雷公藤甲素诱导自噬促进人肾小管上皮HK-2细胞凋亡

目的研究自噬在雷公藤甲素(triptolide,TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2细胞凋亡中的作用。方法以HK-2细胞为研究对象,CCK-8法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内LC3荧光强度变化;Western blot检测细胞凋亡及自噬相关蛋白cleaved caspase 9、caspase 9、Bax、Bcl-2、LC3、p62和Beclin 1的表达;采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)研究自噬对TP诱导HK-2细胞凋亡的影响。结果TP降低HK-2细胞存活率,诱导细胞凋亡和自噬,降低MMP水平,增加胞内LC3Ⅱ荧光强度,上调Beclin 1表达,下调p62表达,升高cleaved caspase 9/caspase 9、Bax/Bcl-2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。此外,与TP组相比,3-MA+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值降低,p62表达上升,细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用减弱。相反,与TP组相比,Rap+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值上升、p62表达下降,细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用增强。结论TP能够诱导HK-2细胞发生自噬和线粒体途径介导的细胞凋亡,抑制HK-2细胞自噬可降低TP诱导细胞凋亡的发生,因此抑制自噬可能是减轻TP肾毒性的有效干预策略。

HPLC法同时测定养心草中没食子酸、槲皮素和山萘酚的含量

建立了高效液相色谱法同时测定养心草中没食子酸、槲皮素和山萘酚的含量。采用Hypersil C18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.2%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,流速1.0mL/min;柱温25℃;检测波长260nm。在选定色谱条件下没食子酸、槲皮素和山萘酚线性关系良好;没食子酸、槲皮素和山萘酚加标回收率分别为98.37%、99.61%、97.81%,RSD分别为2.32%、2.15%、2.20%。方法简便快速,结果准确可靠,可用于控制中药养心草的质量。

RP-HPLC法测定东北地区不同产地满山红中齐墩果酸与熊果酸

目的建立同时测定满山红中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱方法。方法采用Hyporsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.03 mol/L磷酸盐缓冲液(pH=3.0,含6 mmol/L的β-环糊精)-甲醇(13∶87)为流动相,体积流量1.0 mL/min;检测波长210 nm。结果齐墩果酸和熊果酸分别在0.026 0～0.130 mg/mL和0.087 2～0.436 mg/mL线性关系良好,平均回收率分别为99.2%(RSD=1.1%)和98.6%(RSD=1.2%)。结论该方法简便快速,结果准确可靠,各产地满山红中熊果酸的量均高于齐墩果酸。

HPLC法测定肺宝三效片中苯妥英钠的含量和体外溶出度

目的 建立测定肺宝三效片中主药苯妥英钠的含量和体外溶出度的高效液相色谱方法 ,以控制产品质量。方法 采用SinochromC1 8柱 ,以甲醇 -水 (5 7∶4 3,V V)为流动相 ,检测波长为 2 15nm ,流速为 1ml min,用苯巴比妥钠作内标物 ,以内标法定量 ;采用水为溶出介质 ,转速 10 0r min。结果 本法测定线性范围为 0 .0 0 6 0～ 0 .4 0 0 8mg L ,r =0 .9997,平均回收率为 99.6 % ,RSD为 1.3% ,苯妥英钠在 4 5min可溶出 6 0 %。结论 本法具有简便、快速、结果可靠等特点 ,可用于该制剂的质量控制。

高效液相色谱法比较不同种属和产地罗布麻叶中金丝桃苷的含量

目的建立罗布麻叶中有效成分金丝桃苷的HPLC含量测定方法，并且对不同种属和产地的罗布麻叶进行比较。方法采用Shim-Pack VP-ODS色谱柱；乙腈-四氢呋喃-0．1％醋酸（15．5：5．5：79）为流动相；流速1．0mL·min^-1；检测波长为360nm；柱温为30℃；进样量20μL。结果金丝桃苷线性范围0．01～0．2mg·mL^-1（r=0．9999）；重复性试验RSD=1．02％（n=5）；平均回收率为101．5％，RSD=2．1％；罗布麻属罗布麻叶中金丝桃苷含量在0．60～0．91％，白麻属两种含量在0．39～0．55％。结论本方法结果准确，重现性好，发现罗布麻属和白麻属两属之间金丝桃苷含量差异明显，为建立完善罗布麻叶质量标准提供依据。

苦荞黄酮类化合物的提取工艺

目的:探讨水提法提取苦荞总黄酮的工艺。方法:通过单因素实验和正交实验考察浸泡时间、料液比等对提取物总黄酮量及其含量的影响。结果:水提法最佳取得工艺为浸泡时间9 h、料液比1∶15、提取时间2 h/次、提取次数2次。结论:水提法得到的苦荞总黄酮纯度可达到10%以上。

罗布麻叶HPLC指纹图谱构建及在种属鉴别中的应用

目的建立罗布麻叶的HPLC指纹图谱。用以控制罗布麻叶的内在质量,并对罗布麻叶药材与其混淆品进行鉴别。方法采用HPLC梯度洗脱的方法建立指纹图谱,"计算机辅助相似度评价系统"软件进行数据处理.据此对不同种属的药材进行比较。结果建立的罗布麻HPLC指纹图谱方法的精密度、稳定性和重现性较好。罗布麻叶(红麻叶) HPLC指纹图谱共标定12个共有指纹峰,与白麻属样品图谱之间呈显著差异。可以依此鉴别。结论HPLC指纹图谱可以用作罗布麻叶药材的质量控制。

紫外分光光度法测定海红果中总黄酮的含量

目的建立海红果中总黄酮含量的测定方法。方法以芦丁为对照品,采用紫外分光光度法在波长500 nm处测定海红果中的总黄酮。结果芦丁在0.011-0.055 mg/ml浓度范围内线性关系良好,总黄酮平均回收率为100.35%,RSD为1.3%(n=6)。海红干果中总黄酮含量为0.276 0%。结论该方法简便、快速、准确、灵敏,可作为测定海红果中总黄酮含量的方法。

RP-HPLC法测定海红果黄酮苷元-槲皮素的含量

目的：采用RP-HPLC法测定海红果中黄酮类成分的苷元-槲皮素的含量。方法：采用Diamonsil C18柱（150mm×4．6mm，5μm）作为色谱柱；甲醇：0．05％磷酸（50：50）为流动相；流速为1、20mL／min；柱温为30℃；检测波长为360nm。结果：该法的线性范围为0．18～1．09μg，r=0．9998；平均加样回收率99．05％，RSD为0．6％；海红果中黄酮苷元的含量为0．0245％，经过提取纯化后含量提高到1．06％。结论：该法用水解后苷元-槲皮素的含量反映海红果中黄酮类成分总量，方法准确，操作简单，结果可靠。

苦荞黄酮类化合物的提取及微乳薄层色谱鉴别

苦荞又称鞑靼养麦（tartarybuckwheat），为双子叶蓼科荞麦属植物。在我国西南、北方种植广泛。资源丰富[1]。苦荞含有黄酮类化合物、多种氨基酸、多糖、不饱和脂肪酸等许多化学成分。其中黄酮类化合物具有较强的生理活性。药效学的动物实验及临床观察表明其具有较明显的降血糖、降血脂、增强免疫功能等作用。民间亦以食用苦荞防治糖尿病、高血压、高血脂等病。

高效液相色谱法测定肺宝三效片中5种组分含量及均匀度

目的:建立高效液相色谱法测定肺宝三效片中马来酸氯苯那敏、咖啡因等5种组分的含量,考察马来酸氯苯那敏、盐酸麻黄碱、咖啡因的含量均匀度。方法:采用SinochromC_(18)色谱柱,甲醇-0.05 mol·L^(-1)磷酸二氢钾-三乙胺为流动相,检测波长为215 nm,流速1.0 mL·min^(-1),柱温42℃。结果:马来酸氯苯那敏的平均回收率为101.1％,RSD为0.7％(n=9);可豆碱的平均回收率为101.3％,RSD为2.1％(n=9);茶碱的平均回收率为100.4％,RSD为3.3％;盐酸麻黄碱的平均回收率为98.7％,RSD为5.4％;咖啡因的平均回收率为101.2％,RSD为2.3％。结论:方法简便,结果准确可靠,可用于本制剂质量控制的有效方法。

高效液相色谱法测定接骨增效胶囊中柚皮苷含量

目的 :建立接骨增效胶囊中柚皮苷含量测定方法。方法 :采用高效液相色谱法 ,色谱柱为HyporsilODS柱 (4.6mm×15 0mm ,5 μm) ;流动相为甲醇 水 冰醋酸 (35∶6 5∶0 .3,pH3) ;紫外检测波长 2 83nm ;流速为 1.2ml·min-1。结果 :线性范围是 2～35 μg·ml-1;回收率为 97.0 1% ,RSD =3.11% (n =5 )。结论 :方法简便、快速、准确 ,可作为该制剂的质控方法。

中药质量控制现代化的地位和作用

本文认为应充分重视中药质量控制的研究和实施工作,沿袭过去用1-2种化学成分表征中药质量作法,从根本上违背了中医药学的整体理念和思维体系,同时也无法表征中药制剂的物质基础——化学成分群的整体性和复杂性,应高度重视中药质量控制现代化在中药现代化进程中所起的巨大作用。

满山红滴丸平喘抗炎作用的研究

目的研究满山红滴丸的平喘及抗炎作用。方法通过对豚鼠的平喘作用实验、豚鼠离体气管平滑肌试验考察满山红滴丸的平喘作用;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、大鼠棉球肉芽肿试验考察抗炎作用。结果满山红滴丸分别以28、56、112mg/kg豚鼠灌胃,能够缩短豚鼠喘息潜伏期;0.12、0.24、0.48mg/ml的浓度均能显著对抗1.67×10-5g/ml磷酸组胺引起的豚鼠气管平滑肌收缩;分别以70、140、280mg/kg小鼠灌胃,能较明显地抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀;35、70、140mg/kg大鼠灌胃,中剂量和高剂量能够显著抑制大鼠棉球肉芽肿。结论满山红滴丸有较明显的平喘和抗炎作用。

白杨素对大鼠离体肾动脉的舒张作用

目的研究白杨素对大鼠离体肾动脉的舒张作用及其机制是否涉及抑制肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙通道。方法利用微血管张力记录仪(DMT)观察白杨素对预收缩大鼠肾动脉血管环的肌源性反应;利用全细胞膜片钳电生理学实验方法,观察白杨素对大鼠离体肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙电流的作用。结果 1白杨素浓度依赖性的舒张60 mmol/L KCl或10-5 mol/L去氧肾上腺素(PE)预收缩的大鼠肾动脉血管环,其最大舒张幅度分别为88.99%和67.47%,RC50值分别为26.25μmol/L和51.68μmol/L。2白杨素(浓度为RC50值)可抑制大鼠肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙电流,使其I-V曲线非平行上移;给予0 mV单电压刺激时,白杨素(浓度为RC50值)使大鼠肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙电流值降低45.43%。结论 1白杨素浓度依赖性舒张60 mmol/L KCl或10-5 mol/L PE预收缩的大鼠肾动脉血管环;2白杨素抑制大鼠肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙电流,使其I-V曲线非平行上移。

白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内药动学的影响

目的:研究白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内的药物动力学的影响。方法:将SD大鼠随机分为两组:阿霉素组,阿霉素+白花前胡水提物组,采用HPLC法测定阿霉素在不同时间点的血药浓度,3P97程序计算药动学参数。结果:阿霉素+白花前胡水提物组与阿霉素组的药动学参数相比,AUC显著增大(P<0.05),同时CL显著减小(P<0.05),其余参数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:白花前胡水提物可使阿霉素在大鼠体内的血药浓度增加,提高其生物利用度。

葛根素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的影响

葛根素是从豆科植物野葛或甘葛根的干燥根中提取的单体,其化学名为8-β-D-葡萄吡喃糖-4,7-二羟基异黄酮。据研究报道,葛根素具有多种药理学活性,包括降低血压[1]、舒张大鼠冠状动脉[2]、改善急性心肌缺血[3]、清除氧自由基[4]等,但关于葛根素对大鼠肾动脉的作用却未见报道。本实验主要研究葛根素对大鼠离体肾动脉的肌源性作用,葛根素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BKCa）电流的作用及其与过氧化氢（H2O2）的关系。

满山红滴丸的体外抗菌实验

目的测定满山红滴丸的体外抗菌活性。方法对满山红滴丸对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺菌等9种细菌的最低杀菌浓度(MBC)进行测定。结果满山红滴丸对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、福氏志贺菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、腐生葡萄球菌、乙型溶血性链球菌9种细菌都有较强的杀灭作用,MBC分别为2.18、4.36、17.44、4.36、2.18、8.72、4.36、8.72和34.875mg·mL-1。结论满山红滴丸对所选菌种有较广泛的抗菌活性。

盐酸特拉唑嗪胶囊溶出度研究

目的建立了盐酸特拉唑嗪胶囊剂溶出度的测定方法。方法采用转蓝法,500ml盐酸溶液(9ml→1000ml)为溶出介质,转速:100r/min,45min取样,245nm波长处分光光度法检测。结果盐酸特拉唑嗪的溶出度含量在2.0-6.0μg/ml(r=0.9995,n=5)范围内呈良好的线性关系,平均回收率100.9%,RSD为1.4%。结论采用紫外分光光度法测定盐酸特拉唑嗪胶囊溶出度操作简便,结果准确,能够用于盐酸特拉唑嗪胶囊剂的质量控制。

抗转化生长因子β_1抗体对大鼠周围神经瘢痕中成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

周围神经损伤后修复是医学上的一大难题,由于周围神经解剖与功能上的特殊性,即使使用显微外科技术缝合,功能恢复一般只有70％左右.如何提高神经再生的速度与质量,寻找新的修复方法仍然是日前迫切需要解决的问题[1].神经吻合口处成纤维细胞大量增殖,导致组织纤维化和瘢痕形成是影响神经损伤后再生的主要因素.因此,控制损伤处成纤维细胞的过多增殖有利于神经的恢复.多种生长因子都能调控成纤维细胞的生物学行为,其中,转化生长因子β1（TGF-β1）被认为是伤口细胞外基质积聚、收缩和异常修复的关键性调控因素,在瘢痕形成过程中具有重要的作用.转化生长因子β1抗体（抗TGF-β1抗体）可以中和体内的TGF-β1,阻滞其发挥生物学效应.本研究建立了大鼠周围神经损伤模型,分离其中的成纤维细胞,测定了抗TGF-β1抗体对成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白的含量.