日本七鳃鳗(Lampetra japonica)髓细胞cDNA文库构建及EST序列分析

选取日本七鳃鳗(Lampetra japonica)神经轴体中分离出的髓细胞,采用SMART技术成功构建七鳃鳗髓细胞cDNA文库,并随机挑选部分克隆子进行测序及生物信息学分析,对其质量进行了检测.检验结果显示,本次实验所构建的cDNA文库滴度>2.8×105 pfu/mL,符合大规模测序的标准.运用Blast2GO软件进行生物信息学比对,发现5 749个转录本在NCBI数据库中找到同源或相似序列.其中分别有39.52%、30.30%和30.18%的转录本承担生物学途径、分子功能和细胞组件等功能.EST序列的研究是目前为止获得新功能基因最有效的手段,日本七鳃鳗髓细胞cDNA文库的构建成功,将为下一步在七鳃鳗髓细胞中寻找具有研究价值的新功能基因指明方向.

日本七鳃鳗MIF多克隆抗体的制备及应用

目的以日本七鳃鳗(Lampetra japonica)类淋巴细胞为研究对象提取总RNA,通过RT-PCR方法获得七鳃鳗MIF基因对其进行生物信息学分析。方法将MIF基因构建到原核表达载体p ET-28a上,诱导表达并纯化MIF蛋白。以可溶表达的MIF蛋白免疫新西兰兔,应用间接ELISA方法和Western blot方法检测多克隆抗体。结果 ELISA检测抗体效价为1∶512 000;Western blot结果显示该多克隆抗体能特异性的结合重组和天然MIF蛋白;流式细胞术分析确定了19.36%的七鳃鳗类淋巴细胞表达MIF分子;激光共聚焦分析技术确定MIF分子主要定位于七鳃鳗类淋巴细胞的细胞浆中。结论重组MIF蛋白表达及多克隆抗体的成功制备,为七鳃鳗免疫功能方面的相关研究奠定了基础。