基于ISO20387样本库质量控制之人员比对分析

目的基于ISO20387生物样本库通用要求,通过不同工作年限的技术人员同时进行DNA提取实验,探索通过人员比对方法对样本库人员进行能力评估。方法样本库3位不同工作年限的技术人员使用相同样本设备试剂进行DNA提取,全过程严格遵循操作规程,对DNA得率进行分析,使用Qubit对完整性进行评价。结果3位不同操作人员提取的DNA得率和Qubit结果有明显差别,日常工作人员与技术主管操作无差异,新加入实验室人员与技术主管有明显差异。结论人员操作对样本质量有明显影响,人员比对作为实验室质量保证的途径之一,方法较为灵活、简便,可用于样本库人员能力评估,通过人员能力评估可以及时发现人员操作是否合格,保证生物样本处理的质量。

血浆置换治疗视神经脊髓炎谱系疾病及其有效性分析——附4例报告

目的探讨血浆置换(PE)对激素治疗无效的视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)的治疗效果。方法收集本院2016-2017年神经病学中心神经感染与免疫疾病科收治住院的84名NMOSD患者的病历资料,从中选择出因激素治疗无效而采用PE治疗的急性期NMOSD病例,采用回顾性分析方法比较治疗前后扩展残疾状态量表评分(EDSS)的差异,评价PE疗效和副作用,并与仅用大剂量甲泼尼龙冲击治疗NMOSD病例的显效时间、EDSS评分作对比。结果本组中因激素治疗无效而采用PE治疗的急性期NMOSD患者的比例为4.76%(4/84);PE置换量183-1625.4(中位数1118.7)mL/次;经PE治疗后EDSS评分由6.13±0.41降为4.88±0.96(P<0.05),EDSS平均下降1.25分;而经激素冲击治疗后EDSS平均下降0.75分。患者视力、肌力较前好转时间:采用PE者1-3(中位数2.5)d(1例于PE 1.5 h时出现过敏反应,PE治疗后EDSS下降2分);仅采用激素冲击治疗者2-14(中位数6.4)d。本组经PE治疗的NMOSD患者除抗-AQP4,其他免疫抗体,包括抗核抗体、抗-SSA、抗-SSB、RO-52抗体阳性效价明显下降。结论 PE对常规疗法无效的NMOSD具有较快缓解和稳定病情的作用,可能对难治性NMOSD是1种有效、安全的疗法。

脑膜恶性黑色素瘤病脑脊液细胞学及神经影像学特点

目的探讨脑膜恶性黑色素瘤病的临床、脑脊液细胞学及神经影像学特点。方法分析我院收治的3例脑膜恶性黑色素瘤病患者的临床表现、脑脊液细胞学检查结果以及神经影像学特点。结果 3例患者中女性2例,男性1例,均以全头胀痛、呕吐等高颅压症状起病,随后出现脑膜刺激征。行颅MRI检查均提示脑膜有广泛强化。腰穿可见脑脊液中有大量的异型细胞,呈簇或散在分布,胞体大小不一,胞膜不规则有突起,细胞质嗜碱性,细胞核深染。结论脑膜黑色素瘤病临床主要表现为头痛、呕吐等高颅压症状以及脑膜刺激征,如果脑脊液中发现有大量的异型肿瘤细胞,颅MRI提示有病灶以及脑膜明显强化,患者皮肤伴有黑痣,对脑膜黑色素瘤病的确定诊断都具重大的意义。

聚合酶链反应(PCR)检测关节腔液中的结核杆菌DNA

自聚合酶链反应(PCR)技术问世以来,已得到愈来愈广泛的应用,该技术用于检测胸腹水、脑脊液及痰中的结核杆菌 DNA 已见报道,但应用于关节腔液中结核杆菌 DNA 的检测尚未见报道。膝关节结核患病率高,在各部位关节结核中仅次于脊柱结核丽占大关节结核之首位。膝关节滑膜结核发生率比骨结核高,为求得对膝关节滑膜结核的早期诊断。

PAS综合疗法对兔动脉粥样硬化病变的干预

目的探讨普罗布考抗氧化、氯吡格雷抗血小板制剂、阿托伐他汀联合用药对兔动脉粥样硬化病变的干预作用。方法新西兰雄性大白兔36只随机分为4组,分别给予正常饮食及高脂饮食6周后高脂组再分为3组:高脂组,高脂+阿托伐他汀2.5 mg/(kg.d)组,高脂+普罗布考(1.0 g/d)+氯吡格雷5 mg/(kg.d)+阿托伐他汀2.5 mg/(kg.d)PAS组,继续喂养4周后观察主动脉动脉粥样硬化斑块形成情况,分别采用HE染色和免疫组织化学染色观察斑块部位内膜病变程度和炎症细胞的表达。结果高脂组主动脉有粥样硬化病变形成,病变内有大量巨噬细胞聚集。阿托伐他汀和PAS组动脉粥样硬化病变明显减轻,斑块部位内膜面积和厚度下降,巨噬细胞数量显著减少,与高脂组比较差异具有显著性(P<0.01),联合治疗组优于阿托伐他汀组(P<0.05)。结论抗氧化、抗血小板、他汀联合用药对动脉粥样硬化斑块的形成和炎症具有明显的干预作用,其作用优于单纯使用阿托伐他汀,说明联合治疗对于稳定斑块、以及干预缺血事件的发生较单纯使用他汀类药物更具有临床应用的意义。

骨髓基质细胞体外分化移植对局灶脑缺血大鼠分子表达及行为的影响

目的观察大鼠骨髓基质细胞分化为内皮细胞后静脉移植治疗大鼠永久大脑中动脉闭塞模型(MCAO)后缺血脑血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体FLK-1的表达以及动物行为学改变。方法利用400 ng/ml重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)在体外诱导骨髓基质细胞分化为内皮细胞。线栓法制作永久SD大鼠MCAO模型(n=45),24 h后细胞移植组(n=15)舌静脉注射3×106分化后的内皮细胞,对照组1(n=15)注射等量PBS,对照组2(n=15)血管闭塞后不予任何处理。在细胞移植前及移植后1、3、5、7、14 d分别采用姿势反射实验、肢体不对称应用实验和角落实验观察大鼠动物行为学评分的变化,并通过免疫组化染色方法观察缺血脑组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体FLK-1的表达。结果细胞移植组动物行为学评分优于对照组1、2,在移植后第7天和第14天较两个对照组有显著性差异(P<0.05);各组缺血侧脑组织缺血周边和皮层VEGF、FLK-1阳性细胞较非缺血侧增多(P<0.05),其中以细胞移植组最明显(P<0.05);VEGF主要表达在神经元、神经胶质细胞和部分内皮细胞,FLK-1主要表达在内皮细胞和部分神经元、神经胶质细胞;细胞移植组缺血侧毛细血管增生较对照组多(P<0.05)。结论骨髓基质细胞体外诱导分化后的内皮细胞静脉移植可以改善大鼠局灶脑缺血的神经功能;内皮细胞移植后可促进缺血脑组织VEGF、FLK-1的表达;动物神经功能的改善机制可能与VEGF、FLK-1的表达增加,内皮细胞及毛细血管增殖有关。

普罗布考、氯吡格雷、阿托伐他汀综合疗法对兔动脉粥样硬化相关炎性因子的抑制作用

目的探讨普罗布考、氯吡格雷和阿托伐他汀联合用药对兔动脉粥样硬化相关炎性因子的抑制作用。方法新西兰雄性大白兔36只随机分为4组,分别给予正常及高脂饮食,6周后高脂组再分为高脂组、高脂+阿托伐他汀组、高脂+普罗布考、氯吡格雷、阿托伐他汀联合干预组,继续喂养4周后采用免疫组织化学染色法观察主动脉斑块部位炎性因子的表达。结果高脂组主动脉中血管细胞粘附分子1、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的表达明显增加。阿托伐他汀组炎性因子血管细胞粘附分子1、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的表达下降,与高脂组比较差异具有显著性(P<0.05),联合干预组血管细胞粘附分子1、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的表达下降更为明显(P<0.01),与阿托伐他汀组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论抗氧化、抗血小板、他汀联合用药对动脉粥样硬化炎性因子的表达具有明显的抑制作用,其作用优于单纯使用阿托伐他汀。

缺血性卒中血几丁质酶3样蛋白1水平与神经功能损害程度的关系

目的探讨血几丁质酶3样蛋白1(chitinase 3-like 1,CHI3L1)与缺血性卒中疾病严重程度之间的关系.方法本研究资料来源于第三次中国国家卒中登记(the third China National Stroke Registry,CNSR-Ⅲ)的缺血性卒中生物标志物亚组研究.连续性收集发病后7d内的缺血性卒中和短暂性脑缺血发作患者,并在基线收集血液标本.用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆CHI3L1水平,并根据血浆CHI3L1浓度将患者分组,校正多种混杂因素后分析血浆CHI3L1水平与美国国立卫生研究院神经功能缺损评分(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)的关系.结果本研究纳入8006例首发缺血性卒中,按照血浆CHI3L1浓度按照三分位从低到高分为3组,各组CHI3L1平均浓度分别为(30.4±8.5)mg/L(低浓度组)、(64.9±13.5)mg/L(中浓度组)和(164.6±50.4)mg/L(高浓度组).低、中、高浓度组患者NIHSS评分为0~3分者所占比例分别为55.8%、52.6%和47.3%,4~7分者所占比例分别为30.6%、32.0%和33.0%,8~14分者分别为12.1%、13.1%和15.0%,15~21分者分别为1.2%、1.7%和3.6%,≥22分者所占比例分别为0.4%、0.8%和1.2%.校正混杂因素后,以低浓度组为对照,中浓度组(OR=1.14,95%CI:0.98~1.34)和高浓度组(OR=1.50,95%CI:1.28~1.76)重度患者(NIHSS≥8分)比例更多.结论入院时血CHI3L1升高提示缺血性卒中病情严重.检测血CHI3L1有助于从血液标志物角度更好地筛选病重患者,为将来的分层治疗奠定基础.

白藜芦醇对大鼠腔隙性脑梗死模型急性期的脑保护作用

目的 :探讨白藜芦醇 (RES)对大鼠腔隙性脑梗死 (LI)模型急性期的脑保护作用。方法 :6 0只雄性SD大鼠 ,随机分为 4组 ,按照Toshima腔隙性脑梗死模型的制作方法 ,于实验第 1d、3d右颈内动脉内注射 10 0 μg月桂酸钠建立LI模型 ,其中 3组每d 1次尾静脉内注射不同剂量的RES(剂量分别为 1μg/kg、0 .1μg/kg、0 .0 1μg/kg) ,第 4组只注射等量溶剂作为对照。采用姿势反射试验评价神经功能缺损 ,组织病理学分析脑梗死面积。结果 :第 2次注入月桂酸钠后 72h(实验第 6d) ,1μg/kg ,0 .1μg/kg ,0 .0 1μg/kgRES剂量组及对照组中 ,有神经功能缺损的大鼠分别占 4 6 .7%、4 0 .0 %、73.3%、73.3% ,4组数据行 χ2 检验 ,总体差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,1μg/kg ,0 .1μg/kgRES组有减少LI模型脑梗死面积的趋势 ,但总体差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :RES在LI急性期有减少LI面积 ,改善神经功能缺损的可能 。

中国脑血管病多中心临床研究生物样本库建设模式探讨

目的开发适合我国的脑血管病多中心临床研究生物样本库的建设及管理模式,为提高脑血管病专病队列研究生物样本质量、促进资源共享提供技术保障。方法基于国际标准化组织等机构的标准化思路,参考多中心临床试验项目经验,结合脑血管病专病队列研究实际需求,形成我国脑血管病多中心临床研究生物样本库建设及管理模式。从场地、设施设备、操作规程、质量控制等多个维度,建立多中心临床研究生物样本管理流程。结果依据本研究提出的建设要求,开发了天坛脑血管病多中心临床研究生物样本管理系统,建立了多中心临床研究生物样本质量管理体系。结论天坛脑血管病多中心临床研究生物样本库实现了各中心统一、标准、实时、全流程的质量管理,可以保障多中心临床研究项目的生物样本质量水平,为脑血管病筛查、预警、诊断与干预等精准医学研究提供高质量生物样本资源。

复发性念珠菌性阴道炎生态治疗的微生态研究

目的 探讨复发性或顽固性阴道炎的生态治疗方法 ,保护阴道的微生态平衡 ,使治疗收到事半功倍的效果。方法 门诊外阴阴道念珠菌病的患者共 12 4例 ,6 9例久治不愈或反复发作者为观察组 ,5 5例初染者为对照组。观察组药物包括氟康唑或制霉菌素片 ,消炎粉 (自制 ) ,酮康唑乳膏 ,已烯雌酚 ,乳糖和洁菌宁等 ;对照组以氟康唑或制霉菌素片等常规治疗。结果 观察组的疗效显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论 该文所探索的“生态治疗”方案临床效果显著 ,尤其根据患者的不同情况和菌谱特征调整用药方案和配药比例 ,使治疗个体化 。

灯盏细辛对大鼠缺血-再灌注损伤的保护作用

目的:评价灯盏细辛对大鼠缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:将40只SD大鼠随机分为两组,分别为生理盐水组和灯盏细辛治疗组,每组20只。①生理盐水组,造模成功后,每天给予1ml/100g生理盐水腹腔注射。②灯盏细辛治疗组,造模成功后,每天给予1ml/100g灯盏细辛注射液腹腔注射。7d后处死动物,取脑,每组10只行TTC染色,测量梗死体积,计算出梗死体积百分比;10只行免疫组化染色,测量MMP-9表达水平。结果:灯盏细辛治疗组和生理盐水组梗死体积百分比分别为(8.01±0.86)%和(9.49±0.76)%,灯盏细辛治疗组有减小梗死体积的趋势,但两组无显著性差异;脑组织免疫组化染色MMP-9表达分别为(31.89±12.50)和(37.08±6.05);两组有显著性差异。结论:灯盏细辛可显著降低MMP-9表达及减小梗死体积,对缺血脑组织具有保护作用。

脑血管病生物样本库建设标准研究

目的开发适合我国脑血管病精准医学研究的生物样本库建设及管理标准,为建设可开发共享的脑血管病生物样本库提供技术保障。方法参考国际大型生物样本库建设经验,基于国际标准化组织等机构的标准化思路,形成我国脑血管病生物样本库建设标准框架,从场地设施、设备、操作规程、数据标准、信息化等多个维度,对样本库的建设提出技术要求。结果依据本研究提出的建设标准,建立了符合国际标准的天坛脑血管病生物样本库运行及质量管理体系,建成标准化采集、处理、保藏的10万人次脑血管病临床研究生物样本资源平台。结论天坛脑血管病生物样本库具有样本量充足、多样、多时点采集的生物样本资源,并实现了标准化的信息存储,可为对接脑血管病多组学研究,脑血管病精准筛查、预警、诊断与干预等精准医学研究提供技术支撑。

腔隙性脑梗死动物模型的建立

目的 选择性损伤大鼠脑穿支动脉内皮细胞 ,导致微小动脉内原位血栓形成 ,从而建立大鼠腔隙性脑梗死(lacunarinfarction ,LI)模型。方法 10 0 μg月桂酸钠于实验第 1、3天注入SD大鼠右侧颈内动脉内 ,采用组织病理学和 3种行为学试验对脑缺血性损害的结果进行评价。结果 在第 1次注入月桂酸钠后 5h ,光镜下大鼠脑片磷钨酸苏木精染色显示 ,纤维蛋白丝阻塞注药侧穿支动脉。电镜下显示毛细血管内皮损伤、星形细胞肿胀及神经元固缩 ,注药侧大脑中动脉内皮未受损。第 2次注入月桂酸钠后 72h大多数鼠表现有行为学异常 ,与假手术组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 1) ;勒克司坚牢蓝 HE染色显示 ,大脑皮质、海马、丘脑有多发小梗死灶。

日本PBL医学教育一览

PBL(Problem-Based Learning)是以问题为基础的学习,正在引入医学教育中,PBL强调整合方法分析临床问题。文章通过介绍日本PBL医学教育,诸如课题设置、实施过程、教学效果评价,希望为我国医学教育改革提供一些可以借鉴的参考信息。

线粒体脑肌病的血管神经病变机制

目的探讨血管病变和组织缺血在线粒体脑肌病发病机制中的作用。 方法采用CT灌注成像技术对发病期线粒体脑肌病的脑组织灌注状况进行评估，通过病理学方法观察肌肉组织血管的线粒体结构改变。 结果7例不同类型的线粒体脑肌病患者发病期主要临床表现为卒中样发作和疴陛发作，病变多累及单侧或双侧的顶颞枕叶。病变区域脑血流量和脑血容量降低，对比剂平均通过时间和达峰时间延长。病理学发现：琥珀酸脱氢酶（Succinate Dehydrogenase，SDH）染色血管壁呈不连续或浓重深染色，血管壁平滑肌细胞和内皮细胞线粒体数量显著增多，增大肿胀呈空泡状。 结论线粒体脑肌病是一种系统性血管病，脑组织灌注不足和代谢障碍在发病机制中具有重要的作用。

中药制剂对滴虫性阴道炎治疗的观察

目的采用生态学方法治疗滴虫性阴道炎,保护阴道的微生态平衡,使治疗收到事半功倍的效果。方法门诊滴虫性阴道炎患者共114例,随机分为2组,单数为观察组,双数为对照组,各57例。观察组以灭滴灵注射液、蔗糖和中药制成的栓剂阴道上药,每日2次,配偶以灭滴灵注射液和中药配制的洗液外用冲洗。对照组仍用传统的灭滴灵片200mg/次,日服3次,夫妇同用;局部以1/5000的高猛酸钾冲洗外阴后上入灭滴灵片1片,1次/d。结果观察组疗效显著高于对照组(P<0.01)。结论采用中药制剂治疗滴虫性阴道炎,能保护阴道的微生态平衡,取得较好的临床效果。

基于下游实验的样本质量分析

目的依据ISO 20387生物样本库通用要求,通过下游实验对现有的白细胞提取质量进行验证,探索适用于生物样本库认可的样本前处理方法。方法对2021年1月至2022年6月使用白细胞进行靶向捕获测序的样本进行DNA提取,通过OD260/280、OD260/230、测量浓度,计算得率对DNA质量进行评价。结果5850例白细胞提取DNA,纯度足够高的样本占比为86.24%,得率大于10μg满足实验需求的样本占比为92.51%。结论将红细胞裂解步骤提前,在新鲜样本时进行,使用纯度较高的白细胞进行DNA提取,通过验证,上述提取方法可行,高纯度样本有效减少了红细胞的干扰,为样本库探索未知研究提供更为可靠的生物样本。