熟地黄水提液通过外泌体miR-29a-3p调节OVX大鼠的脂代谢

目的:探讨熟地黄(Rehmanniae Radix Praeparata,RR)水提液对双侧卵巢切除(ovariectomy,OVX)大鼠脂代谢紊乱的影响及作用机制。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠随机分为5组,分别为假手术组、OVX组、RR水提液低剂量组、RR水提液中剂量组和RR水提液高剂量组,对大鼠分别行假手术或OVX,药物灌胃12周后取材,测定大鼠的体重、腹围、血清雌二醇(estradiol,E2)、子宫重量、胰岛素(insulin,INS)和血脂四项;行肝脏HE染色和油红O染色观察脂质积累;行腹部脂肪HE染色观察脂肪体积;Western blot和RT-qPCR检测腹部脂肪过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin,IL-1β)的表达;RT-qPCR检测肥胖相关因子糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,GPNMB)、血清外泌体miR-29a-3p、腹部脂肪miR-29a-3p及其靶基因核因子I A(nuclear factor I A,NFIA)的表达;Western blot检测腹部脂肪Wnt信号通路相关蛋白的表达。结果:RR水提液显著降低OVX大鼠的腹围、INS、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、肝脏脂质积累、腹部脂肪细胞扩张、PPARγ、TNF-α、IL-1β、GPNMB和NFIA的表达,显著升高OVX大鼠的血清E2、血清外泌体miR-29a-3p和腹部脂肪miR-29a-3p水平,激活腹部脂肪Wnt信号通路。结论:RR水提液可降低OVX大鼠的血清E2、INS、LDL-C和肝脏脂质积累,抑制腹部脂肪细胞扩张和炎症反应,其作用机制可能是与血清外泌体中miR-29a-3p和腹部脂肪中miR-29a-3p的含量增加后致NFIA表达量下降,从而激活腹部脂肪组织中Wnt信号通路有关。

基于网络药理学探讨当归-牛膝防治骨关节炎的作用机制

目的运用网络药理学、分子对接、细胞验证方法,探讨当归-牛膝防治骨关节炎(Osteoarthritis,OA)的作用机制。方法从TCMSP筛选当归-牛膝的活性成分,并用Swiss Target Prediction预测其作用靶点;从GEO、GeneCards、DisGeNET、TTD数据库收集OA相关靶点。取活性成分与OA交集靶点,借助Cytoscape 3.8.2的BisoGenet构建交集靶点的蛋白相互作用(Protein-protein interaction,PPI)网络,CytoNCA拓扑分析获得PPI核心靶点,ClueGO对PPI核心靶点进行GO和KEGG富集分析。运用Autodock4.2软件对关键活性成分与核心靶点进行分子对接。构建IL-1β诱导的软骨炎症细胞模型,RT-PCR与流式细胞仪验证预测结果。结果研究显示当归-牛膝活性成分与OA的交集靶点183个,PPI核心靶点373个;PPI核心靶点的GO富集分析涉及有丝分裂细胞周期相变等调控,KEGG涉及细胞周期、泛素介导的蛋白水解等信号通路;分子对接显示槲皮素、汉黄芩素、山奈酚与关键核心靶点ESR1、RELA、MAPK1、CDKN1A、CDK2具有较好亲和力。RT-PCR显示核心药效成分可调节细胞周期信号通路靶点的mRNA表达水平,增加软骨细胞的S、G_(2)/M期比例,提高软骨指标ACAN、COL2、SOX9的mRNA表达水平。结论该研究验证了当归-牛膝药对可介导细胞周期信号通路而促使炎症软骨细胞的软骨增殖与修复,其防治OA的综合机制可涉及调节软骨细胞周期相变、促进软骨的增殖与修复、抗炎、抗凋亡等方面的多靶点、多途径机制,对临床实践具有重要指导意义。

淫羊藿水提液对去卵巢大鼠肠道菌群的影响

目的:从肠道菌群角度探索淫羊藿水提液防治骨质疏松症的作用机制。方法:采用双侧去卵巢(OVX)法建立骨质疏松模型,将21只3月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)、淫羊藿水提液给药组(EF组,0.81 g·kg^(-1)·d~(-1)),连续灌胃给药12周,收集大鼠股骨、新鲜粪便。双能X线骨密度分析仪检测大鼠股骨骨密度变化,Masson染色观察股骨骨微结构与胶原纤维变化,免疫组化检测股骨中RUNX2的表达;16S rDNA高通量测序检测分析粪便中V3-V4区菌群基因。结果:与Sham组比较,OVX组大鼠股骨骨密度显著降低(P<0.05),股骨骨小梁稀疏、断裂,RUNX2含量显著下降(P<0.05);肠道菌群多样性无显著变化,厚壁菌门丰度增加拟杆菌门和变形菌门丰度减少。与OVX组比较,EF组明显改善OVX大鼠股骨骨微结构及胶原纤维数量(P<0.01),显著增加RUNX2含量(P<0.01);肠道菌群中厚壁菌门丰度减少,拟杆菌门和变形菌门丰度增加,髌骨细菌门、瘤胃菌科_UCG-014菌属和Candidatus_Saccharimonas菌属丰度显著增加(P<0.05)。结论:淫羊藿水提液明显改善OVX大鼠骨微结构,其机制可能与调控肠道菌群丰度的变化密切相关。