多枝赖草及其转育后代对大麦黄矮病毒PAV和GAV株系的抗性研究

本文针对大麦黄矮病毒 (BYDV) PAV和 GAV株系 ,采用生物学和血清学 (ELISA)相结合的鉴定方法 ,对多枝赖草以及它与普通小麦杂交获得的二体附加系 Line2 4等材料进行抗性测定。首次证明了多枝赖草对我国 BYDV- PAV和 GAV株系免疫或高抗 ,而普通小麦 -多枝赖草二体附加系L ine2 4以及 2个易位系高耐这

不同播种期对玉米粗缩病发生的影响

本文通过对不同时期播种的玉米田、传毒介体灰飞虱虫量和玉米粗缩病病情的调查明确，玉米苗１０叶前感病期和传毒灰飞虱发生高峰期不相遇，玉米粗缩病就可减轻发生。调整玉米播种期等农业措施，可以减少玉米粗缩病毒的危害。

哈尔滨地区大麦黄矮病毒株系鉴定

从黑龙江省哈尔滨地区田间采集典型小麦黄矮病株25份,用无毒麦二叉蚜(Shizaphis graminum)、麦长管蚜(Macrosiphum avenae)、禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum-padi)传毒,经生物学分离并用BYDV—GAV、PAV、RPV、SGY四种抗血清进行酶联免疫吸附(即ELISA法)测定。结果表明:25份标样中由麦长管蚜(Ma)和麦二叉蚜(Sg)传播的有22份,与GAV抗血清有强反应,而与PAV、RPV、SGV抗血清无反应。表明GAV株系是哈尔滨地区大麦黄矮病毒的主要株系。

晋南冬麦区大麦黄矮病毒流行株系监测及防治策略探讨

连续5年(1996～2000年)采集晋南冬麦区小麦黄矮病标样,采用生物学和血清学(酶联免疫吸附法)相结合的诊断方法对该地区的大麦黄矮病毒流行株系进行了鉴别。结果表明,该小麦黄矮病流行区近五年以GAV株系为主流株系,兼有少量GPV、PAV和混合株系存在。同时对小麦抗黄矮病新品种“临抗1号”进行了GPV和GAV两种株系的抗性测定,明确了该品种兼抗GPV和GAV两种株系。根据小麦黄矮病发生现状,提出了一套以选育推广抗耐病品种为主,以药剂防治为辅的综合防治措施。以期为当地小麦生产服务。

苏云金芽胞杆菌高效表达载体的构建

【目的】通过比较cry1A、cry3A、cry4A和cry8E四个基因的启动子转录活性,筛选出一个强启动子,利用强启动子构建一个苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)高效表达载体。【方法】利用启动子融合lacZ技术检测了4种启动子的转录活性。通过扫描电子显微镜观察晶体、SDS-PAGE、蛋白定量和生物活性测定等方法对新建高效表达载体进行功能验证。【结果】构建了Pcry1A、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E 4个启动子融合报告基因lacZ的表达载体,经β-半乳糖苷酶活性分析得知,启动子活性从高到低依次为Pcry8E>Pcry1A>Pcry4A>Pcry3A。选取cry8E启动子,以pHT315作为基础载体构建苏云金芽胞杆菌高效表达载体pHT315-8E21b,将cry1Ac基因连接到pHT315-8E21b和广泛应用的cry3A启动子指导的pSXY-422b上,分别转入无晶体突变株HD-73?,获得菌株HD-8E1Ac和HD-422-1Ac。扫描电子显微镜观察显示,HD-8E1Ac菌株可以形成菱形晶体,说明正确表达了cry1Ac基因。SDS-PAGE分析结合蛋白定量实验表明pHT315-8E21b表达效率高于pSXY-422b。对小菜蛾(Plutella xylostella)的生物活性测定表明HD-8E1Ac菌株对小菜蛾有生物活性,且菌株活性高于HD-422-1Ac。【结论】利用强启动子Pcry8E构建了一个能在Bt中高效表达的穿梭载体pHT315-8E21b,该载体可正确表达cry1Ac基因,其表达效率高于被广泛应用的pSXY422b。

四种cry基因启动子在spoIIID基因突变株中的活性比较

【目的】分析spoIIID基因突变对苏云金芽胞杆菌cry1、cry3、cry4和cry8基因启动子Pcry1Ac、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E的影响,比较以上启动子在无芽胞spoIIID基因突变体(HD-△SpoIIID)中的转录活性。【方法】分别构建了Pcry1Ac、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E与lacZ基因融合的转录分析载体,并导入HD-73野生型菌株和HD-△SpoIIID突变株中测定β-半乳糖苷酶活性;通过高温诱变方法在HD-△SpoIIID基础上筛选出缺失cry1Ac基因的HD--△SpoIIID突变体;构建了4种启动子与cry1Ac基因融合表达载体,分别将它们转入HD-ΔSpoIIID和HD--ΔSpoIIID中,分析Cry1Ac蛋白表达量及其生物活性。【结果】HD-73和HD-ΔSpoIIID菌株中四个启动子转录活性由高到低分别为:Pcry8E>Pcry1Ac>Pcry4A>Pcry3A;spoIIID基因的缺失未影响Pcry1Ac和Pcry8E转录活性,Pcry3A在HD-ΔSpoIIID菌株中转录活性略有升高,Pcry4A在HD-ΔSpoIIID菌株中转录活性在T5到T10略有降低。从翻译水平来看在HD-ΔSpoIIID中cry8E启动子略低于cry1Ac启动子,并高于Pcry4Aa,Pcry3A指导的Cry1Ac蛋白产量,生物活性测定结果与蛋白表达量相符。【结论】cry8E基因启动子Pcry8E在spoIIID突变体中在转录水平活性是最高的启动子,而cry1Ac启动子指导自身基因cry1Ac表达时,在翻译水平上略高于cry8E启动子指导的Cry1Ac产量。