目的以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescen t prote in,EGFP)基因为标记基因,探索门静脉注射法实施肝细胞基因转移并获取基因修饰原代工程肝细胞(gene m od ified prim ary eng ineering hepatocypte,GM PEH)的新方法。方法W...目的以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescen t prote in,EGFP)基因为标记基因,探索门静脉注射法实施肝细胞基因转移并获取基因修饰原代工程肝细胞(gene m od ified prim ary eng ineering hepatocypte,GM PEH)的新方法。方法W istar大鼠70%切肝建立肝再生模型,术后24h肝隔离门静脉注射脂质体-质粒DNA复合物(lipp fectam ine-pEGFP-N 1DNA com p lexes,lipop lexes)转绿色荧光蛋白(green fluorescen t prote in,GFP)基因至肝细胞,对照组注射生理盐水(N S)。转染后15天(分2组,每组5只大鼠:切肝并于门静脉注射lipop lexes组,L;切肝并于门静脉注射N S组,N)均以胶原酶消化、Perco ll液梯离心法获取纯化细胞悬液;以N S组为对照并以GFP为荧光标记物,用流式细胞仪(flow cytom etry,FCM)分析实验组肝细胞的转染率。结果FCM分析L组的平均转染率(%)为3.40±2.09(p<0.05)。结论肝再生模型L ipop lex门静脉途径灌注转染,可获得稳定的EGFP基因表达率。肝隔离门静脉注射法肝细胞基因转移可高效获取基因修饰的原代工程肝细胞。展开更多
文摘目的以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescen t prote in,EGFP)基因为标记基因,探索门静脉注射法实施肝细胞基因转移并获取基因修饰原代工程肝细胞(gene m od ified prim ary eng ineering hepatocypte,GM PEH)的新方法。方法W istar大鼠70%切肝建立肝再生模型,术后24h肝隔离门静脉注射脂质体-质粒DNA复合物(lipp fectam ine-pEGFP-N 1DNA com p lexes,lipop lexes)转绿色荧光蛋白(green fluorescen t prote in,GFP)基因至肝细胞,对照组注射生理盐水(N S)。转染后15天(分2组,每组5只大鼠:切肝并于门静脉注射lipop lexes组,L;切肝并于门静脉注射N S组,N)均以胶原酶消化、Perco ll液梯离心法获取纯化细胞悬液;以N S组为对照并以GFP为荧光标记物,用流式细胞仪(flow cytom etry,FCM)分析实验组肝细胞的转染率。结果FCM分析L组的平均转染率(%)为3.40±2.09(p<0.05)。结论肝再生模型L ipop lex门静脉途径灌注转染,可获得稳定的EGFP基因表达率。肝隔离门静脉注射法肝细胞基因转移可高效获取基因修饰的原代工程肝细胞。