从中医药角度探讨阿尔茨海默病与糖尿病的关系

目前研究认为,阿尔茨海默病(AD)与糖尿病(DM)关系密切,DM有可能增加患AD的风险,甚至认为AD是一种大脑糖尿病,称之为3型糖尿病,与2型糖尿病(T2DM)关系密切,二者存在一致的疾病生理机制。本文从中医药病机和临床科研角度出发,探讨AD与DM在中医病机及临床方药应用、实验研究的共性,指出随着对二者发病机制和中医理论应用研究的深入,可挖掘出更多AD与DM两者共同的机制和有效方药,为多元化研究治疗AD和DM,并为异病同治、早期干预提供新的方向和思路。

清除脑内衰老细胞治疗阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种与年龄和衰老相关的进行性认知障碍,发病隐匿且不可逆,已成为全球重大健康和社会经济问题。细胞衰老是影响AD进程的重要因素,而随着研究的不断深入,Senolytic和Senomorphic等疗法可通过清除衰老细胞(SCs)达到治疗AD的目的。故笔者对衰老诱发AD的机制及清除SCs治疗AD的研究进展进行阐述,为AD防治及SCs清除剂的研发提供新的思路。

基于网络药理学的人参二醇对阿尔茨海默病细胞保护作用的研究

目的运用网络药理学预测及体外验证方法,研究人参二醇(PD)对阿尔茨海默病(AD)细胞的保护作用。方法运用网络药理学技术,筛选出107个治疗AD的方剂,筛选出现频率最高的人参及其AD作用的靶点,利用分子对接技术,寻找与非受体酪氨酸激酶(FYN)对接评分最高的成分。体外建立APP-N2a细胞模型,采用MTT法检测细胞存活率;LDH方法检测细胞的损伤程度;流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞内Ca^(2+)浓度变化情况;Western blot检测磷酸化FYN蛋白表达情况。结果通过网络药理学方法筛选出人参中18个活性成分和29个AD相关靶点,分子对接结果显示,PD与FYN有较强的结合性。实验证明,PD可增加细胞的存活率,降低LDH的释放,且可明显减少细胞凋亡,减轻AD细胞内Ca^(2+)超载,降低FYN-Y416蛋白的表达。结论通过实验验证了网络药理学的预测结果,PD对AD的保护作用可能与抑制FYN磷酸化有关。

蛇床子素通过上调微RNA-101a-3p抑制阿尔茨海默病细胞淀粉样前体蛋白表达

目的:研究阿尔茨海默病细胞模型中蛇床子素抑制淀粉样前体蛋白(APP)的作用及机制。方法:脂质体2000转染建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型。利用MTT和乳酸脱氢酶(LDH)法检测蛇床子素对APP高表达细胞的存活率和损伤程度的影响。利用基因芯片技术筛选给予蛇床子素治疗后差异表达的微RNA(miRNA),然后通过生物信息学分析预测与差异表达miRNA靶向结合的基因。细胞内转入差异表达miRNA的抑制剂,然后采用免疫荧光细胞化学法观察细胞中APP、β淀粉样蛋白(Aβ)表达情况,RT-PCR法检测细胞中APP mRNA表达。结果:实验成功构建了APP高表达的阿尔茨海默病细胞模型。MTT和LDH法检测结果显示,蛇床子素对于APP高表达的细胞具有一定的保护作用,可以减轻细胞的损伤。miRNA-101a-3p是蛇床子素调控较明显的miRNA,其与APP的3'非翻译区靶向结合。与模型对照组比较,miR-101a-3p抑制剂组APP和Aβ蛋白荧光强度增加,APP mRNA表达量增加(均P<0.01);加入蛇床子素后细胞中APP和Aβ蛋白荧光强度降低,APP mRNA表达量减少(均P<0.01)。结论:在阿尔茨海默病细胞模型中,蛇床子素通过上调miR-101a-3p抑制APP表达。

蛇床子素上调miRNA-9抑制BACE-1表达治疗阿尔茨海默病

目的探讨蛇床子素上调miRNA-9治疗AD的作用机制。方法基因芯片技术筛选蛇床子素治疗后差异表达的microRNAs;数据库和Cytoscape预测miRNA-9调控的靶基因;脂质体2000建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型,MTT法检测蛇床子素对细胞活力的影响;将miRNA-9抑制剂转入到APP高表达的SH-SY5Y细胞中,RT-PCR法检测各组miR-9、BACE-1 mRNA的表达情况;Western blot方法检测细胞中BACE-1蛋白的表达情况。结果数据库结果显示,蛇床子素调控的miRNA-9可以与BACE-1靶向结合。本实验成功建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型。MTT结果显示,50μmol·L^(-1)蛇床子素对细胞有较好的保护作用。RT-PCR结果显示,蛇床子素可以上调miR-9的表达,抑制剂组miRNA-9表达最低。与模型组相比,蛇床子素可以抑制BACE-1 mRNA和蛋白的表达,且抑制剂组的BACE-1 mRNA和蛋白表达最多。结论蛇床子素治疗阿尔茨海默病可能与上调miRNA-9,从而抑制BACE-1表达有关。

人参二醇对APP-SH-SY5Y细胞中Tau蛋白磷酸化及Fyn/GluN2B信号通路的影响

目的:研究人参二醇(PD)对转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y(APP-SH-SY5Y)中Tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。方法:采用分子对接技术验证PD与非受体酪氨酸激酶Fyn的靶向性。在体外培养SH-SY5Y细胞,构建APP-SH-SY5Y细胞模型和绿色荧光蛋白(GFP)-SH-SY5Y细胞模型(对照细胞),通过检测细胞中β淀粉样蛋白(Aβ1-42)的表达来验证APP-SH-SY5Y细胞模型是否构建成功。以GFP-SH-SY5Y细胞为对照,采用CCK-8法检测5、10、20、30、40μmol/L的PD和125、250、500、1000、2000 nmol/L的PP2(Fyn抑制剂,阳性对照)作用24 h对APP-SH-SY5Y细胞存活率的影响,以确定最佳给药浓度。以APP-SH-SY5Y细胞为对象,分别检测最佳浓度PD、PP2作用24后细胞中Ca2+浓度及磷酸化Tau蛋白(p-Tau)/Tau、磷酸化非受体酪氨酸激酶Src(p-Src)/Fyn、磷酸化谷氨酸受体2B(p-GluN2B)/GluN2B比值。结果:分子模拟对接结果显示,PD可靶向结合Fyn蛋白。与GFP-SH-SY5Y细胞比较,APP-SH-SY5Y细胞中Aβ1-42蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。PD和PP2的最佳作用浓度分别为20μmol/L和500 nmol/L。20μmol/L PD、500 nmol/L PP2均可显著升高细胞的存活率,显著降低细胞中Ca2+浓度以及p-Tau/Tau、p-Src/Fyn、p-GluN2B/GluN2B比值。结论:PD可通过抑制Fyn/GluN2B信号通路来降低APP-SH-SY5Y细胞中Ca2+浓度及Tau蛋白的磷酸化水平。

基于非标记定量蛋白质组学技术筛选阿尔茨海默病细胞模型的生物标记物

目的研究Aβ诱导SH-SY5Y细胞构建阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)细胞模型蛋白质组学,并筛选该细胞模型潜在的生物标记物。方法将培养的SH-SY5Y细胞分为正常对照组和Aβ寡聚体诱导AD细胞模型组,通过非标记液相色谱-串联质谱技术对正常对照组和AD组进行比较蛋白质组学分析,并结合生物信息学分析,对筛选出的差异蛋白进行GO富集分析、KEGG通路注释、PPI网络构建。结果成功鉴定到2512个蛋白质,根据符合表达差异倍数大于2倍(上下调)和统计学显著性(P<0.05)标准进行筛选,得到了336个差异蛋白质,B组中共172个表达上调的蛋白,164个表达下调的蛋白。差异蛋白的KEGG通路注释结果显示,阿尔茨海默通路(hsa05010Alzheimer’s disease,P<0.05)通路发生显著性变化,结合GO富集分析,在鉴定到的差异蛋白中,发现APP、HSD17B10、NDUFA5、LPL表达量在AD细胞模型组与正常对照组中表达具有显著性差异。结论APP、HSD17B10、NDUFA5、LPL具有作为Aβ1-42诱导SH-SY5Y构建AD细胞模型生物标记物的潜能。

基于肠脑轴探讨地黄饮子对APP/PS1转基因阳性小鼠神经功能的改善作用及机制

目的探讨地黄饮子对APP/PS1转基因阳性小鼠神经功能的改善作用及可能机制。方法将APP/PS1转基因阳性小鼠随机分为APP/PS1阳性模型组,地黄饮子低、中、高剂量(12、24、48 g/kg,按生药量计)组和西药组(盐酸多奈哌齐0.8 mg/kg),并以APP/PS1转基因阴性小鼠作为APP/PS1阴性正常组,每组6只。各药物组小鼠灌胃相应药液,APP/PS1阳性模型组和APP/PS1阴性正常组小鼠灌胃同体积生理盐水,每天1次,连续28 d。末次给药后,考察各组小鼠的学习和记忆能力,肠道菌群多样性(仅地黄饮子中剂量组)、海马组织神经细胞病理改变,以及Bcl-2、Bax、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达情况。结果与APP/PS1阳性模型组比较,地黄饮子中、高剂量组小鼠的逃逸潜伏期显著缩短,穿过原平台次数显著增加(P<0.05)。与其余组比较,地黄饮子中剂量组的Chao1指数更低,Shannon指数更高(P<0.05),且其微生物菌群的操作分类单位(OTU)丰度有所降低,优势菌种为梭菌纲o_Clostridia_vadinBB60_group、疣微菌g_UCG_005。与APP/PS1阳性模型组比较,地黄饮子中、高剂量组小鼠海马CA1区神经细胞病理改变有所改善,其海马组织中Bcl-2、BDNF蛋白的表达均显著上调,Bax蛋白的表达均显著下调(P<0.05)。结论地黄饮子可增强肠道菌群多样性,改变优势菌种,并能抑制大脑神经细胞凋亡,提高BDNF水平;其作用机制可能是借助肠脑轴来保护神经细胞,从而提高APP/PS1阳性模型小鼠的学习和认知能力。

活熊取胆汁试验研究(第一报)

本试验是用特殊的手术方法在活熊机体上长期接取胆汁,为国内外解决熊胆原料紧缺问题开辟了新路。试验研究中,对活熊取胆汁的全套手术操作规程、取胆汁导管、取胆汁器械、接取胆汁、胆汁加工及保存等技术措施进行了全面摸索和观察,取得了较为满意的效果。

任务驱动教学法在《医学实验动物学》教学中的应用

旨在探索驱动教学法在中医药院校硕士研究生课程《医学实验动物学》中的应用。扼要介绍任务驱动教学法的特点,基于该方法进行了任务设计,探讨其具体实践及其应用效果。在《医学实验动物学》教学中,任务驱动教学法的应用有助于教师的专业素质提升,有利于学生学习兴趣和科研能力提升及主观能动性培养。任务驱动教学法值得在《医学实验动物学》课程教学中进行推广与应用。

NOVA快速筛查恶性肿瘤158例临床报告与分析

目的探索恶性肿瘤超早早期诊断方法。方法对158例肿瘤患者快速筛查结果与其手术后病理切片结果对照。结果 NOVA定性诊断与病理切片结果完全一致,定位诊断与病理切片符合率95.6%。结论NOVA在健康人群快速筛查超早早期恶性肿瘤领域前景十分广阔。

蛇床子素长循环脂质体对APP/PS1小鼠神经保护作用

目的探究蛇床子素长循环脂质体(Ost-Lips)对APP/PS1小鼠的神经保护作用。方法利用薄膜分散法制备Ost-Lips;将6月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、蛇床子素游离药组(Ost,10 mg/kg)、Ost-Lips组(10 mg/kg),以同龄C57BL/6小鼠为对照组,每日1次腹腔注射相应药物,模型组和对照组注射相同体积的生理盐水,连续6周。免疫荧光染色检测皮层及海马区β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、小胶质细胞特异性标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)评价神经组织炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒法验证药物对神经组织的保护作用;6周给药后进行Morris水迷宫实验,训练5 d记录逃避潜伏期及游泳距离,最后1 d记录穿越原平台次数以及停留原平台所在象限的时间。结果给药6周后,Ost-Lips明显较Ost更有效的减少APP/PS1双转基因小鼠脑Aβ1-42的沉积,减少胶质细胞过度活化,抑制炎症因子的释放,降低脑内SOD、MDA的水平,并能更好的提高APP/PS1双转基因小鼠的学习与记忆能力。上述结果与模型组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论初步证明Ost-Lips对APP/PS1小鼠具有比Ost更有效的神经保护作用。

精准信息医疗——MORA探索疾病的起因

目的采用对照比较方法,分析MORA生物共振仪(MORA)对过敏性疾病的疗效。方法选取建华医院2014年1月—2015年12月以常规酶联免疫法检测过敏原并辅以常规患者776例为对照组,以MORA生物共振治疗仪检测和脱敏治疗过敏性疾病患者2 500例为研究组,对所有患者使用MORA生物共振治疗仪/酶联免疫法检测过敏原检测过敏原,并对其行脱敏治疗,治疗过程中观察并记录不良反应发生次数及症状,并对其疗效和患者接受程度进行评估。结果 1年半时间内,MORA共治疗患者约6 100例,其中过敏性疾病约2 500例,高尿酸:300余例;高血脂:2 000例;高血压:200例;肠道修复:850例;肿瘤患者:200余例;其他:50例,其中两组的的治疗有效率分别为60.2%、90.1%,治疗有效率比较差异有统计学意义(P<0.05);同时,问卷调查显示,患者MORA生物物理治疗仪检测治疗过敏原可接受性显著高于酶联免疫法,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论采用MORA生物物理治疗仪进行过敏原判定并治疗的患者的治疗过程具有如下优点:患者痛苦小,治疗无创伤,治疗时间短、治疗见效快。因此,该治疗方法在临床应用上值得推广。

“七平衡整合肿瘤诊治技术”应用移植肝转移癌1例探索与研究

我国1977年开展人体肝移植的尝试,随着经验的积累,尤其是近10年的飞速发展,我国的肝移植已跻身于国际先进行列,术后疗效已接近国际先进水平,2014年8月MORA科成功救治一名因肝癌复发行肝移植术术后广泛转移的患者,报告如下。1资料与方法1.1临床资料患者,男,37岁,2年前于体检时发现肝脏占位性病变,并于2012年5月26日行肝癌切除术,病情好转出院。

地黄饮子对 APP /PS1 双转基因小鼠肠道菌群的影响

目的采用16S rRNA测序技术,检测地黄饮子对5月龄APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群多样性、相对丰度等差异。方法将转基因APP/PS1(-)小鼠设为正常组,其余转基因阳性APP/PS1(+)分为模型组、中药组和西药组。中药组灌胃给予地黄饮子24g·kg^(-1),西药组灌胃给予安理申0.8mg·kg^(-1),正常组ig给予同等体积的生理盐水,1次/d,连续28 d。提取试剂盒抽提各组粪便样本中DNA,对V3-V4区进行PCR扩增,再使用Illumina Miseq PE300高通量测序平台进行Paired-end测序。最后对数据进行生物信息学分析,结果本研究共得到1003个OTUs。物种累积曲线表明本研究所收集的样本量充足。Alpha多样性分析,中药组与其余组相比显著提高了菌群的多样性,Beta多样性分析,各组数据组间差异明显,物种韦恩图显示,中药组和西药组均能降低APP模型小鼠的微生物菌群OTU丰度,但较正常组增加了OTU丰度。菌种分类水平提示地黄饮子更倾向提升菌群的多样性,尤其是在厚壁菌门的菌种,优势菌种的比例更接近正常组;LEfSe分析中药组的优势菌群是梭菌纲o_Clostridia_vadinBB60_group,疣微菌g_UCG_005。结论地黄饮子可能通过肠道菌群改变菌群差异性和多样性,提高厚壁菌门、芽孢杆菌属、乳杆菌属、毛螺旋菌属等菌种丰度,以肠脑轴的方式改善AD的认知症状。

远志和石菖蒲有效成分对APP-NSCs保护及促进增殖分化作用

目的:比较远志、石菖蒲中活性成分远志皂苷B、细叶远志皂苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖、β-细辛醚对阿尔茨海默病神经干细胞模型的保护、促进增殖分化作用。方法:转染高表达APP基因NSCs (APPNSCs)为模型,检测细胞活力及LDH释放量,测量神经球直径并绘制生长曲线,检测APP-NSCs向星形胶质细胞、神经元、少突胶质细胞分化比率。结果:4种药物均提高APP-NSCs存活率,降低LDH释放量。β-细辛醚、远志皂苷B、3,6’-二芥子酰基蔗糖促进APP-NSCs增殖作用显著,细叶远志皂苷较弱。促进NSCs向神经元分化效果3,6’-二芥子酰基蔗糖最好,β-细辛醚次之,远志皂苷B再次之,细叶远志皂苷没有显著效果。结论:在APP-NSCs保护作用及促进增殖及促进向神经元分化作用中3,6’-二芥子酰基蔗糖效果最好,β-细辛醚次之,远志皂苷B再次之,细叶远志皂苷有细胞保护作用,但没有显著促进NSCs增殖及向神经元分化效果。

基于网络药理学的开心散治疗阿尔茨海默病的作用机制分析

采用网络药理学方法筛选开心散治疗阿尔茨海默病的主要活性成分并研究其作用机制。利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)和TTD数据库查找阿尔茨海默病的靶标蛋白,取两种方法交集得到的靶蛋白确定为阿尔茨海默病的靶蛋白;基于ADME算法筛选开心散药效成分并利用反向药效团匹配方法 (Pharm Mapper)进行开心散靶点预测,运用Uniprot数据库查询靶蛋白对应的基因名称并选择人源蛋白最终得到开心散调控的阿尔茨海默病靶蛋白;运用Cytoscape3.5.1软件构建开心散活性成分-阿尔茨海默病靶标网络并进行网络拓扑学分析;通过STRING数据库和DAVID数据库对靶点进行基因本体(Gene Ontology, GO)富集分析及基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路分析。通过Discovery Studio分子对接软件对网络药理学分析结果进行验证。研究得到开心散中满足类药性、口服生物利用度和入血的药效成分有31个,与阿尔茨海默病相关的靶点有8个。GO条目31个,其中生物过程条目有13个,分子功能条目7个,细胞组成条目11个。KEGG通路5条,包括钙信号通路和PI3K-Akt信号通路等。Discovery Studio分子对接结果表明,开心散活性成分与重要靶点结合活性较好,且阳性药与靶点的结合有很高的评分。开心散治疗阿尔茨海默病具有多成分、多靶点的优点,通过网络药理学方法研究开心散治疗阿尔茨海默病的活性成分和作用机制,为进一步揭示其作用机制提供了新的思路。

蛇床子素上调miR-9促进神经干细胞分化的研究

目的:探讨蛇床子素对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的神经干细胞分化的作用及其可能作用的机制。方法:体外分离并培养新生小鼠脑源NSCs,体外以20μmol/L的Aβ1-42诱导神经干细胞,建立阿尔茨海默病的神经干细胞模型,通过CCK-8法检测神经干细胞存活率;免疫荧光细胞化学法研究蛇床子素对Aβ1-42诱导的神经干细胞分化能力的影响;RT-PCR检测miR-9 mRNA的表达情况。结果:免疫荧光细胞化学法显示神经球显Nestin、Sox2阳性,即所培养的细胞为NSCs;CCK8法结果显示50μmol/L、100μmol/L蛇床子素作用可明显促进NSC存活;Aβ1-42孵育的NSCs用蛇床子素(50、100μmol/L)作用后,神经干细胞向神经元分化的数量明显增加,以蛇床子素100μmol/L作用神经干细胞向神经元分化的数量增加最显著。而转染了miR-9抑制剂后,与Aβ1-4220μmol/L组相比,Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂组的NF-M阳性细胞率明显降低,而Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂+蛇床子素100μmol/L组NF-M阳性细胞率与Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂组相比显著增加;PCR结果显示,蛇床子素100μmol/L可增加miR-9 mRNA的表达。结论:蛇床子素可促使NSCs向神经元分化,其机制可能与蛇床子素上调miR-9信号通路有关。