Vimentin联合CK、EpCAM用于中晚期乳腺癌患者循环肿瘤细胞的检测

目的：探讨间质标志物波形蛋白（Vimentin）联合上皮标志物CK、EpCAM用于乳腺癌循环肿瘤细胞（CTC）鉴定的效果。方法：收集93例中晚期乳腺癌（Ⅲ~Ⅳ期）患者全血,免疫磁珠阴性选择法富集CTC,对比Vimentin联合CK＋EpCAM（联合检测组）和仅CK＋EpCAM（单纯检测组）染色鉴定CTC的阳性率、平均阳性细胞数量,并招募健康志愿者30例作为阴性对照,对比该方法的特异性。结果：两种方法均未在健康志愿者血中检测到阳性细胞;联合检测组和单纯检测组总检出CTC阳性率分别为69.9%和76.3%,平均检出CTC细胞数分别为（4.89±4.58）个/7.5mL血液和（8.76±8.32）个/7.5mL血液,联合检测组检出率及CTC检出细胞数均高于单纯检测组;Ⅲ期患者两种检测法的检出率及CTC个数差异均具有统计学意义（均P〈0.05）,Ⅳ期患者两种检测方法检出的CTC阳性率无差异（P〉0.05）,但联合检测组CTC计数显著高于单纯检测组（P〈0.05）。依据年龄、肿瘤大小等,联合检测组均较单纯检测组有一定的提高,特别是年龄〉35岁、肿瘤大小〈5cm的患者差异显著（P〈0.01）,Luminal A型和Her-2阳性型患者可以通过联合检测法提高CTC检出水平,而Luminal B型和三阴型则未体现出显著的差异。结论：Vimentin联合CK、EpCAM进行CTC检测可提高检出率,同时CTC数量与肿瘤的分期及转移状态有关。

肿瘤相关性贫血患者血清促红细胞生成素水平与重组人促红细胞生成素治疗效果的关系

目的探讨肿瘤相关性贫血(CRA)患者血清内源性促红细胞生成素(EPO)水平与人重组EPO(rh EPO)治疗效果的关系。方法血红蛋白(Hb)水平<100 g/L的97例CRA患者进行血清EPO检测,与同期Hb正常肿瘤患者血清EPO水平进行对比,对CRA患者予规范化rh EPO治疗。结果 CRA患者平均EPO水平较同期Hb正常肿瘤患者高,内源性EPO水平>504 m IU/ml患者rh EPO治疗效果不佳。CRA患者治疗前铁蛋白、血清铁、总铁结合力和转铁蛋白饱和度水平均低于同期Hb正常肿瘤患者,但不同疗效患者的以上指标的差异无统计学意义(P<0.05)。结论血清EPO水平检测可有效指导CRA患者抗贫血治疗药物选择。

MEK1表达载体的构建及其对肝癌细胞ERK通路活性的影响

目的构建pcDNA3.1(+)-MEK1真核表达载体,体外转染人肝癌MHCC97H细胞,观察MEK1在肝癌细胞中的表达及其对ERK通路活性的影响。方法应用RT-PCR扩增出MEK1基因插入pcDNA3.1(+)中,形成重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1。经测序确认后,利用LipofectamineTM 2000将重组载体转染MHCC97H肝癌细胞,使用含G418的培养基进行筛选;将肝癌细胞分为不转染组、转染空载体组和转染重组载体组,运用Western-blot方法检测MEK1、p-MEK1、ERK1/2、p-ERK1/2在各组细胞中的表达并绘制各组细胞的生长曲线对比其增殖能力。结果重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1酶切鉴定电泳条带大小正确,测序结果经Blast比对与人MEK1基因开放性读码框100%吻合;重组载体载体转染肝癌细胞后MEK1表达水平较不转染及转染空载体载体组细胞显著升高,且磷酸化的MEK1及ERK1/2水平也明显升高,转染重组载体载体的肝癌细胞增殖能力得到显著增强。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-MEK1,过表达MEK1蛋白可提高肝癌细胞MAPK/ERK通路活性。

中药野菊花的药理作用研究进展

野菊花是常用的中草药，具有清热解毒、疏风平肝等功效。现代药理学研究表明其具有抗微生物、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、保肝、神经保护、保护心血管、抗血小板聚集等多种作用，且具有高效、低毒的特点，有较好的临床应用价值和研发潜力。本文综述了野菊花的化学成分，国内外对野菊花提取物、主要化学成分总黄酮和挥发油的药理作用，野菊花毒理等方面的进展情况，为野菊花的开发提供理论依据。

加味痛泻要方联合XELOX方案治疗结直肠癌28例临床分析

目的:观察加味痛泻要方联合XELOX方案治疗结直肠癌的临床效果。方法:将接受XELOX方案化疗的56例结直肠癌患者,随机分为治疗组和对照组,每组28例。对照组接受XELOX方案化疗,治疗组在接受XELOX方案化疗的同时服用加味痛泻要方汤剂治疗。采用NCI4.0版常见不良事件评价标准对不良反应进行评定,使用Karnofsky功能状态评分(KPS)评价肿瘤患者生存质量,比较两组不良反应发生情况及生存质量。结果:与对照组相比,治疗组发生腹泻的患者例数明显下降,Ⅱ～Ⅲ级恶心、呕吐、厌食的发生率也明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组患者化疗后的KPS评分较对照组明显改善(P<0.05)。结论:加味痛泻要方能有效减轻卡培他滨引起的腹泻,减轻化疗患者的恶心、呕吐,改善食欲,提高患者生存质量。

RAS、CD68和CD34在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨RAS、CD68和CD34在乳腺癌中的表达情况及其临床意义。方法收集2010年1月至2012年9月泗洪县人民医院普外科手术切除的乳腺癌患者肿瘤组织蜡块65例,采用免疫组化染色法检测乳腺癌组织标本中活化的RAS、CD68和CD34的表达水平。分析RAS表达水平与TNM分期、淋巴结转移、HER-2、ER、PR、肿块大小等临床病理特征的关系及其与CD68、CD34表达的相关性。结果 65例乳腺癌标本中,43例RAS阳性,63例CD68阳性,中位CD68阳性细胞数为12个,中位微血管密度(MVD)为49个。RAS表达与肿瘤直径、HER-2呈显著正相关(r=0.342,P=0.005;r=0.334,P=0.006)。CD68阳性细胞水平与肿瘤直径、TNM分期、HER-2呈显著正相关(r=0.303,P=0.014;r=0.358,P=0.003;r=0.325,P=0.008)。RAS水平与CD68阳性细胞水平呈显著正相关(r=0.277,P=0.026)。MVD水平与CD68阳性细胞水平呈显著正相关(r=0.330,P=0.007)。结论乳腺癌中RAS、CD68阳性细胞水平与HER-2、肿瘤直径、TNM分期明显相关。RAS可能影响了肿瘤相关巨噬细胞促进MVD生成的过程,其机制仍需进一步研究。

Lasp-1蛋白在肝癌组织中表达及临床意义

目的探讨Lasp-1蛋白在肝癌(HCC)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化染色法检测42例肝癌癌组织、28例癌旁组织以及15例正常肝组织标本中Lasp-1蛋白表达情况,并探讨其与肝癌临床病理特征的关系。结果Lasp-1蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为54.76%,明显高于癌旁(32.14%,P<0.01)及正常肝组织(6.67%,P<0.01),Lasp1表达阳性率在正常肝组织、癌旁、和肝癌中呈递增趋势;Lasp-1在伴发转移的肝癌病例标本中未发生转移者表达阳性率更高(P=0.006);肝癌组织中Lasp-1的阳性率与患者TNM分期呈正相关(P=0.013)。结论 Lasp-1可能在促进HCC的发生和发展过程中发挥了重要的作用,有望成为早期诊断HCC发生以及评估预后的指标。

缺氧通过下调miR-132表达促进前列腺癌细胞的体外生长和侵袭

目的：探讨miR-132在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞生长和侵袭的调节作用,以及缺氧条件下前列腺癌细胞中miR-132水平的变化及其生物学行为的改变。方法：荧光定量PCR分析前列腺癌组织中miR-132的表达水平,分析其与临床分期和Gleason评分的关系,及体外缺氧对人前列腺癌细胞株PC3中miR-132表达的影响;磺酰罗丹明B（SRB）比色法和Matrigel侵袭实验分别检测缺氧和miR-132 mimic质粒转染对PC3细胞活力和侵袭的体外影响。结果：相对于对照组癌旁组织,前列腺癌组织中miR-132水平降低至对照组的52.38%（T1-T2期）（P〈0.01）和21.59%（T3-T4期）（P〈0.01）。缺氧培养下,PC3细胞的miR-132水平明显降低（P〈0.01）。miR-132 mimic质粒转染48 h和72 h后,PC3细胞活力显著降低（P〈0.05或P〈0.01）;转染后48 h,PC3细胞侵袭力降低了57.5%（P〈0.01）。然而,miR-132 mimic质粒转染PC3细胞后,常氧和缺氧培养两种方式间的细胞活力和侵袭力均无明显差异（P〉0.05）。结论：miR-132的表达降低与前列腺癌的临床分期和Gleason评分密切相关;缺氧通过下调miR-132表达,可在体外促进前列腺癌细胞的活力和侵袭,可能进一步促进前列腺癌的生长和转移。

LC术前MRCP检查在预防术中胆道损伤的临床研究

目的探讨复杂胆囊腹腔镜胆囊切除(LC)术前行磁共振胆胰管成像(MRCP)检查的必要性及预防术中胆道损伤的临床意义。方法总结分析1380例复杂胆囊行LC术的临床资料,分为MRCP组和非MRCP组各690例。结果术前行MRCP检查较非MRCP检查LC术中胆道损伤发生率、中转开腹和平均住院天数明显减少(P<0.05)。结论对于复杂胆囊患者行LC术前行MRCP检查是必要的,可有效预防术中胆道损伤的发生。

Lasp-1蛋白与肝癌患者预后相关性研究

目的探讨Lasp-1蛋白在HCC中的表达及其与肝癌患者预后的关系。方法采用免疫组化法检测48例HCC中Lasp-1蛋白的表达,采用Kaplan-Meier单因素分析法分析各临床病理因素与肝癌患者生存时间的关系,应用Cox比例风险回归模型对生存期的影响因素进行回归分析。结果 48例HCC组织中Lasp-1蛋白阳性率为60.42%;采用Kaplan-Meier单因素分析、Cox回归分析表明:临床分期、肿瘤浸润转移和Lasp-1蛋白表达是影响肝癌预后的独立危险因素。结论 Lasp-1蛋白表达可能是影响HCC预后的独立危险因素之一。

以节约土地资源为目标的村镇规划建设的探讨

在城镇规划中,对土地进行节约利用,是在详尽地掌握了土地资源的情况以后,要进行适当的规划研究,使每一块土地都得到最大程度的发挥,从而使其得到最大程度地发挥,从而达到最大限度地发挥其作用。土地资源的节约就是指通过对不合理用地的剖析,进而提出改善的目的和目的。在新农村建设的逐步深化下,在新农村建设中,要占用较多的耕地,例如:养殖业、种植业等,这些都会占用较大的耕地。所以,要想进一步提升我国的经济发展,就必须强化国土资源的保护和保护。在利用土地时,要结合地方的经济发展情况,制订出相应的计划目标,利用一些经济和技术的方法,对该地区的土地资源进行分析,例如:对其使用结构、方向等方面进行调控,使其能够更好地利用。在城镇和村庄的规划中,既要考虑到土地的实际,又要考虑到地区的经济发展水平以及城市的经济发展水平。

p-ERK1/2、CD34、层粘连蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨p-ERK1/2、CD34、层粘连蛋白(LN)在乳腺癌中的表达及其意义。方法收集乳腺癌患者肿瘤组织蜡块76例,行免疫组化染色,检测乳腺癌患者癌组织标本中p-ERK1/2的表达水平,分析p-ERK1/2水平与其临床病理因素及CD34、LN的相关性。结果 p-ERK1/2、CD34、LN在乳腺癌组织中的表达水平与肿瘤TNM分期显著相关。CD34在乳腺癌组织中广泛表达,与p-ERK1/2水平正相关。LN在乳腺癌组织中表达与TNM分期及p-ERK1/2水平均呈负相关。结论 ERK通路异常活化与乳腺癌生长和浸润有关,可能参与了乳腺癌的发展过程,ERK通路可能通过促进血管生成及降解基底膜发挥促进乳腺癌进展的作用。

二代测序法检测结肠癌基因突变与临床病理特征的关系

目的:探讨结肠癌基因突变与临床病理特征的关系。方法:回顾性分析2012年1月至2016年12月80例结肠癌患者的临床资料及肿瘤组织和血液循环肿瘤DNA(ctDNA)的二代测序结果。比较结肠癌基因突变与发病部位、临床分期及复发转移等临床病理特征的关系。结果:右半结肠(RCC)TOP1、MLH1、PTEN基因突变率高于左半结肠(LCC)(P<0.05)。与Ⅰ~Ⅱ期相比,Ⅲ~Ⅳ期患者KRAS的突变率更高(P<0.05)。ERCC2突变、MLH1突变的患者更易发生脉管癌栓(P<0.05),而XRCC1基因突变会使脉管癌栓及神经侵犯的发生率降低(P<0.05)。ERCC1、TP53和VEGFR基因突变率在有无肝转移患者间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。TOP1、PTEN、KRAS、GSTT1、TYMS基因突变在T3与T4分期、有无淋巴结转移、有无肺转移及有无腹腔淋巴结转移的患者间比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:RCC和LCC的TOP1、MLH1、PTEN基因突变率存在差异;ERCC2、MLH1基因突变与神经侵犯及脉管癌栓等高危因素有关;ERCC1、TP53和VEGFR基因突变的结肠癌患者更易发生肝转移。

肿瘤异常糖链糖蛋白在卵巢癌中的诊断效能评估

目的:评估肿瘤异常糖链糖蛋白(TAP)在卵巢癌中的诊断效能。方法:收集2017年1月至2017年12月在苏州大学附属第一医院就诊的女性卵巢癌患者94例及同期体检的健康女性96例;检测全血中TAP、血清中人附睾蛋白4(HE4)、糖链抗原125(CA125)、糖链抗原199(CA199)和癌胚抗原(CEA)水平。分析TAP、HE4、CA125、CA199和CEA与临床病理特征的关系;利用Logistic回归及受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析比较TAP与HE4、CA125、CA199和CEA的诊断效能。结果:卵巢癌组血清中的TAP、HE4、CA125和CEA水平明显高于健康对照组(P<0.001);晚期(Ⅲ~Ⅳ期)卵巢癌患者的TAP、HE4和CA125水平明显高于早期卵巢癌患者(Ⅰ~Ⅱ期)(P<0.05);卵巢癌患HE4的水平在不同病理类型卵巢癌患者中比较,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析表明TAP在卵巢癌患者中的诊断效能明显高于其它肿瘤指标(AUC=0.991,95%CI:0.964~0.999,P=0.001)。结论:全血中TAP水平的增高可能与卵巢癌相关,TAP联合HE4可以作为卵巢癌筛查的潜在标志物。

MGMT基因沉默增强黑色素瘤细胞对替莫唑胺敏感性的研究

目的探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因沉默对人黑色素瘤细胞替莫唑胺(TMZ)敏感性的影响。方法将前期构建的靶向MGMT基因特异性短发夹型RNA(shRNA)干扰载体转染人黑色素瘤A375细胞。根据转染质粒的不同及是否加药分组如下:对照组、TMZ组、阴性对照(NC)组、NC-TMZ组、MGMT干扰(MGMTi)组和MGMTi-TMZ(MGMT干扰联合TMZ)组。通过实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blotting和免疫荧光验证质粒载体的干扰效率,MTT法和流式细胞术检测TMZ处理24、48和72 h后A375细胞的增殖和凋亡情况。Western blotting和免疫荧光检测ATR、ATM和γ-H2AX水平以评价细胞DNA的损伤程度。结果转染MGMT shRNA干扰载体后,MGMTi组MGMT在mRNA和蛋白水平与对照组相比降低(P<0.05)。MTT、流式细胞仪、Western blotting和免疫荧光检测结果显示,MGMTi-TMZ组的细胞抑制率、凋亡率及ATR、ATM和γ-H2AX水平较其他组明显升高(P<0.05)。结论沉默MGMT基因的表达能够增强TMZ对A375细胞增殖的抑制作用并促进细胞凋亡,同时增强DNA损伤作用。通过沉默MGMT基因可以提高人黑色素瘤A375细胞对TMZ的敏感性。

基于生物信息学数据库的肺腺癌组织中HMGB1表达及相关下游通路分析

目的:通过生物信息技术探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)促进肺癌进展的潜在关键通路和环节。方法:UALCAN数据库分析HMGB1表达相关的基因和相关基因的生存分析。STRING数据库分析蛋白质-蛋白质相互作用。AnimalTFDB3.0和JASPAR数据库预测转录因子以及结合位点。KEGG数据库分析相关信号通路。结果:生物信息分析结果显示细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)、H2A组蛋白家族成员Z(H2AFZ)与HMGB1的表达在肺腺癌(LUAD)中呈正相关关系,且CDK1和H2AFZ与LUAD的不良预后有关。预测到SOX2和SP1是CDK1或H2AFZ的转录因子。信号通路分析结果显示Akt和ERK可以调控SOX2的表达。结论:CDK1、H2AFZ可能是HMGB1参与LUAD进展的重要节点,HMGB1-Akt/ERK-SOX2-CDK1/H2AFZ可能是HMGB1促进LUAD进展的关键通路。

肝部肿瘤微波消融对患者外周血T细胞亚群的影响

目的探讨肝部肿瘤微波消融(MWA)对患者外周血T细胞亚群的影响。方法于消融前、消融后24 h、消融后15 d、消融后30 d采集患者外周血。应用流式细胞术分析外周血CD3^+,CD3^+/CD4^+,CD3^+/CD8^+细胞比例并计算对比CD4^+/CD8^+比值。采用配对样本t检验对数据进行分析。结果共纳入肝恶性肿瘤行MWA治疗患者43例,在微波消融后15 d,CD3^+,CD3^+/CD4^+和CD3^+/CD8^+细胞比率显著增高。在微波消融后30 d,仅CD3^+细胞显著增加,其在消融后24 h未发现显著差异。结论肝部肿瘤MWA可能在短期内影响患者的免疫功能状态。

不同化疗药物对乳腺癌细胞MGMT表达水平的影响及其药物敏感性分析

目的探讨不同化疗药物对O 6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O 6-methyl-guanine DNA methyltransferase,MGMT)表达水平的影响及其药物敏感性。方法采用Western Blotting检测环磷酰胺作用后MCF-7和MDA-MB-231细胞中MGMT蛋白水平变化;采用免疫荧光检测MGMT表达水平及其在乳腺癌细胞中内的定位情况;构建含MGMT启动子片段的荧光素酶报告载体转染入乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231,应用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测经不同化疗药物(环磷酰胺、紫杉醇、吉西他滨)作用24 h后MGMT的转录活性;通过RT-qPCR检测化疗药物作用后MCF-7和MDA-MB-231细胞内MGMT mRNA水平变化;采用CCK8实验检测MCF-7和MDA-MB-231细胞对上述化疗药物的敏感性。结果环磷酰胺作用后两种细胞的MGMT蛋白水平均下降;荧光素酶报告的实验结果显示与对照组相比,经环磷酰胺处理后检测到MDA-MB-231细胞的发光强度增强,MCF-7细胞的发光强度减弱,具有统计学差异;RT-qPCR结果显示环磷酰胺作用后,MDA-MB-231细胞的MGMT mRNA水平升高,而MCF-7细胞的MGMT mRNA水平下降;CCK8实验结果显示在化疗药物作用下,MDA-MB-231细胞比MCF-7细胞的IC 50值高。结论在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中环磷酰胺造成肿瘤细胞耐药与促进MGMT的转录上调密切相关。

肝癌细胞中MGMT表达与奥沙利铂抑肝癌作用的相关性研究

目的 探讨肝癌细胞MGMT表达水平与奥沙利铂敏感性的相关性.方法 采用体外培养SMMC-7721、HuH-7和BEL-7402肝癌细胞株.用RT-PCR法检测MGMT的mRNA表达,Western-blot检测MGMT蛋白水平,MTT法检测奥沙利铂对肝癌细胞的抑制作用,并通过甲基化特异性PCR,检测所有细胞的MGMT甲基化的状态.结果 各肝癌细胞系均可检测到MGMT基因和蛋白的表达,其中HuH-7 MGMT的mRNA以及蛋白水平最高;而BEL-7402细胞MGMT的mRNA以及蛋白水平最低,对比MTT IC50显示奥沙利铂对HuH-7的敏感性最低,对BEL-7402敏感性最高.结论 MGMT基因状态可能影响肝癌细胞对奥沙利铂化疗的敏感性.

胃癌细胞中TFAP2E基因甲基化水平对5-氟尿嘧啶敏感性的影响

目的 探讨转录因子激活蛋白2E（transcription factor activator protein 2E,TFAP2E）在胃癌细胞株的甲基化水平及其对5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）敏感性的影响.方法 采用不同浓度5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR）去甲基化处理2种胃癌细胞株BGC823、SGC7901,运用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线（methylation-sensitive high-resolution melting,MS-HRM）技术检测TFAP2E基因甲基化状态;Western blot检测TFAP2E蛋白表达情况.采用不同浓度的5-Fu作用于去甲基化处理的细胞株,用CCK8法检测细胞存活率.结果 （1）2种胃癌细胞株经5-Aza-CdR去甲基化处理后,TFAP2E甲基化水平下降,TFAP2E蛋白表达水平显著提高（P〈0.05）,呈浓度依赖性;（2）经5-Aza-CdR去甲基化处理后,2种胃癌细胞株对5-Fu的敏感性明显增强（P〈0.01）,呈剂量依赖性.结论 TFAP2E甲基化水平越高,胃癌细胞对5-Fu的敏感性越低.