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应用于原代T细胞酪氨酸磷酸化蛋白质组的高灵敏度分析方法
1
作者
梁富超
柯弥
田瑞军
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期693-701,共9页
酪氨酸磷酸化在T细胞的信号转导过程中发挥着重要的作用,然而其丰度较低,鉴定困难。生物组织样本中分离获得的原代T细胞数量较少,培养和扩增的难度较大,因而常使用永生化细胞系来研究T细胞的酪氨酸磷酸化介导的信号转导过程,这通常会导...
酪氨酸磷酸化在T细胞的信号转导过程中发挥着重要的作用,然而其丰度较低,鉴定困难。生物组织样本中分离获得的原代T细胞数量较少,培养和扩增的难度较大,因而常使用永生化细胞系来研究T细胞的酪氨酸磷酸化介导的信号转导过程,这通常会导致获得与原代T细胞相差较大的结论。因此,本研究发展了一种解析原代T细胞酪氨酸磷酸化修饰信号的高灵敏度的蛋白质组学方法。首先,针对原代T细胞数量有限的问题,本研究优化了一套从小鼠脾脏中分离、活化和扩增T细胞的完整流程,第4天时T细胞数量扩增到7倍以上;其次,针对酪氨酸磷酸化修饰丰度较低、不易被质谱检测的难题,本研究利用SH2超亲体(SH2-superbinder)亲和富集和固定化钛离子亲和色谱(Ti^(4+)-IMAC)技术对抗CD3和抗CD28单克隆抗体共刺激条件下的原代T细胞多肽样品进行了酪氨酸磷酸化多肽富集,并结合纳升液相色谱-串联质谱(nanoLC-MS/MS)进行解析。最终成功从1 mg蛋白质中鉴定到282个酪氨酸磷酸化位点,其中包含T细胞受体膜蛋白CD3胞内区的免疫受体酪氨酸激活序列(ITAM)上的多个酪氨酸磷酸化位点,以及信号转导相关蛋白ZAP70、LAT、VAV1等的重要位点信息。综上,本研究发展了一套深度解析原代T细胞中的酪氨酸磷酸化修饰的高灵敏度蛋白质组学分析流程,有望应用于绘制更接近生理状态下的信号转导网络。
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关键词
纳升液相色谱-串联质谱
酪氨酸磷酸化
原代T细胞
共刺激
信号转导
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职称材料
数字经济背景下茂名市荔枝营销模式创新研究
2
作者
李良
梁富超
覃先林
《农村经济与科技》
2024年第6期247-249,191,共4页
以茂名市荔枝为研究对象,基于经典的4P营销理论,采用案例研究方法探索数字技术赋能农产品价值链重构的内在逻辑。研究发现,数字技术可通过产品质量赋能、价格优势赋能和网络渠道赋能以及促销赋能4种范式推动农产品数字营销的发展与创新...
以茂名市荔枝为研究对象,基于经典的4P营销理论,采用案例研究方法探索数字技术赋能农产品价值链重构的内在逻辑。研究发现,数字技术可通过产品质量赋能、价格优势赋能和网络渠道赋能以及促销赋能4种范式推动农产品数字营销的发展与创新。数字化农产品营销价值链重构的目标在于为消费者提供便捷的购物体验,借助技术增值的营销模式满足消费者对产品内涵与销售方式的需求,从而实现精准营销的实践与创新,最终完成农产品数字化营销优化。
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关键词
荔枝
营销模式
数字经济
创新
数字营销
茂名市
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职称材料
题名
应用于原代T细胞酪氨酸磷酸化蛋白质组的高灵敏度分析方法
1
作者
梁富超
柯弥
田瑞军
机构
南方科技大学理学院化学系
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期693-701,共9页
基金
国家重点研发计划(2021YFA1301601,2021YFA1301602,2021YFA1302603)
国家自然科学基金(92253304,22125403)
深圳市科技创新委员会(JSGGZD20220822095200001,JCYJ20210324120210029).
文摘
酪氨酸磷酸化在T细胞的信号转导过程中发挥着重要的作用,然而其丰度较低,鉴定困难。生物组织样本中分离获得的原代T细胞数量较少,培养和扩增的难度较大,因而常使用永生化细胞系来研究T细胞的酪氨酸磷酸化介导的信号转导过程,这通常会导致获得与原代T细胞相差较大的结论。因此,本研究发展了一种解析原代T细胞酪氨酸磷酸化修饰信号的高灵敏度的蛋白质组学方法。首先,针对原代T细胞数量有限的问题,本研究优化了一套从小鼠脾脏中分离、活化和扩增T细胞的完整流程,第4天时T细胞数量扩增到7倍以上;其次,针对酪氨酸磷酸化修饰丰度较低、不易被质谱检测的难题,本研究利用SH2超亲体(SH2-superbinder)亲和富集和固定化钛离子亲和色谱(Ti^(4+)-IMAC)技术对抗CD3和抗CD28单克隆抗体共刺激条件下的原代T细胞多肽样品进行了酪氨酸磷酸化多肽富集,并结合纳升液相色谱-串联质谱(nanoLC-MS/MS)进行解析。最终成功从1 mg蛋白质中鉴定到282个酪氨酸磷酸化位点,其中包含T细胞受体膜蛋白CD3胞内区的免疫受体酪氨酸激活序列(ITAM)上的多个酪氨酸磷酸化位点,以及信号转导相关蛋白ZAP70、LAT、VAV1等的重要位点信息。综上,本研究发展了一套深度解析原代T细胞中的酪氨酸磷酸化修饰的高灵敏度蛋白质组学分析流程,有望应用于绘制更接近生理状态下的信号转导网络。
关键词
纳升液相色谱-串联质谱
酪氨酸磷酸化
原代T细胞
共刺激
信号转导
Keywords
nanoscale liquid chromatography-tandem mass spectrometry(nanoLC-MS/MS)
tyrosine phosphorylation
primary T cell
co-stimulation
signal transduction
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
数字经济背景下茂名市荔枝营销模式创新研究
2
作者
李良
梁富超
覃先林
机构
广西民族大学管理学院
出处
《农村经济与科技》
2024年第6期247-249,191,共4页
基金
2023年广西民族大学自治区级大学生创新创业项目(S202310608061X)
2023年国家级大学生创新创业项目(202310608024)
广西教育科学“十四五”规划2023年度高校创新创业教育专项重点课题“广西应用型高校创新创业教育服务地方区域经济发展的创新路径研究”(2023ZJY1400)。
文摘
以茂名市荔枝为研究对象,基于经典的4P营销理论,采用案例研究方法探索数字技术赋能农产品价值链重构的内在逻辑。研究发现,数字技术可通过产品质量赋能、价格优势赋能和网络渠道赋能以及促销赋能4种范式推动农产品数字营销的发展与创新。数字化农产品营销价值链重构的目标在于为消费者提供便捷的购物体验,借助技术增值的营销模式满足消费者对产品内涵与销售方式的需求,从而实现精准营销的实践与创新,最终完成农产品数字化营销优化。
关键词
荔枝
营销模式
数字经济
创新
数字营销
茂名市
分类号
F323.7 [经济管理—产业经济]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用于原代T细胞酪氨酸磷酸化蛋白质组的高灵敏度分析方法
梁富超
柯弥
田瑞军
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
下载PDF
职称材料
2
数字经济背景下茂名市荔枝营销模式创新研究
李良
梁富超
覃先林
《农村经济与科技》
2024
0
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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