膜联蛋白A2在病毒感染中的作用研究进展

膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一类由Ca 2+调控的具有磷脂结合特性的膜联蛋白,与多种细胞生理过程和临床疾病相关;越来越多的研究证实ANXA2在多种病毒复制周期的不同阶段发挥着重要作用。对ANXA2在病毒感染过程中的作用进行综述,为阐明ANXA2与病毒感染之间的相互作用提供参考。

牛轮状病毒VP4、VP6、VP7基因分子生物学研究进展

轮状病毒是引起幼龄动物急性胃肠炎和腹泻的主要病因.犊牛感染轮转病毒会对集中饲养的牛群造成严重的经济损失,制约养牛产业的发展.轮状病毒的11个节段基因分别编码了6种结构蛋白(VP1-VP4,VP6,VP7)和6种非结构蛋白(NSP1-NSP6),其中VP4和VP7与病毒的毒力密切相关,分别决定了病毒的P型和G型.VP6是病毒的特异性抗原,也是决定轮状病毒分组的重要蛋白.通过综述VP4、VP6、VP7的分子特征及研究进展,对目前开发的疫苗产品进行了简述.

碳酸饮料对雄鼠生长发育和睾酮分泌作用的研究

将100只28日龄健康雄性小白鼠随机分为5组(n=20),COC-1和COC-2自由饮用50%和100%可口可乐,PEP-1和PEP-2自由饮用50%和100%百事可乐,CG为空白对照,实验持续15 d。于第3、5、7、10、13和15 d随机从每个组抓取3只小鼠断颈采血,4 000 r/min离心10min,分离血清,无菌采集内脏器官,分别称重;ELISA法测定血清睾酮含量。结果表明至实验第7 d,COC-2和PEP-2组小鼠的体重均高于CG(P<0.01,P<0.05),15 d时,实验组小鼠体重均大于对照组(CG);第10 d时COC-1日增重明显低于PEP-2和CG,第15 d各实验组日增重均略小于对照组;第7 d时,COC-1、COC-2和PEP-2两侧睾丸平均重明显高于CG(P<0.05),到15d实验组睾丸重均大于对照组(CG);PEP-2胃质量在第15 d大于其余4组;第7 d时COC-1、COC-2和PEP-2肾脏质量明显高于PEP-1(P<0.05);在实验期间各组的心、肝、脾和肺脏均无显著差异;第10d时PEP-1,PEP-2血清睾酮含量显著高于COC-1和CG(P<0.05),且COC-2和PEP-2在15 d明显高于CG(P<0.05)。短时期饮用高浓度可口可乐和百事可乐可以促进小鼠生长,轻度促进睾丸发育,增加血清睾酮含量。

TMEM43基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

根据Genbank中登录的TMEM43基因序列设计并合成引物,建立了TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.利用该方法构建标准曲线,并对灵敏性及重复性进行验证.最后对随机选取的几种人源细胞及不同物种细胞进行检测.结果显示,建立的TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法线性关系好,以标准品构建的标准曲线相关系数R2=1;灵敏性比普通PCR高10倍,能成功检出不同细胞中TMEM43表达量.表明建立的TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法可用于TMEM43基因表达的检测及定量分析,可为临床TMEM43相关疾病的检测及分析提供实验依据.

人源化IGF-Ⅰ基因的人工合成、重组与表达

为了实现人源化胰岛素样生长因子Ⅰ(human insulin-like growth factors-Ⅰ,hIGF-Ⅰ)基因在大肠杆菌中的高效表达,了解IGF-Ⅰ基因结构与功能的关系,探索人工制备的hIGF-Ⅰ在临床治疗疾病上的应用,实验参照GenBank中人IGF-Ⅰ氨基酸序列并进行密码子优化,然后人工合成这条基因并将克隆至pUC57载体上.构建重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,转化大肠杆菌BL21菌株,进行不同诱导条件的优化,SDS-PAGE电泳确定最佳诱导条件,并利用建立hIGF-Ⅰ的间接ELISA检测方法分析表达产物活性.结果表明,获得重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,并在大肠杆菌中实现与GST蛋白的融合可溶性表达.最佳诱导条件OD600值为0.8、IPTG浓度为0.5 mmol/L,表达蛋白的浓度为2.811 mg/mL,且产物具有抗原活性.说明人工制备的hIGF-Ⅰ与天然的hIGF-Ⅰ生物活性有部分相同,在基础研究和药物开发方面可作为替代物进行研究.

跨膜蛋白43的研究进展

跨膜蛋白43(TMEM43)是一种在物种间高度保守、定位在内核膜及内质网中且有一个大的亲水域的核膜蛋白。临床研究及流行病学调查发现,TMEM43基因的突变可导致心律失常性右心室心肌病(ARVC)和金刚砂-德雷福斯肌营养不良(EDMD)等疾病。目前,对此病的诊断及治疗尚存在一定的困难。此外,TMEM43与其他跨膜蛋白亦存在相互作用,但其功能和相关致病机制知之甚少。就TMEM43相关疾病及其与相关蛋白之间的作用进行综述,为后期研究TMEM43的功能及疾病治疗方面提供参考和帮助。

促卵泡激素受体结合抑制剂抑制小鼠卵巢发育

目的探讨不同浓度的促卵泡激素受体结合抑制剂(FRBI)对小鼠卵巢发育、生殖激素分泌及其蛋白表达的影响。方法给FRBI组小鼠分别肌肉注射20、30和40 mg/kg FRBI;促卵泡激素(FSH)组注射10 IU/kg FSH;对照组(CG)注射0.2 mL 0.9%氯化钠溶液,每组均连续注射5 d。精确称量每只小鼠体质量和双侧卵巢质量;测定卵巢组织切片中皮质厚度(OCT)和次级卵泡形态大小;ELISA测定血清FSH浓度;Western blot检测卵巢FSH受体(FSHR)表达。结果实验第15天起,FRBI组小鼠卵巢质量低于CG和FSH组(P<0.05),以FRBI-30 mg组小鼠卵巢质量最低;FRBI组OCT、次级卵泡最大纵径(MLD)和最大横径(MTD)低于CG组和FSH组(P<0.05),FRBI-40 mg组小鼠卵巢的MLD和MTD值最低;第15天时,FRBI-30 mg组小鼠血清FSH的浓度最低;随着FRBI注射剂量的增加,卵巢中FSHR表达水平逐渐降低,FRBI组的FSHR蛋白水平明显低于FSH组(P<0.05)。结论 FRBI能抑制卵巢和卵泡发育,降低血清FSH浓度,下调卵巢FSHR蛋白表达水平。

褪黑素生物学作用的研究进展

褪黑素是由松果体分泌的一种吲哚类激素,通过神经免疫内分泌网络对机体产生重要的作用.大量研究发现褪黑素具有广泛的生理作用,如促进睡眠、抗衰老、免疫调节、神经保护、抗肿瘤、对其他内分泌的调节、促进细胞生长等多种功能.

不同培养条件对绵羊卵母细胞体外成熟和凋亡的影响

目的,探讨不同温度和不同培养时间对绵羊卵母细胞体外培养,成熟和凋亡的影响,选择合适的温度和培养时间为绵羊卵母细胞进行体外成熟提供技术支持.方法：在绵羊死亡30 min之内取出卵巢4~6 h带回实验室,切割法收集卵母细胞.在5%CO2、饱和湿度等条件相同情况下,分别在36.0℃、37.0℃、37.5℃、38.0℃、38.5℃、39℃下培养24~26 h.实验中获得的结果数据,采用t检验方法进行差异显著性分析.结果：26 h的成熟率高于其他4个时间的成熟率,在培养22 h到26 h过程中,随着培养时间的增加,卵母细胞的成熟率呈增高.但是在26 h过后,随着培养时间增加,卵母细胞的成熟率呈递减趋势,至30 h卵母细胞的成熟率明显低于22 h的成熟率.38.5℃时卵母细胞的成熟率最高,36℃是卵母细胞的凋亡率最高.卵母细胞成熟率的整体趋势是随着温度的上升呈正相关.

脑心肌炎病毒VP2基因真核表达质粒的构建

目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检测EMCV VP2基因mRNA的转录情况,免疫组化法及Western blot法检测EMCV VP2蛋白的表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pcDNA3. 1-VP2构建正确。EMCV VP2基因m RNA及蛋白可在CHO细胞中正常转录及表达,且EMCV VP2蛋白可与兔抗EMCV阳性血清发生特异性结合,主要分布于CHO细胞膜上。结论成功构建了重组质粒pcDNA3. 1-VP2,并有效地在CHO细胞中进行了表达,为EMCV VP2基因体外表达及其功能的进一步研究奠定了基础。

人源跨膜蛋白43(TMEM43)的检测、细胞内定位及体外真核表达

为探究人源跨膜蛋白43(TMEM43)基因含量、定位分布及体外真核表达情况,利用RT-PCR及Western blot方法分别检测内源MRC-5和HEK293细胞内TMEM43基因及其蛋白表达情况,采用间接免疫荧光实验进一步分析其在MRC-5细胞内的分布;构建重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TMEM43,转染至HEK293细胞内检测外源TMEM43在HEK293细胞内的基因和蛋白表达情况。结果显示,基因水平TMEM43在MRC-5细胞内的表达明显高于HEK293细胞,蛋白水平仅能检测到MRC-5细胞内TMEM43的表达。重组表达质粒pcDNA3.1-EGFP-TMEM43转染HEK293细胞后,基因水平TMEM43表达显著升高, Western blot可检测到转染后细胞内TMEM43蛋白成功表达。结果表明,不同细胞表达TMEM43含量存在差异,肺来源细胞内TMEM43的表达明显高于肾来源的细胞;构建的重组载体pcDNA3.1-EGFP-TMEM43可成功转染HEK293细胞并表达。该研究为TMEM43结构及功能、与疾病相关机理的进一步探究提供了实验依据。