耐碳青霉烯肺克雷伯菌和大肠埃希菌耐药机制研究

目的分析该院临床分离的可疑产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性与耐药机制。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测其对21种抗菌药物的药敏结果,采用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶筛选,用聚合酶链反应检测碳青霉烯酶KPC基因、外膜孔道蛋白(OmpK35和OmpK36)编码基因、转座子tnpA、tnpU基因。结果 47株可疑产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率高达80%以上,对亚胺培南、美罗培南、丁胺卡那霉素耐药率为35%以下;耐亚胺培南菌株对头孢哌酮/舒巴坦、头孢美唑、头孢替坦、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、妥布霉素、美罗培南、厄他培南的耐药率明显高于敏感菌株,二者差异具有统计学意义(P<0.05);改良Hodge试验阳性6株,检出碳青霉烯酶KPC基因4株,符合率为66.67%,均为KPC-2型;膜孔蛋白OmpK35、OmpK36基因缺失率分别为38.30%、65.96%;转座子tnpA、tnpU检出率分别为4.25%和38.30%。结论产碳青霉烯酶并非菌株耐碳青霉烯类药物的主要原因,尚存在其他耐药机制。

广东万年青HPLC指纹图谱的研究

目的建立广东万年青HPLC指纹图谱,为广东万年青的质量鉴别提供依据。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Kromasil100-5C18(4.5 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.085%磷酸水为流动相,检测波长为413 nm,柱温为30℃,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1)。结果建立了广东万年青HPLC指纹图谱,并利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对6批次的广东万年青HPLC指纹图谱进行相似度评价,其相似度均大于0.95。结论广东万年青HPLC指纹图谱的稳定性、重复性好,可用于广东万年青的鉴别及质量控制。

不同早稻品种对喷硒的响应

通过田间试验研究了海南省主栽的12个早稻品种对叶面喷施亚硒酸钠的响应,结果表明,与对照相比,喷硒分别提高糙米和精米平均硒含量43%和34%,差异达极显著水平。不同品种对喷硒的响应不同,与对照相比,喷硒显著提高丛优629和特优5735的糙米硒含量,因此,在海南低硒地区可选择种植这两个水稻品种生产富硒大米。

氨基糖苷类高水平耐药肠球菌的耐药及分子机制的研究

目的分析氨基糖苷类高水平耐药(High Level Aminoglyeoside Resistant,HLAR)肠球菌的耐药性与耐药基因,并研究其耐药分子机制。方法采用VITEK-2全自动鉴定仪法测定53株氨基糖苷类高水平耐药肠球菌对11种抗菌药物的最小抑菌浓度,用聚合酶链反应(PCR)检测肠球菌转座子Tn917和Tnl546/Tn916、红霉素耐药基因ermB、毒力岛基因mefA、I类整合酶IntI1、氯霉素耐药基cat、表面蛋白基因esp,并对万古霉素耐药肠球菌(Vancomycin-resistant Enterococc,VRE)进行基因分型(vanA、vanB、vanC)。结果 53株肠球菌检出含ermB 26株,占49.0%;含mefA 9株,占17.0%;含Tnl546/Tn916 19株,占35.8%;含Tn917 11株,占20.8%;含IntI1 26株,占49.1%;含esp 15株,占28.3%;未检出cat。53株肠球菌对复方新诺明全部耐药,对红霉素耐药高达94.3%,对高水平庆大霉素、高水平链霉素、环丙沙星、四环素和氨苄西林的耐药率分别为75.5%、73.6%、75.5%、66.0%、62.3%;对利奈唑胺和替考拉宁的敏感率高达98.1%;1株耐万古霉素,其基因和表型均为VanA。结论 HLAR肠球菌可携带多种耐药基因,耐药基因与肠球菌耐药性密切相关,可能在多重耐药机制中起重要作用。

响应面法优化铁皮石斛叶闪式提取工艺

目的:优化铁皮石斛叶多糖的提取工艺。方法:使用闪式提取法对铁皮石斛叶中的多糖成分进行提取,苯酚-硫酸法检测多糖含量,在单因素试验基础上,以料液比、提取时间、提取次数为影响因素,得率为响应值,采用Box-Behnken响应面法,优选最佳提取工艺技术参数。结果:最佳提取工艺条件为以25倍量水提取铁皮石斛叶多糖3次,每次90s,得率为11.52%,与理论得率11.77%接近。结论:经Box-Behnken响应面法优选的铁皮石斛叶多糖的提取工艺,得率与理论值较吻合,模型选用合理有效。

不同厂家诺氟沙星胶囊含量及其溶出度的观察

目的通过对不同厂家诺氟沙星胶囊含量的测定和溶出度检测,观察其产品质量。方法依据《中国药典》(2015年版)诺氟沙星胶囊高效液相含量测定方法及其溶出度紫外分光光度法进行检测。结果多个厂家的诺氟沙星胶囊存在含量不合格,个别厂家诺氟沙星胶囊的溶出度不合格。结论不同厂家诺氟沙星胶囊质量存在较大差异,会影响临床药效。

鹅藻滴鼻剂提取纯化工艺研究

目的优化鹅藻滴鼻剂鹅不食草的提取纯化工艺。方法采用紫外分光光度法,单因素试验,以乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数为因素进行L9(34)正交试验,以总黄酮的提取率,纯化提取转移率为考察指标,优选鹅不食草最佳提取纯化工艺技术参数。结果最佳提取工艺条件为以药材14倍量的35%乙醇提取3次,每次1.5 h,总黄酮的提取率为75.93%;提取浓缩液(浓缩液∶药材=1∶1)以70%醇沉,总黄酮的提取转移率为63.07%。结论本提取纯化工艺可操作性强,提取转移率高,适用于鹅藻滴鼻剂的研发。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定沙门菌临床分离株

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在沙门菌鉴定中的临床应用,并研究其影响因素。方法用传统血清学方法鉴定沙门菌的血清型,用MALDI-TOF MS对哥伦比亚血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h、72h、120h和168h的179株沙门菌进行鉴定。结果 179株沙门菌可分为38种血清型,肠炎沙门菌(21.2%)、斯坦利沙门菌(17.3%)和Ⅰ4,5,12:i:-沙门菌(16.2%)居前3位。所有菌株在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h和72h均能被MALDI-TOF MS准确鉴定为沙门菌。MALDI-TOF MS的耗材成本约为微生物自动生化鉴定系统(Vitek 2)的1/3,检测时间约为Vitek 2的1/7。结论在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板培养3d以内的沙门菌,MALDI-TOF MS均可以准确鉴定。与Vitek 2相比,MALDI-TOF MS检测的速度更快,消耗的成本更低,并且可以直接鉴定生长在选择性培养基的沙门菌。

鸦胆子凝胶贴膏配方工艺的研究

目的优选鸦胆子凝胶贴膏的配方工艺。方法采取正交试验法,以持黏力和感官评价为指标进行综合评价,优选鸦胆子凝胶贴膏的配方工艺。结果优选的最佳鸦胆子凝胶贴膏配方为:药材细粉10 g,聚丙烯酸钠1.5 g,明胶3 g,AlCl_3 0.4 g,聚乙烯醇3.5 g,甘油30 g,微粉硅胶15 g。结论优选的鸦胆子凝胶贴膏配方工艺稳定可行。

鸦胆子水溶性成分的含量测定及提取工艺

目的:建立鸦胆子水溶性成分的含量测定方法,优选其提取工艺。方法:采用HPLC法,以尿嘧啶为对照品,测定其含量,并利用正交设计优选最佳提取工艺。结果:尿嘧啶浓度在0.0240~0.0960 mg/m L范围内线性关系良好,回归方程为Y=1.3074X+679.24,r=0.9954,RSD=1.11%(N=6)。优化的提取工艺条件为药材6倍量蒸馏水,100℃提取60 min。结论:该测定方法简单,提取工艺稳定可行,可为鸦胆子的研究提供参考。

无精及严重少精症患者Y染色体微缺失类型与不同分型下性激素水平差异分析

目的分析无精及严重少精症患者Y染色体微缺失类型与不同分型下性激素水平差异。方法选取本院2017年1月至2018年5月收治的293例无精及严重少精症患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR的方法检测Y染色体无精子症因子(AZF),依据检测结果分为Y染色体微缺失组21例及Y染色体无微缺失组272例,统计无精及严重少精症患者Y染色体微缺失类型,并对不同Y染色体微缺失类型患者性激素水平进行比较。结果293例无精及严重少精症患者中Y染色体微缺失21例(7.17%),AZFc缺失12例(57.14%)、AZFa缺失2例(9.52%)、AZF(b+c)缺失4例(19.05%)、AZF(a+b+c)缺失3例(14.29%),AZF微缺失位点检出率,c区61.29%,b区22.58%,a区16.13%,差异有统计学意义(P<0.05);Y染色体微缺失组促卵泡生成素(FSH)(19.49±6.88)IU/L、促黄体生成素(LH)(8.17±3.72)IU/L、睾酮(T)(12.48±2.27)mmol/L,Y染色体无微缺失组FSH(9.91±4.07)IU/L、LH(7.06±2.35)IU/L、T(13.91±4.43)mmol/L,FSH差异有统计学意义(P<0.05),LH、T差异无统计学意义(P>0.05);Y染色体微缺失组内不同分型患者性激素相比较,AZF(a+b+c)缺失模式FSH和LH值升高最为显著,差异有统计学意义(P<0.05),T差异无统计学意义(P>0.05)。结论无精及严重少精症患者Y染色体微缺失类型以AZFc缺失为主、AZFb缺失次之、AZFa缺失少见,FSH水平在Y染色体微缺失患者中显著升高,其中AZF(a+b+c)缺失模式FSH升高最为显著,通过检测Y染色体有无缺失可为辅助生殖及治疗提供强有力的帮助。

羟苯磺酸钙对肌酐检测的干扰效应评价

目的评价不同浓度羟苯磺酸钙对常见肌酐检测试剂的干扰剂量效应情况。方法依据WS/T 416-2013干扰实验指南,参考医学决定浓度选取4种肌酐浓度的新鲜标本,定量配制成8种药物浓度梯度,比较3种肌酐检测试剂对不同浓度羟苯磺酸钙干扰剂量效果,以1/3允许总误差(4%)为最大允许干扰限。结果3种检测肌酐试剂随羟苯磺酸钙剂量增加,负干扰效应愈加明显。血清标本肌酐浓度为40μmol/L时,随羟苯磺酸钙浓度增加,普通酶法负偏差高达64.17%,新酶法最大负偏差仅为3.07%;血清标本浓度为141μmol/L时,新酶法、普通酶法和干化学试剂在羟苯磺酸钙浓度为15 mg/L时负偏差分别为3.91%、29.67%、6.53%;血清标本浓度为1000μmol/L、干扰物浓度为15 mg/L时,新酶法、普通酶法和干化学法负偏差依次为3.21%、9.09%、2.39%。结论新酶法在检测肌酐过程中对于羟苯磺酸钙药物产生负干扰在最大允许干扰限内,普通酶法肌酐试剂基本无抗干扰能力,干化学法在高肌酐浓度检测中其抗干扰能力更优越。

广东佛山地区人群CYP2C19基因多态性及氯吡格雷药效反应的影响因素分析

目的探讨佛山地区人群依赖细胞色素P450的加单氧酶系(CYP2C19)基因多态性及对该地区冠心病患者氯吡格雷药效反应的影响因素分析。方法选取2016年8月至2018年2月在我院住院的冠心病患者375例,均连续服用氯吡格雷75 mg/d 5天以上者,进行CYP2C19基因型及血小板聚集功能检测,根据血小板聚集功能检测来判断氯吡格雷药效反应性,>50%为氯吡格雷抵抗。统计CYP2C19基因型及等位基因的分布规律,比较氯吡格雷抵抗及氯吡格雷反应组的基因分布和基本资料,并行Logistic多因素分析。结果 375名冠心病患者中突变纯合型占12.27%,突变杂合型占45.60%,野生型占42.13%;氯吡格雷抵抗组和氯吡格雷反应组在基因表型和等位基因频率分布上有明显差异(P<0. 05),突变纯合型在氯吡格雷抵抗组显著高于氯吡格雷抵反应组;氯吡格雷抵抗组与氯吡格雷反应组的年龄、性别、糖尿病、高血压、高胆固醇血症、血小板计数、纤维蛋白原水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),氯吡格雷抵抗组CYP2C19突变纯合和突变杂合型所占比例高于氯吡格雷反应组,差异有统计学意义(P<0.05);经Logistic分析,CYP2C19突变纯合型(OR=2.557)和突变杂合型(OR=2.027)为氯吡格雷抵抗的危险因素。结论佛山地区人群CYP2C19基因型与广东其它地区人群分布相似,突变纯合型和突变杂合型为佛山地区人群发生氯吡格雷抵抗的危险因素,应采取有效措施进行干预。

检验结果互认平台的建设及展望

介绍了医疗机构检验结果互认在国家医药卫生体制改革中的重要性,阐述了佛山市实行检验结果互认的总体思路及方案,详细描述了检验结果互认平台的特点,主要包括检验结果互认准入条件、平台构建、技术标准、平台安全性及互认管理制度,对互认平台应用效果进行了总结,并对互认平台后续的深入应用进行了展望。

909例儿童急性呼吸道感染病原体RNA检测结果分析

目的 分析我院急性呼吸道患儿病原体感染的检测情况,为临床诊疗及防治提供依据.方法 采集佛山市第一人民医院2016年8月至2017年9月儿科收治的909例急性呼吸道感染住院患儿咽拭子标本,采用双扩增技术(DAT)技术进行呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)、肺炎支原体(MP)和肺炎衣原体(CP)五种病原体RNA检测.结果 909例标本总阳性率为38.28%,病原体检出率依次为RSV 16.61%、MP 11.11%、PIV 8.69%、ADV 3.96%和CP 0.99%,其中混合感染率为2.64%;冬季病原体阳性率最高48.94%,四季间病原体阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);肺炎患儿病原体阳性率最高(43.00%),其次支气管炎(37.40%),不同疾病间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);不同性别及不同年龄段病原体阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),但RSV和PIV感染率随患儿年龄增长而下降,MP检出率随患儿年龄增长显著升高.结论 本院儿童急性呼吸道感染病原体以RSV为主,MP和PIV次之,存在混合感染,呈现季节性,不同年龄、不同疾病感染病原体有所差异.

53株临床分离肠球菌的耐药性及相关耐药基因分析

目的了解临床分离的53株肠球菌的耐药性与耐药基因的存在状况。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测肠球菌对9种抗生素的药敏结果,对该细菌进行总DNA的提取,用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因,结合药物敏感试验分析菌株的耐药特征。结果 53株肠球菌检出含红霉素耐药基因ermB26株,占49.0%;含毒力因子mefA9株,占17.0%;含Tnl546/Tn916转座子19株,占35.8%;含Tn917转座子11株,占20.8%。53株肠球菌对红霉素耐药高达94.3%,对高水平庆大霉素、高水平链霉素、环丙沙星、四环素和氨苄西林的耐药分别为75.5%、73.6%、75.5%、66.0%、62.3%;对万古霉素和利奈唑胺敏感均高达98.1%。结论耐药基因与肠球菌耐药性密切相关,随着医学环境的改变,肠球菌对抗生素耐药性正逐步上升。

氨基糖苷类高水平耐药肠球菌耐药基因的检测与研究

目的研究氨基糖苷类高水平耐药(high-level aminoglycoside-resistant,HLAR)肠球菌临床株表面蛋白基因(esp)、I类整合酶基因(IntI1)、耐氯霉素肠球菌乙酰转移酶基因(cat)等三种耐药基因的流行情况及肠球菌对常见抗菌药物的耐药情况。方法对53株肠球菌进行菌株鉴定和药敏试验,用PCR法扩增肠球菌esp基因、IntI1基因和cat基因,阳性产物送测序并对序列进行分析。结果 53株HLAR肠球菌中,esp基因阳性率为28.3%,I类整合酶基因阳性率为49.1%,没有检测到cat基因。菌株对多种抗菌药物的耐药率为:氨苄西林62.3%、环丙沙星75.5%、红霉素94.3%、高水平庆大霉素75.5%、高水平链霉素73.6%、喹努普汀/达福普汀32.1%、四环素66.0%、万古霉素1.9%、利奈唑胺0。结论肠球菌对常见抗菌药物存在不同程度的耐药,esp基因和IntI1基因与肠球菌耐药性密切相关。

不同盐分浓度对副溶血弧菌毒力表型的影响

目的研究副溶血弧菌(VP)在不同盐分浓度下毒力表型的变化。方法利用小鼠致死性实验、兔回肠袢实验、Raw264细胞毒性实验和兔红细胞溶血活性实验比较标准强毒株RIMD2210633株在高盐(2%NaCl)和低盐(0.5%NaCl)条件下毒力表型的变化。结果 0.5%NaCl试验组副溶血弧菌的生长速度较2%NaCl试验组有所减慢,而产生的肠积液量、对Raw264细胞的细胞毒性及对兔红细胞的相对溶血活性却显著高于2%NaCl试验组(P<0.05);然而0.5%NaCl试验组菌体的小鼠致死率却低于2%NaCl试验组,两组小鼠存活率分别为80.0%和53.3%。结论在低盐条件下,VP的生长速度下降,肠毒性、Raw264细胞毒性和溶血活性均增强,而小鼠致死毒性反而减弱。

CMY-39新基因亚型AmpC β-内酰胺酶的特性研究

目的对弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY-39新基因亚型AmpCβ-内酰胺酶进行酶特性研究。方法 pET-32a(+)/CMY-39表达质粒在BL21(DE3)中诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定酶蛋白的表达;原菌株和重组表达菌株进行药敏试验,并提取重组表达菌株的CMY-39酶蛋白进行AmpC酶三维试验和酶动力学检测。结果 pET-32a(+)/CMY-39在大肠埃希菌中大量表达,蛋白相对分子质量约为60000,用特异抗体经Western检测该条带为阳性;AmpC酶三维试验为阳性;CMY型重组菌株药敏试验结果与原菌株相比,对青霉素类和头孢西丁具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致。结论证实重组菌株pET-32a(+)/CMY-39能高效表达CMY-39酶蛋白,表达CMY型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性有所增加,亲和力下降。

同时产碳青霉烯酶IMP与NDM的肺炎克雷伯菌和霍氏肠杆菌的分离及耐药性研究

目的对分别分离自我国两家医院的多药耐药菌株肺炎克雷伯菌10677和霍氏肠杆菌128379进行耐药机制研究。方法通过16SrDNA鉴定菌种,PCR筛查菌株携带的耐药基因,应用改良Carba NP法检测菌株产碳青霉烯酶的类型,接合转移和电转化试验验证携带IMP和NDM的质粒是否具有可转移性,全基因组测序获得细菌所携带的所有质粒序列,应用RAST、BLAST等对序列进行生物信息学分析。结果 10677和128379两株菌均产B类酶,且均携带碳青霉烯酶基因blaIMP和blaNDM。全基因测序结果显示10677和128379各包含两个分别携带blaIMP-4和blaNDM-1的质粒,分别为p10677-IMP、p10677-NDM、p128379-IMP和p128379-NDM。其中p10677-IMP、p10677-NDM和p128379-NDM可通过接合转移得到相应的接合子,p128379-IMP仅可通过电转的方式得到其电转化子。p10677-IMP和p128379-IMP均为IncN1型质粒,有三个共有的外源插入区,分别为包含有携带blaIMP-4的整合子In823b,IS1插入区,携带qnrS1基因的转座子Tn6292,除此外,p10677-IMP还包括携带fosA5基因的转座子Tn6412区以及IS26插入区。p10677-NDM和p128379-NDM为IncX3型质粒,包含两个共有的外源插入区,分别为ISKox3和携带blaNDM-1的耐药区,此外,p10677-NDM还包含一个独有的插入区ISEhe3。结论质粒p10677-IMP、p10677-NDM和p128379-IMP、p128379-NDM分别介导10677和128379多药耐药且均具有转移性,是这两株耐药菌传播的重要载体。