体外诱导人脐带间充质干细胞向汗腺细胞分化及其信号通路研究

目的观察人脐带问充质干细胞（UCMSC）向汗腺细胞（SGC）分化的能力以及细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在分化过程中的作用。方法（1）体外分离培养UCMSC和SGC，通过检测CD14、CD29、CD34、CD44、CD45、CD105、细胞角蛋白7（CK7）、CK19、癌胚抗原（CEA）表达情况鉴定UCMSC，检测CK19、CEA表达情况鉴定SGC。（2）制作热损伤SGC模型，按随机数字表法将铺于Transwell培养板下层的UCMSC分为4组，均用汗腺培养液培养：对照组，培养液中不添加刺激因素；热损伤组，将热损伤SGC（每孔1×10^4个）接种于Transwell培养板小室与UCMSC间接共培养；热损伤＋EGF组．在热损伤组处理条件基础上，培养液中添加50ng／mLEGF；热损伤＋PD98059组，在热损伤组处理条件基础上，培养液中添加10nmol／mL ERK信号通路特异性抑制剂PD98059。1周后，流式细胞仪检测各组UCMSC中CK7、CK19表达率，免疫组织化学法检测CK19、CEA表达情况并计算CEA表达牢，蛋白质印迹法检测磷酸化ERK（pERK）表达水平。对数据行多组间单因素方差分析。结果（1）UCMSC高表达CD29、CD44、CD105，少揎表达或不表达CD14、CD34、CD45、CK7、CK19、CEA；SGC中CEA和CK19均呈阳性表达，证实获得的2种细胞均为纯化细胞。（2）诱导培养1周后，热损伤组与热损伤＋EGF组UCMSC巾CK7、CK19、CEA阳性表达率及pERK表达水平分别为（6．4±0．7）％、（5．7±0．3）％、（7．4±1．0）70、0．790±0．049与（14．3±1．0）％、（12．6±1．1）％、（17．6±2．3）％、1．200±0．032，均显著高于对照组的（2．2±1．5）％、（2．2±0．7）％、（3．3±0．7）％、0．640±0．026，F值分别为78．49、139．36、87．13、191．74，P值均小于0．01；热损伤＋EGF组UCMSC各指标水平照著高于热损伤组（F值为50．14～145．47，P值均小于0．01）；热损伤＋PD98059组与对照组UCMSC各指标水平相近（F值为0、00～0．13，P值均大于0．05）。结论UCMSC在热损伤SGC的微环境巾能够分化为SGC，ERK通路参与了UCMSC向汗腺细胞分化的过程。