软脂酸对INS-1胰岛细胞TXNIP表达的影响

目的:2型糖尿病患者体内持续高水平的游离脂肪酸会损伤胰岛β细胞。硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)是内源性的硫氧还蛋白(Trx)抑制蛋白。已知高糖刺激可引起TXNIP表达上调,促进胰岛β细胞凋亡,而游离脂肪酸对TXNIP的影响尚不明确。本实验旨在研究软脂酸对TXNIP表达的影响及机制。方法:在使用不同浓度和不同作用时间的软脂酸充分预实验的基础上,确定使用添加0.5 mmol/L软脂酸的RPMI-1640培养基培养INS-1胰岛细胞24 h,测定细胞TXNIP的表达变化、细胞凋亡情况及可能的调控因子变化。结果:与对照组相比,软脂酸组TXNIP的mRNA水平和蛋白表达量均明显增高(P<0.01),软脂酸组凋亡明显高于对照组(P<0.01)。软脂酸组的核因子κB(NF-κB)蛋白磷酸化水平升高(P<0.01),使用不同的NF-κB抑制剂PDTC和SN50均可阻断软脂酸诱导的TXNIP表达上调。结论:饱和脂肪酸软脂酸可通过增加NF-κB磷酸化而上调TXNIP的表达,从而诱导INS-1胰岛细胞凋亡。

TNF-α促进大鼠胰岛β细胞系凋亡

目的观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胰岛细胞凋亡及TXNIP表达的影响。方法体外培养大鼠胰岛细胞系INS-1细胞,用CCK-8检测TNF-α(0、1、5、10和20 mg/L)的细胞存活率;确定TNF-α作用的最佳浓度和时间后,给予TNF-α(5 mg/L,24 h)处理INS-1细胞;用CCK-8与流式细胞术检测胰岛细胞的存活和凋亡;real-time PCR检测TXNIP和ChREBP mRNA表达;Western blot法检测TXNIP、ChREBP和FOXO1蛋白的表达。结果TNF-α呈浓度依赖性降低INS-1细胞存活率(P<0.05),并诱导细胞凋亡;与对照组相比,TXNIP和ChREBP mRNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05);FOXO1蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 TNF-α诱导INS-1胰岛细胞凋亡,加重细胞损伤。

银屑病皮损间充质干细胞对人角质形成细胞增殖及凋亡的影响

目的研究银屑病皮损间充质干细胞(dermis mesenchymal stem cells,DMSCs)对正常人表皮角质形成细胞(human normal keratinocytes cells,KCs)增殖及凋亡的影响。方法体外分离培养DMSCs和KCs,设3个组:KCs单纯培养组、健康对照组(正常DMSCs+KCs)和试验组(皮损DMSCs+KCs)。首先用皮损DMSCs上清孵育KCs,用CCK-8检测细胞存活率;再用Transwell培养96 h后,用CCK-8检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中转化生长因子(TGF)-β1浓度。结果共培养组与KCs单纯组相比细胞增殖和凋亡均增多;与健康对照组相比,患者组角质细胞增殖增多,凋亡减少,TGF-β1水平下降。结论银屑病皮损DMSCs可以促进角质细胞的增殖,同时促细胞凋亡能力减弱,可能与TGF-β1水平分泌异常有关。

TXNIP过表达对INS-1细胞凋亡通路的影响

目的本研究使用腺病毒转染技术，观察在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞过表达TXNIP是否引起细胞凋亡。并对TXNIP介导细胞凋亡的通路进行初步分析。方法将处于对数生长期在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞分为3组，即正常培养组、空病毒（Ad-eGFP）组和TXNIP过表达（Ad-TXNIP-eGFP）组，均于转染48h后收集细胞进行指标测定。结果转染细胞48h时病毒转染率达到高峰，并且荧光蛋白表达量基本一致。同Ad-eGFP组相比，Ad-TXNIP-eGFP组TXNIP mRNA（38．68±7．35比0．73±0．39，P〈0．01）和蛋白表达量（1．28±0．25比0．62±0．16，P〈0．01）均明显增高，说明转染及TXNIP过表达成功。与Ad-eGFP组相比，Ad-TXNIP-eGFP组Caspase-3相对活性明显增高[（3．823±0．238）nmol·h^-1·mg^-1比（0．956±0．107）nmol·h^-1·mg^-1。P〈0．01]；反映下游不同通路的Caspase-8[（132．10±27．33）pg／ml比（81．01±15．34）pg／ml，P〈0．01]、Caspase-9[（290．76±43．15）pg／ml比（s8．94±14．68）pg／ml，P〈0．01]和Caspase-12活性[（266．96±18．50）pg／ml比（52．05±6．13）pg／ml，P〈0．01]均明显增高。结论单纯过表达TXNIP可以引起正常糖脂浓度培养下INS-1细胞凋亡。线粒体凋亡途径、死亡受体活化途径和内质网应激介导途径均参与了TXNIP引起的INS-1细胞凋亡的发生。

寻常性银屑病患者皮损角质形成细胞的能量代谢水平检测

目的比较寻常性银屑病患者皮损与正常对照角质形成细胞(keratinocytes,KCs)的糖酵解和线粒体有氧呼吸水平,揭示患者能量代谢水平是否异常,进一步探讨银屑病可能的发病机制。方法分离、培养寻常性银屑病患者皮损与健康人皮肤KCs,采用Seahorse XF24细胞能量代谢分析仪检测细胞的糖酵解和线粒体有氧呼吸水平。结果与正常对照相比,寻常性银屑病患者皮损KCs的整体糖酵解水平出现异常升高,糖酵解代谢发生紊乱;寻常性银屑病患者皮损KCs的线粒体有氧呼吸水平与正常对照相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论寻常性银屑病患者皮损的KCs能量代谢水平出现紊乱,过度依赖于糖酵解代谢,快速产生大量的ATP,从而为其过度增殖提供能量和原料支持。