柯萨奇B1病毒VP1基因DNA免疫的研究

目的 构建柯萨奇 B1病毒 (CVB1)的 DNA疫苗 ,评价其免疫学性状。方法 将重组质粒 p MD18-T- VPl中的 CVB1VP1基因亚克隆至 p CEP4载体 ,构建真核表达系统 p CEP4 - VP1作为 DNA疫苗 ,经酶切、PCR和测序鉴定后转染至 He L a细胞 ,用间接免疫荧光法检测 CVB1抗原的体外表达。提纯制备 p CEP4 - VP1接种 BAL B/ C小鼠 ,取血清用 EL ISA法检测抗 CVB1Ig M和 Ig G,用 51 Cr释放法测定 CTL反应。结果 酶切、PCR和测序证明 VP1DNA疫苗构建正确 ;转染 p CEP4 - VP1的 He L a细胞中可见到荧光标记 ,提示表达了 VP1蛋白 ;接种 p CEP4 - VP1的小鼠可检测到抗 CVB1的 Ig M和 Ig G,并能产生较强的特异性 CTL反应。结论 p CEP4 -VP1可作为

柯萨奇B1病毒VP1基因片段原子力显微镜成像分析

用原子力显微镜(AFM)观察线性DNA并探讨其成像条件。用RT-PCR技术扩增柯萨奇B1病毒VP1基因DNA片段,纯化回收后配制成含和不含1mmol/LMgCl2的水溶液,DNA终浓度为100μg/ml。分别取20μl滴加在新鲜解理的云母片上,吸附1min,用滤纸吸去残液,氮气吹干,在室温下采用MultiModeAFMNanoscopeⅢa的敲击模式成像。同时比较新制备的和多次使用过的探针所获得图像的质量,对两种探针进行扫描电镜观察。电泳证明获得了0.83kb的VP1基因DNA线性片段。Mg2+存在时,DNA在云母片上吸附延展较好,所获图像质量优于无Mg2+时。新制备的探针较多次使用过的探针所获图象分辨率更高。DNA分子的表观宽度为18±2.9nm,高度为0.8±0.2nm。说明AFM能以高分辨率直接观察DNA分子,Mg2+的存在和高质量的探针有助于获得理想的图象。

原子力显微镜在生物学研究中的应用进展

原子力显微镜(atomicforcemicroscope,AFM)具有原子级分辨率,能够在生理条件下对生物样品进行观察。本文综述了AFM的原理及技术要点,举例说明了它在核酸、蛋白质、微生物及细胞等领域的应用进展。相信AFM必将在生物学研究中起到越来越重要的作用。

柯萨奇B1病毒VP1基因在大肠杆菌中的表达

目的 在大肠杆菌中表达柯萨奇 B1(CVB1)病毒 VP1蛋白。方法 用限制性酶切方法将 CVB1VP1基因从 p MD18-T-VP1上切下 ,连接至 p QE3 0构建原核表达系统 p QE3 0 -VP1。经酶切和 PCR验证后转化至大肠杆菌 BL2 1(DE3 ) ,用 IPTG诱导目的基因表达。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western-blot检测 VP1蛋白的表达。结果 酶切、PCR证明构建的原核表达系统携带方向正确的 CVB1VP1基因。SDS-PAGE和 Western-blot实验均可于 3 3 .0 k Da处见到目的条带。结论