次,连续灌胃7天后再行MI/R]。用TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡,计算凋亡指数(AI);荧光免疫分析法检测各组心肌组织凋亡蛋白Caspase-3活性;Western Blotting测定心肌组织Akt和ERK1/2的表达水平和磷酸化水平。结果:与Sham组比较,MI/R组心肌细胞AI显著升高(P<0.05),心肌组织Caspase-3活性明显升高(P<0.05),心肌Akt和ERK1/2的磷酸化水平显著降低(P<0.05);与MI/R组比较,AVLE预处理组AI明显下降(P<0.05),心肌组织Caspase-3活性显著降低(P<0.05),Akt和ERK1/2磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结论:AVLE能够抑制缺血再灌注所致心肌细胞损伤,其作用与生存信号通路蛋白PI3K/Akt和ERK1/2的活化水平有关。