壮药扶正方通过改善Lewis肺癌CD8^(+)T细胞耗竭提高PD-L1抑制剂疗效的机制研究

目的探讨壮药扶正方对小鼠肺癌浸润的CD8^(+)T细胞耗竭以及对PD-L1抑制剂疗效的影响,并明确其中可能的机制。方法MTT、平板克隆检测壮药扶正方对小鼠肺癌LLC细胞增殖能力影响;流式细胞术检测CD8^(+)T的比例以及检测PD-L1表达水平,并利用Western blot检测蛋白水平表达初步探讨相关机制;最后通过动物体内实验验证壮药扶正方和PD-L1抑制剂协同作用。结果壮药扶正方可抑制小鼠肺癌LLC细胞增殖能力;在小鼠体内实验中,壮药扶正方和PD-L1抑制剂可起到协同抗肿瘤作用;壮药扶正方延缓CD8^(+)T细胞的耗竭情况,并抑制PD-L1表达;壮药扶正方可降低PI3K/AKT通路活性。结论壮药扶正方可延缓CD8^(+)T细胞耗竭和抑制PD-L1表达,增强PD-L1抑制剂治疗肺癌的疗效,机制可能与降低PI3K/AKT信号通路有关。

人弥漫大B细胞淋巴瘤阿霉素耐药细胞株的建立及其生物学特性研究

目的:建立人弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)阿霉素(ADM)耐药细胞株,为研究DLBCL耐药机制提供模型。方法:以体外低浓度梯度递增法诱导筛选人DLBCL耐ADM细胞株Pfeiffer/ADM。在显微镜下观察细胞形态变化,绘制生长曲线,计算倍增时间。CCK-8法检测Pfeiffer/ADM对不同药物的耐药系数(RI)及脱药1个月后的耐药稳定性。在含补体的血清中,CCK-8法比较两细胞株对利妥昔单抗(RTX)介导的补体依赖性细胞毒性(CDC)的差别,荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两株细胞中多药耐药基因1(MDR1)mRNA相对表达量。结果:经过约7个月的诱导,成功构建耐ADM细胞株Pfeiffer/ADM;显微镜下Pfeiffer和Pfeiffer/ADM细胞形态无明显差别,亲代加药后死亡细胞更多,而耐药株生长依旧良好;Pfeiffer和Pfeiffer/ADM的倍增时间分别为(32.28±1.18)h和(31.41±2.03)h,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);通过CCK-8法测得Pfeiffer/ADM对ADM、依托泊苷(VP-16)和长春新碱(VCR)的耐药指数(RI)分别为12.87、13.18、16.95;脱药1个月和冻存复苏后,Pfeiffer/ADM依旧能保持耐药性,其对ADM的IC50值分别为0.52mg/L、0.49mg/L;两细胞株对于不同浓度的RTX介导的CDC效应无明显差别(P>0.05);Pfeiffer/ADM细胞的MDR1mRNA相对表达量明显高于Pfeiffer细胞株(P<0.05)。结论:成功建立具有多药耐药性的DLBCL Pfeiffer/ADM细胞株,化疗耐药的Pfeiffer/ADM细胞与RTX无交叉耐药性,该细胞是研究DLBCL获得性耐药的机制和逆转耐药的理想模型。

不同降水情景下广州市人地耦合系统脆弱性评价

脆弱性评价为城市管理决策者制订适应行动提供科学依据,根据脆弱性范围图(vulnerability scoping diagram,VSD)框架建立评价指标体系,基于系统动力学对广州市人地耦合系统2015—2020年间不同经济发展与降水条件进行动态仿真,结果表明:按现状发展的情景1中,预测年(2020年)脆弱性值较基准年(2014年)上升39. 67%;经济按现状发展叠加降水缓慢增长的情景2中,城市适应能力未能及时提升,城市更脆弱;经济高增长、降水较大和适应措施较弱的情景3中,脆弱性值较基准年(2014年)上升42. 78%,系统向着不利方向发展;在情景4中对情景3进行调控,增加45%防洪投资可使脆弱性值降低3. 22%,在经济增长、损失减少、防灾投入中取得平衡。

利妥昔单抗与依鲁替尼对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡协同作用研究

目的近年来发现依鲁替尼是B细胞恶性肿瘤的新型靶向药物,利妥昔单抗联合新药依鲁替尼对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)的研究逐步展开,本研究探讨利妥昔单抗与依鲁替尼对DLBCL细胞系Farage增殖及凋亡影响的协同作用。方法不同浓度的单药利妥昔单抗和单药依鲁替尼处理Farage细胞24、48和72h后,采用CCK8法检测细胞增殖抑制率。15μmol/L依鲁替尼处理Farage细胞48h后,采用RT-PCR法检测凋亡相关因子mRNA的表达变化。含人补体的培养条件下,1μg/mL利妥昔单抗联合10μmol/L依鲁替尼同时处理Farage细胞48h后,采用CCK8法检测增殖抑制率,采用流式细胞术检测凋亡率。结果利妥昔单抗在不含人补体的培养基中对Farage细胞增殖抑制作用不明显,在含人补体的培养基中有明显增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性。依鲁替尼在含或不含人补体的培养条件下对Farage细胞均有明显增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性,2种条件下的增殖抑制率差异无统计学意义(F=0.978,P=0.329),15μmol/L依鲁替尼作用Farage细胞48h时,Fas(1.63±0.09)、Caspase-8(1.90±0.11)和Caspase-3(2.20±0.11)mRNA相对表达量均高于空白组(1.00±0.00)。在含人补体的培养基中,1μg/mL利妥昔单抗联合10μmol/L依鲁替尼同时处理Farage细胞48h后,联合组增殖抑制率为(57.06±1.48)%,高于依鲁替尼单药组(33.83±3.39)%和利妥昔单抗单药组(26.92±2.74)%,差异有统计学意义,F=87.403,P<0.001。联合组的凋亡和坏死率(44.30±2.20)%高于利妥昔单抗单药组(21.73±2.00)%和依鲁替尼单药组(17.44±1.60)%,且利妥昔单抗单药组和依鲁替尼单药组均高于空白组(2.32±0.21)%,差异均有统计学意义,F=327.205,P<0.001。结论利妥昔单抗可通过CDC效应引起DLBCL细胞凋亡坏死及增殖抑制,依鲁替尼可能通过上调Fas、Caspase-3和Caspase-8基因的表达,促使DLBCL细胞凋亡和增殖抑制,利妥昔单抗联合依鲁替尼对DLBCL细胞的增殖抑制和凋亡坏死作用明显强于单药利妥昔单抗或依鲁替尼。