猪病毒性腹泻灭活疫苗保存期试验的研究

PEDV引起的产房仔猪腹泻是目前危害养猪业的主要三大传染病(ASF、PRRS、PED)之一,给养猪业造成巨大的经济损失。疫苗免疫仍然是防控PEDV的主要手段。为保证猪病毒性腹泻灭活疫苗在有效期内使用是安全、高效、稳定的,将制备的腹泻苗置2~8℃保存,选择保存0、3、6、10、13个月的疫苗进行性状及效力检验。结果表明,保存13个月内疫苗性状稳定,免疫PEDV双阴性猪,血清PEDVELISA抗体和中和抗体效价均无明显变化,且显著高于竞品苗。实际应用中,疫苗按规定条件储存,在有效期内使用是有效的。

猪病毒性腹泻灭活疫苗对仔猪保护力研究

PEDV引起的产房仔猪腹泻是目前危害养猪业的主要三大传染病(ASF、PRRS、PED)之一,给养猪业造成巨大的经济损失。疫苗免疫仍然是防控PEDV的主要手段。为了提高疫苗的保护效果,本研究小组对PEDV疫苗在病毒含量、佐剂等方面进行了大幅改进,本文总结了改进后的疫苗免疫怀孕母猪,初生仔猪从母猪乳汁获得被动保护的研究结果,表明该疫苗为产房仔猪PED的防控提供了更有效的措施。

猪流行性腹泻病毒ShT株的分离及传代培养

从广东省某猪场疑为病毒性腹泻的发病猪采集腹泻粪便样品,以PCR方法扩增出猪流行性腹泻病毒N基因后,采用细胞培养法进行病毒分离。用套式PCR、胶体金试纸卡和血清中和试验对细胞分离物进行检验,证实其为一株猪流行性腹泻病毒,命名为ShT株。将猪流行性腹泻病毒ShT株在Vero细胞上进行传代培养,观察其培养特性。结果表明,PEDV ShT株能在Vero细胞稳定传代,第20代、25代、30代病毒液的TCID50/0.1 mL分别为10-7.0、10-7.13、10-7.33。

猪细小病毒M2株在ST细胞中培养条件优化

为探索猪细小病毒M2株在ST细胞中培养的适宜条件，将其分别以同步接毒法和单层接毒法接种于ST细胞，比较其接种效果，选择更有效的方法，再对其培养条件（细胞浓度、血清种类、血清含量和收毒时间等）进行优化。结果表明，同步接种法相对于单层接种法更具优势。同步接毒，采用含量为5%的胎牛血清或6%的新生牛血清培养，细胞浓度控制在3.2×104～1.5×105个/mL内，在病毒接种后，80%以上细胞出现细胞病变时收获病毒，能获得较高病毒含量的病毒液。本研究结果为制备高效价的PPV- M2株病毒抗原提供了数据资料。

猪细小病毒CG-05株在ST细胞上的增殖规律研究

通过将猪细小病毒CG-05株同步接种于ST细胞,测定不同时间收获的病毒液的TCID50和HA,研究了CG-05株病毒在ST细胞上的增殖规律。病毒接种后镜检观察接毒细胞,在接种病毒后24 h,即可在细胞较少的区域看到非常轻微的病变。测定病毒TCID50,检测到接毒后培养17h病毒已经明显增殖;当培养到40h左右,其TCID50即接近高峰,达到10-7.2/0.1mL以上,并进入平台期;继续培养,TCID50最高可达到10-8.5/0.1mL,且直到122 h也不见明显降低。病毒HA价也出现同样的平台期,但比TCID50的平台期出现得晚,到50 h才进入平台期。结果表明,用ST细胞培养CG-05株病毒,接种病毒培养56～96 h后,如病变达到80%以上,且细胞脱落已形成20%以上空斑,此时收获病毒可获得高效价的病毒液。该研究可为制备高效价的PPV病毒抗原提供数据资料。

伪狂犬病毒TK基因缺失通用转移载体的构建及初步应用

以伪狂犬病毒为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。根据已发表的伪狂犬病毒(PRV)Ra株TK基因序列设计2对引物,用PCR方法得到同源左右臂,克隆入PUC19载体中。利用平末端连接的方法将绿色荧光蛋白(EGFP)的基因表达盒插入到缺失位点,并在下游引入1个多克隆位点,构建缺失通用转移载体PUC19TK-EGFP。用脂质体转染试剂盒将PUC19TK-EGFP和PRV-Ra株的基因组共转染BHK细胞,以EGFP为标记基因,用噬斑法得到纯化的重组病毒,命名为TK/EGFP,为研制以伪狂犬病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。

PPV培养细胞的选择及在ST细胞中的增值规律

猪细小病毒毒株在不同细胞系上的生长情况不尽相同，如不能掌握其规律，将难以生产出优质的疫苗.本研究对PPV（M2株）在PK15和ST细胞上生长情况进行了研究，得出ST细胞更适合其生长。之后将PPVM2毒株同步接种于ST细胞，用测定HA和TCID50的方法研究了其在ST细胞上增殖的基本规律。病毒在接种后24h可在细胞较稀的区域看到非常轻微的病变，病毒TCID50测定结果也表明，接毒后17h，病毒已经明显增殖。当病毒培养到约40h，其TCID50即接近高峰，并进入平台期，病毒的TCID50已达到10^7.5／0．hmL以上。继续培养，最高可达到10^8.5／0．1mL以上，且直到122h，也不见明显降低。病毒培养40-122h，不管是用Gibco血清还是用Hyclone血清培养病毒，其差异都非常小，变异系数都在5％以内。病毒HA价也出现同样的平台期，但HA价的平台期出现比TCID50的平台期出现更晚。