对甘精胰岛素有关物质分析用系统适用性试验的研究

目的:对不同企业甘精胰岛素有关物质分析用系统适用性试验进行研究,发现存在的问题,提示企业完善质量标准,更科学有效地控制产品质量。方法:采用高效液相色谱法及液质联用方法对不同企业有关物质分析用系统适用性试验进行研究评价,发现存在多种问题。结果:部分企业系统适用性溶液中所用的“0A-甘精胰岛素”的结构经LC-MS/MS确认后,发现与理论序列不同,部分企业采用酶切方法制备系统适用性溶液,存在杂质较多、操作步骤复杂、溶液易浑浊等问题。结论:建议企业提高对系统适用性试验的重视程度,加强研究,完善质量标准,科学有效地进行药品质量控制。

首批异替勃龙国家对照品的标定研究

目的制备并标定首批异替勃龙国家对照品,以有效控制替勃龙及其制剂产品质量。方法应用红外光谱、质谱、核磁共振谱对异替勃龙进行结构确证,采用反相高效液相色谱(HPLC)法测定待标品纯度,采用质量平衡法对待标品进行赋值,并对待标品的均一性和稳定性进行考察。结果异替勃龙待标品经标定,以C_(21)H_(28)O_(2)计,含量为99.6%;均一性考察符合要求,25℃±2℃、RH 75%±5%条件,40℃±2℃、RH 75%±5%条件,光照4500 lx±500 lx条件下放置10 d,纯度略有下降。结论本批待标品确认为异替勃龙,可作为第一批异替勃龙国家对照品,以供异替勃龙HPLC法鉴别和含量测定用,以C_(21)H_(28)O_(2)计,本批待标品含量为99.6%。

去氨加压素片有关物质测定方法分析

目的:去氨加压素片有关物质检测中一未知干扰物质影响有关物质检出和定量,不利于产品的质量可控,本文对该干扰物进行结构确证与来源归属,并优化有关物质测定方法以消除该未知物质干扰,为标准修订提供数据支持和参考。方法:采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)对未知干扰物质进行结构确证,通过改变色谱柱、流动相梯度等条件优化有关物质测定方法,对优化后方法进行方法学验证,并采用稳定性考察样品及多批次上市产品评价新的检测方法。结果:确证未知干扰物质为聚维酮K30,来源于制剂辅料;优化后的有关物质测定方法能够消除该辅料干扰,专属性、耐用性、精密度良好;去氨加压素在0.02μg·mL^(-1)至332μg·mL^(-1)浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9997);检出限和定量限分别为1 ng和2 ng。结论:该方法适用于去氨加压素片有关物质的测定,能够将辅料聚维酮K30充分洗脱,消除对有关物质测定的干扰。

人胰岛素及其类似物中残留溶剂测定方法研究

目的建立人胰岛素及其类似物中有机溶剂残留测定方法,用同一方法测定目前在人胰岛素及类似物生产工艺中普遍存在的甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和正丙醇5种残留溶剂。方法采用顶空气相色谱法,使用DB-624毛细管柱(30 m×0.53 mm,3μm),载气为氮气,流速为2.5 ml/min,检测器为氢火焰离子化检测器,检测器温度为250℃,进样口温度为200℃,分流比为5:1,顶空平衡温度为85℃,平衡时间为20 min,柱温程序为:起始温度40℃,保持10 min,随后以5℃/min升至80℃,随后以20℃/min升至200℃。结果甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈及正丙醇峰之间分离良好;专属性、耐用性、精密度良好;甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和正丙醇分别在1.5~60.8、1.1~98.9、0.8~100.4、0.7~10.4、0.8~100.1μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r2均大于0.99);甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和正丙醇检出限分别为0.6、0.3、0.2、0.2、0.2μg/ml,定量限分别为1.5、1.1、0.8、0.7、0.8μg/ml;各溶剂在人胰岛素及其类似物中平均加标回收率(n=9)均在90%~110%范围内,准确度良好。结论该方法可操作性强、准确、灵敏度高,适用于人胰岛素及其类似物中甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和正丙醇5种残留溶剂测定。

气相色谱法测定庚酸炔诺酮中的游离庚酸

目的:研究并建立气相色谱(GC)法测定庚酸炔诺酮中游离庚酸的含量。方法:采用HP-FFAP(0.53 mm×30 m, 1.00μm)毛细管色谱柱(固定相为硝基对苯二甲酸改性的聚乙二醇),以氮气为载气,FID检测器,采用程序升温,分流直接进样,标准曲线法计算游离庚酸的含量。结果:游离庚酸的检测限为0.49 ng,定量限为2.45 ng,线性范围9.84~118.04μg·mL^(-1)(r=0.999 9),平均回收率(n=3)为98.8%~101.0%(RSD=1.24%),样品中游离庚酸含量分别为0.69%(批号:ALT803730)、0.54%(批号:80703)。结论:本法简单、快速、灵敏、准确,可对庚酸炔诺酮中游离庚酸进行质量控制。

生长抑素及制剂中多聚体的定量研究

目的:建立高效液相色谱-分子排阻色谱法(HPLC-SEC)测定生长抑素及制剂中的多聚体,并进行了方法学验证。方法:采用TSKgel G2000SWXL色谱柱(7.8 mm×300 mm,5μm),流动相为乙腈-水-三氟乙酸(20∶80∶0.1,体积比),线性等度洗脱,流速0.5 mL·min^(-1),柱温25℃,进样量为100μL;紫外检测器,检测波长为215 nm;标准曲线法和面积归一化法计算多聚体含量。结果:生长抑素二聚体的检测限为5.2 ng,定量限为15.6 ng,线性范围为0.1~5μg·mL^(-1)(r=0.999 6),平均回收率(n=3)为100.3%(RSD=0.52%)。结论:该方法快速、灵敏、准确,能够对生长抑素及制剂中的多聚体进行质控。

酶联免疫法测定甘精胰岛素中单链前体残留研究

目的 建立酶联免疫法检测甘精胰岛素中单链前体残留,为甘精胰岛素药物质量控制和安全性评价提供新方法。方法采用双抗夹心酶联免疫法,以甘精胰岛素原为标准品,建立单链前体残留检测方法,验证方法的重复性、准确度、范围和精密度,并应用该方法检测9批甘精胰岛素原料药。结果在0.156~10.00 ng·mL^(-1)浓度范围内,对甘精胰岛素原标准品进行四参数曲线拟合,曲线相关系数R~2大于0.99,方法准确度较高、重复性良好。重复检测3批甘精胰岛素原料药,平均加标回收率在104%~113%范围内,RSD%小于10%,方法精密度良好。9批样品中单链前体残留量均小于1 ng·mg^(-1)。结论建立的酶联免疫法可用于甘精胰岛素及其他重组人胰岛素类似物中单链前体残留量的质量控制和安全性评价。

DMB衍生-高效液相色谱法测定重组人促卵泡激素中的唾液酸含量

目的建立采用4,5-亚甲二氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐(DMB)衍生-高效液相色谱-荧光检测器(HPLCFLD)法(DMB衍生法)同时测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中2种唾液酸组分N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)和N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)含量的方法。方法将DMB衍生法与邻苯二胺衍生-高效液相色谱法(邻苯二胺衍生法)进行对比研究,对DMB衍生法中的水解条件进行优化并确定最终方法为rhFSH原液经酸水解后,采用DMB进行衍生,经Agilent ZORBAX 300SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,采用荧光检测器检测。结果与邻苯二胺衍生法相比,DMB衍生法能够实现Neu5Gc与Neu5Ac相关杂质的有效分离。该方法Neu5Gc和Neu5Ac分别在0.5~5.0μg·mL^(-1)(r=0.9999)和25~250μg·mL^(-1)(r=0.9998)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;Neu5Gc和Neu5Ac的检测限分别为11.07、10.30 ng·mL^(-1),定量限分别为33.21、20.60 ng·mL^(-1),两者回收率分别为(99.63±1.33)%(n=9)和(100.62±1.58)%(n=9),RSD分别为1.3%(n=9)和1.5%(n=9)。结论该方法专属性强、灵敏度高、精密度和准确度良好,可用于准确测定rhFSH中唾液酸Neu5Gc和Neu5Ac的含量。

重组人甲状旁腺激素的质量研究

目的:建立重组人甲状旁腺激素rh—PTH(1—34)的质控方法和标准规范,为质量标准的制定提供科学依据。方法:用UMR-106-01细胞株/RIA法测定人甲状旁腺激素的生物学活性,RP—HPLC法测定含量;胰酶消化及RP—HPLC法测定肽图;IEF凝胶电泳测定等电点;用质谱及还原型SDS—PAGE电泳测定相对分子质量;分别用非还原型SDS—PAGE和RPHPLC法测定样品的纯度;用ELISA法测定产品的肠激酶(EK)残留。结果:6批rh—PTH(1—34)产品原液比活性分别为:1.2×10~4,1.2×10~4,9.2×10~3,1.2×10~4,9.2×10~3,1.1×10~4IU·mg^(-1)蛋白;其蛋白含量分别为:0.734,0.685,0.597,0.970,0.960,0.920 mg·mL^(-1);6批成品效价分别为标示量的:119%,115%,95%,100%,100%,96%。RP—HPLC胰肽图显示4个肽段,6批样品图谱均一致;N-末端15个氨基酸序列与理论值一致;其等电点范围为8.0-9.0。SDS—PAGE和RP—HPLC纯度均大于95.0%。结论:建立的质控方法可有效控制重组人甲状旁腺激素rh—PTH(1—34)产品的质量。

马铃薯卷叶病毒复制酶基因5'端克隆及序列分析

马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｖｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）是正链ＲＮＡ病毒，属黄化病毒组（Ｌｕｔｅｏｖｉｒｕｓ）〔１〕，严格虫传，分布广泛，难以控制，侵染马铃薯能引起大面积减产，给马铃薯生产造成巨大损失。ＰＬＲＶ基因组全长６．０ｋｂ，有６个读...

液质联用技术(LC-MS)在rh-PTH(1-34)肽图确定中的应用

目的:建立可用于质量控制的 rh-PTH(1-34)的标准胰酶肽图分析方法,并确定其理论肽图。方法:用胰酶动态酶切rh-PTH(1-34)探索最佳肽图分析条件,利用氨基酸特征吸收波长色谱分析结合 LC-MS 相对分子质量分析确证理论肽图。结果:多批 rh-PTH(1-34)原液经胰酶解、RP-HPLC 分析后,可产生4个主要肽段,其图谱与人工合成的 hPTH(1-34)对照品一致;确定其理论肽图为:T_1—HLNSMER、T_2—LQDVHNF、L_3—VEWLR、T_4—SVSEIQLMHNLGK。结论:建立的胰肽图分析方法可用于 rh—FFH(1—34)产品的质量控制,用氨基酸特征吸收波长分析辅助 LC-MS 相对分子质量分析可有效用于 rh-PTH(1-34)的标准肽图确定。

马铃薯卷叶病毒复制酶基因3'端克隆及序列分析

马铃薯卷叶病毒复制酶基因３端克隆及序列分析梁成罡哈斯阿古拉张鹤龄（内蒙古大学，呼和浩特市０１００２１）关键词马铃薯卷叶病毒，复制酶，基因克隆，ＰＣＲ马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｖｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）属黄化病毒组（Ｌｕｔｅｏｖｉｒｕｓ）...

重组人促卵泡激素(rhFSH)肽图分析方法研究

目的建立重组人促卵泡激素(rh-FSH)的标准肽图分析方法。方法通过超滤、透析、冷冻干燥法富集制备rh-FSH对照品。通过尿素变性、二硫苏糖醇(DTT)还原、碘乙酸酰基化制备供试品溶液。采用N型-糖苷酶F(PNGaseF)酶解去除rh-FSH糖侧链,经SDS-PAGE验证切糖结果后,用胰蛋白酶水解,酶解所得肽段通过RP-HPLC分析,得到rh-FSH肽图。结果利用国外原研厂rh-FSH制剂富集制备的rh-FSH结构完整,可用作rh-FSH肽图分析的对照品。国产样品的肽图谱与对照品一致。结论建立的肽图分析方法可作rh-FSH产品的结构确证。

人胰岛素及其类似物国家标准增修订概况

本文介绍了2020年版(三部)人胰岛素及其类似物国家标准增修订概况,包括标准起草过程的基本原则和技术考量,并就关键项目在中国药典、欧洲药典和美国药典的协调性方面进行了分析,旨在为本领域内相关研发和质控人员更好地理解和使用人胰岛素及其类似物药典标准提供参考。

SEC-ELSD法测定中药注射液中聚山梨酯80的含量

目的:建立测定中药注射液中聚山梨酯80含量的分子排阻-蒸发光散射(SEC—ELSD)方法。方法:采用 TSKgel G2000SW_(XL)色谱柱(7.8 mm×30 cm,5μm),以20 mmoL·L^(-1)醋酸铵-乙腈(90∶10)为流动相,流速:0.6 mL·min^(-1);柱温:30℃;蒸发光散射器的漂移管温度:110℃,氮气流速:2.3 L·min^(-1)。结果:聚山梨酯80浓度在1～20mg·mL^(-1)范围内呈良好的对数线性关系,r=0.9968;鱼腥草注射液、新鱼腥草素钠注射液及柴胡注射液的平均加样回收率(n=9)分别为101.1%,100.5%,99.6%。结论:该方法专属、准确,适用于测定鱼腥草注射液、新鱼腥草素钠注射液、柴胡注射液中聚山梨酯80的含量。

鱼腥草类注射液临床严重不良反应的原因研究(Ⅰ)

由于鱼腥草类注射液在临床应用中多次出现严重不良反应,我们利用豚鼠及 Beagle 犬进行了有关动物实验研究,结果证明助溶剂聚山梨酯80是引起鱼腥草类注射液临床严重不良反应的主要原因之一。

特异切割马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的核酶研究

根据锤头状核酶的作用模式，设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）复制酶基因负链ＲＮＡ的核酶序列。以体外转录的ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负链ＲＮＡ作为底物，与转录的核酶ＲＮＡ共同保温，以检测核酶对底物的体外切割作用。实验结果表明。

荧光光度法测定重组人生长激素注射液中聚山梨醇酯20的含量

目的:建立荧光光度法测定重组人生长激素注射液中聚山梨醇酯20的含量。方法:利用 N-苯基-1-萘胺(NPN)能摄取溶液中的聚山梨醇酯20并产生荧光,以其荧光强度与浓度正相关的特性来测定聚山梨醇酯20的含量。同时考察该方法的影响因素,确定了最佳实验条件。结果:根据影响因素与荧光强度的关系确定了35℃、0.05%NPN 浓度反应5 min 的试验条件,该法的平均仪器精密度、方法精密度和板间精密度分别为2.0%,4.0%,5.0%,平均加样回收率为102.6%。本法测定的2批生长激素注射液结果,与企业采用的方法结果一致。结论:本法快速、简便、准确,可用于测定重组人生长激素注射液中聚山梨醇酯20的含量。

重组人甲状旁腺激素效价测定方法的研究

采用酶标法、放免法、化学发光法对 rh PTH效价进行测定,并进行了比较性研究。结果表明,三种方法间无显著性差异。酶标法简单快捷、安全,更适合作为常规重组人甲状旁腺激素生物学活性的测定。

重组甘精胰岛素相关杂质的结构确认及质量分析

目的结合国际通用标准,通过对甘精胰岛素主要相关杂质的定性研究和来源分析,促进国内同类产品的质量提高。方法首先将提纯冻干的杂质回加到对照品中进行液相色谱定位,继而分析HPLC肽图,结合激光辅助基质解吸附飞行时间质谱测定的分子量及肽质量指纹图谱初步定性,再以小分子电泳、N-端测序及二级质谱进一步验证。结果主要相关杂质均为甘精胰岛素的类似物,是在酶切过程中产生的副产物,即为可预期的工艺相关杂质。结论该方法可对甘精胰岛素的主要相关杂质快速、经济、准确的定性,本实验对预期杂质的来源分析可为同类产品的杂质研究提供新颖的参考思路。