猪传染性胸膜肺炎病原学研究进展

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的,该病是一种呼吸道疾病,影响着全世界养猪业的发展。综述了猪传染性胸膜肺炎的病原学研究进展,为该病的诊断及研究高效的猪传染性胸膜肺炎疫苗提供理论依据。

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素蛋白的表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立与应用

将含有猪胸膜肺炎放线杆菌毒素 基因的质粒 p ET- Apx 转化到大肠杆菌 BL2 1 (DE3)。挑选出表达量最高的克隆子 ,于 37℃经 IPTG诱导表达。对表达条件进行优化 ,并对包涵体进行了提纯和复性。用复性后的蛋白作抗原 ,建立了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抗体的间接 EL ISA。试验的最佳反应条件为 :最佳抗原稀释度为 1∶ 1 6 0 ,抗原包被液用 Tris- HCl(p H8.0 ) ,封闭液用含 0 .4 %BSA的 PBST,血清稀释度为 1∶ 4 0 ,二抗稀释度为 1∶ 6 0 0 0 ,稀释液用含0 .4 %BSA的 PBST,血清反应时间为 30 min,二抗反应时间为 4 5 min,底物反应时间为 2 0 m in。与间接血凝 (IHA)检测结果比较 ,建立的 EL ISA诊断方法具有良好的稳定性和可重复性 ,并具有较高的特异性和敏感性。用建立的间接EL ISA对 2 5 0 3份临床送检血清进行了血清流行病学调查 ,结果表明 ,胸膜肺炎放线杆菌抗体的阳性率为 6 3%。

重庆地区猪圆环病毒2型的分离鉴定与序列分析

为了解2007年以来重庆地区猪圆环病毒2型（PCV-2）的流行情况,对2007年—2013年重庆地区送检样品进行了PCV-2荧光定量PCR检测,并对阳性样品进行了病毒的分离鉴定,成功分离到12株PCV-2,对分离的12株PCV-2进行了全基因组克隆与序列分析。结果显示,所分离的PCV-2均处于PCV-2b分支,基因组全长均为1 767bp,与PCV-2b参考毒株（AF055394）的核苷酸同源性为96.2%-99.7%,与疫苗SH株的核苷酸同源性为96.0%-98.4%,而与疫苗LG株同源性仅为95.5%-95.8%。研究结果为PCV-2的研究及其感染的防控奠定了基础,也为重庆地区PCV-2疫苗毒株的选择提供了理论依据。

猪繁殖与呼吸综合征病原学研究进展

综述了猪繁殖与呼吸综合征病毒的病原学研究进展,为该病的诊断及研究高效的PRRSV疫苗提供了理论依据。

猪γ干扰素的表达及抗病毒活性研究

利用RT-PCR技术从有丝分裂原刀豆素(ConA)诱导的长白猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出猪γ干扰素的成熟肽基因(mPoIFN-γ),并将其亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-mPoIFN-γ。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测,表明猪γ干扰素获得了高效表达,并具有免疫活性,表达产物约为20.5 kDa,主要以包涵体形式存在,产物经纯化、复性得到具有生物学活性的蛋白。利用细胞病变抑制法对其在H-PRRSV/Marc-145系统上进行抗病毒活性测定,结果表明其抗H-PRRSV活性为7.68×103 U/mg。为进一步研究猪γ干扰素功能奠定了基础和理论依据。

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株GP5基因的遗传变异与系统进化分析

为进一步了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在国内的分子遗传进化情况，对中国大陆1996-2008年问33株PRRSV分离毒株（29株来自GenBank）的GP5序列与国外部分代表毒株进行了分析比较。结果表明，所选PRRSV中国分离毒株中有32株属于北美洲型（NA），并大致可分为2个基因亚群，1株属于欧洲型（EU）。其中，自2006年在我国暴发的高致病性蓝耳病病毒（H—PRRSV）属于亚群1，且与YA株亲缘关系较近；亚群2毒株则与Ingelvac的弱毒疫苗株及其亲本株VR-2332具有较高的同源性。

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达

采用RT-PCR方法扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒临床分离株(HBKM2)的ORF5全基因,并进行了测序分析,根据ORF5的结构特点,进一步扩增了截去N端信号肽序列的ORF5(nsORF5),并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体,构建了重组质粒pKG-ns5,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的nsORF5基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-nsGP5分子量约为43kD,并具有反应活性,这为进一步研究PRRSV GP5蛋白的功能及新型疫苗、血清学诊断方法的研制奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2株ORF7基因的克隆、序列分析及原核表达

[目的]对猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2毒株核蛋白编码基因ORF7进行研究,为进一步了解其编码蛋白的功能和研制新的血清学诊断方法奠定基础。[方法]采用RT-PCR方法扩增HBKM2株的ORF7基因,然后利用DNA Star软件包对克隆的序列进行序列分析,将ORF7基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-KG上,构建重组表达质粒pKG-N。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21,并经IPTG诱导表达,最后利用Western-blot对表达蛋白的免疫反应活性进行鉴定。[结果]HBKM2毒株的ORF7基因长约372 bp;序列分析表明与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的同源性达99%以上;SDS-PAGE表明克隆的ORF7基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达;Western-blot分析表明,重组蛋白GST-N能够与PRRSV高免猪血清发生特异性的免疫反应。[结论]成功地扩增了ORF7基因,且GST-N融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达。

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因的原核表达

大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素B亚单位(LTB)不仅是重要的黏膜免疫原,而且作为佐剂在黏膜免疫中起着重要的作用。试验采用PCR方法扩增了肠毒素性大肠杆菌的LTB基因,并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体上,构建了重组质粒pKG-LTB,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的LTB基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-LTB分子量约为35kDa,并具有免疫反应活性。这为进一步研究LTB蛋白黏膜免疫原性和黏膜佐剂的作用奠定了基础。

猪α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达

利用PCR技术从长白猪全血基因组DNA中扩增出猪α干扰素的成熟肽(mPoIFN-α)基因,并将其亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母(Pichia pastoris)-大肠杆菌(Escherichia coli)穿梭质粒pPIC9K载体中,构建分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFN-α。将SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFN-α电转化毕赤酵母GS115株(组氨酸缺陷型),使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以G418抗性梯度法筛选多拷贝重组子。该多拷贝菌株经1%甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明,猪α干扰素在毕赤酵母中成功地获得了分泌表达,并具有免疫活性,表达产物约为19kD,这为进一步研究猪α干扰素的功能奠定了基础。

猪病混合感染对临床诊断的影响

[目的]寻求科学的解决猪病的混合感染问题。[方法]分析近几年猪病的流行特点,归纳出几种常见的混合感染,探讨混合感染对临床诊断的影响,分析其科学原理。[结果]应采取综合防制,包括:搞好科学的免疫工作;从各方面减少病原微生物积累与传播,尽量减少应激因子,增强猪体抵抗力等。[结论]该文为解决猪病的混合感染提供了理论基础。

新生仔猪红黄痢二联灭活疫苗的研制与应用Ⅰ——C型魏氏梭菌生物学特性研究

[目的]研究C型魏氏梭菌C59-2菌株的生物学特性。[方法]将该菌株接种于适宜培养基,进行毒素致死性试验和免疫原性试验。[结果]C型魏氏梭菌C59-2菌株在厌气肉肝汤和血液琼脂平板上生长良好,生化特性与魏氏梭菌一致;该菌在厌气肉肝汤中培养物的上清液0.0001ml静脉注射可致小鼠100%死亡,0.2ml静脉注射可使家兔全部死亡;免疫原性试验表明,该菌株制备成疫苗后免疫家兔,攻毒保护率可达75%。[结论]C型魏氏梭菌C59-2毒株适合于疫苗生产。

快速检测牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR技术建立及应用

以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的保守基因序列为参考,设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针,建立一种快速定量检测牛病毒性腹泻病毒的实时荧光定量PCR技术。该方法检测灵敏度比RT-PCR高100倍,并且避免了常规PCR电泳检测所带来的高污染率。因此,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,适用于牛场BVDV感染的快速定量检测和肉类食品进出口检疫。

湖北省猪病流行特点及防控策略

猪病已成为制约湖北省养猪业发展的一个重要瓶颈,主要特点表现为疾病的种类不断增多,危害不断增大,呈混合感染,免疫抑制性疾病的威胁也逐渐加剧,人畜共患传染病也有抬头的趋势。为此,猪场应该建立健全生物安全体系、树立科学的防疫观念、建立完善的疫病监测与免疫监测方案、制定合适的保健方案,以保证养猪业的健康发展。

猪无名高热症流行情况调查

介绍了猪无名高热症的发病特点和临床症状,阐述了其病理变化,分析了其发病原因,并提出了预防措施。

猪瘟病毒检测技术研究进展

综述了猪瘟病毒检测技术的研究现状,并对今后的研究趋势进行了展望。

猪瘟防控新思路及关键技术

从病原学、流行病学、免疫学等方面系统地分析了当前猪瘟流行和发生的原因,揭示了防控中存在的主要问题和缺陷,并针对如何根除猪瘟提出了防控新思路及关键技术。

重庆市畜禽产品中沙门氏菌污染状况调查分析

为有效控制畜禽产品中沙门氏菌的污染,以便对污染源和污染途径进行针对性监控,对重庆市屠宰场、农贸市场和超市供应链的畜禽产品中沙门氏菌污染状况进行初步调查分析,同时对从供应链中分离的沙门氏茵进行18种抗生素的药敏试验。结果表明:屠宰环节猪肉的沙门氏菌污染程度较低,为7.27%;经过运输到达销售环节,其污染程度明显上升,最高的是超市环节,高达64.52%。对其所处的环境进行调查分析,发现屠宰场和超市的沙门氏菌污染较严重,尤其是屠宰场容器(88.89%)、台面(55.56%)和超市刀具(50.00%)、地面(46.67%);中型规模屠宰场的沙门氏菌污染风险最大。分离菌株对头孢类药物敏感,对磺胺类药物耐药严重,其次为四环素类和β-内酰胺类,多重耐药情况普遍。

荧光PCR诊断猪流行性腹泻病毒与猪轮状病毒混合感染病例

猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRV）足3种引起猪病毒性腹泻的重要病原。该3种病毒既可单独感染，也可混合感染,