缺氧相关基因FHDC1在肝细胞癌中的表达与意义

目的:分析缺氧相关基因FHDC1(FH2 domain containing 1)在肝细胞癌中的表达与意义。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析FHDC1和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在肝细胞癌中的表达水平及FHDC1与主要临床病理特征相关性。ROC曲线评估FHDC1对肝细胞癌诊断的特异性。Kaplan-Meier方法和Cox回归分析FHDC1对肝细胞癌患者预后的影响。实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测缺氧诱导的HepG2和Hep3B肝癌细胞中FHDC1和HIF-1α的mRNA和蛋白的表达水平。实时定量PCR检测肝细胞癌组织标本中FHDC1 mRNA的表达,并分析其与临床特征的相关性。基于TCGA数据库通过R软件包分析肝细胞癌中FHDC1与肿瘤免疫微环境的关系。结果:TCGA数据库中FHDC1和HIF-1α在肝细胞癌组织中高表达(P均<0.05)。FHDC1在肝细胞癌临床Ⅲ与Ⅳ分期、T_(2)与T_(3)分期、组织学G_(3)与G_(4)分级、甲胎蛋白大于400 ng·mL^(-1)、有血管侵犯和总体生存率事件已经死亡的患者中明显高表达(P均<0.05)。ROC曲线下面积AUC为0.811。FHDC1高表达与肝细胞癌患者总生存率降低相关(P<0.01),且是患者生存的独立危险因素(HR=0.638,P<0.05)。在缺氧诱导的HepG2和Hep3B细胞中,FHDC1和HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P均<0.01)。FHDC1在30例临床肝细胞癌组织样本中高表达,并与AFP和临床Ⅰ、Ⅳ分期相关(P均<0.05)。FHDC1高表达的肝细胞癌患者中免疫评分和基质评分更高,与树突状细胞和嗜酸性粒细胞免疫浸润呈负相关(P均<0.05),而与巨噬细胞免疫浸润呈显著正相关(P<0.001)。FHDC1高表达组中大部分免疫检查点基因也高表达(P均<0.05)。结论:缺氧相关基因FHDC1在肝细胞癌中高表达,且与肝细胞癌不良预后和免疫微环境相关。

枸杞多糖对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞中NLRP3炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响

目的 观察枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响。方法 将体外培养的ARPE-19细胞,随机分为5组,即正常组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、LBP低浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+100μg·mL^(-1)LBP)、LBP中浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+200μg·mL^(-1)LBP)和LBP高浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+400μg·mL^(-1)LBP)。采用免疫荧光观察各组细胞中NLRP3蛋白的表达,Western blot检测炎症小体NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和其下游细胞焦亡蛋白消皮素D(GSDMD)的相对表达量,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(interleukm,IL)-1β和IL-18的表达水平。结果 免疫荧光结果显示,NLRP3蛋白主要在视网膜色素上皮细胞胞质中表达,且与正常组相比,高糖组NLRP3蛋白的表达水平升高(P<0.05);而与高糖组相比,LBP中、高浓度组NLRP3蛋白的表达水平降低(P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组相比,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD蛋白的相对表达量升高(P均<0.05);与高糖组相比,LBP中、高浓度组中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD蛋白的相对表达量降低(P均<0.05)。ELISA结果显示,与正常组相比,高糖组细胞中IL-1β和IL-18表达水平均升高(P均<0.05);与高糖组相比,LBP中、高浓度组中IL-1β、IL-18表达水平均降低(P均<0.05)。结论 LBP可通过抑制NLRP3炎症小体/细胞焦亡信号通路的激活,从而对高糖环境下的人视网膜色素上皮细胞产生保护作用。