穿山龙总皂苷对胶原性关节炎大鼠炎性细胞因子的影响

目的观察穿山龙总皂苷(total saponin from Rhizoma Dioscorea nipponica,TSRDN)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清中炎性细胞因子的影响,初步探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)可能的作用机制。方法建立CIA大鼠模型。于初次免疫后第14天,将造模成功的大鼠随机分为CIA模型组,穿山龙总皂苷高、中、低剂量组,雷公藤组。其中穿山龙总皂苷高、中、低剂量组分别经胃灌服100 mg.kg-1.d-1,50 mg.kg-1.d-1、25 mg.kg-1.d-1剂量的穿山龙总皂苷,雷公藤组灌服12 mg.kg-1.d-1剂量的雷公藤多苷,正常对照组、CIA模型组灌服等体积溶媒。用药后21 d,记录各组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数;测定血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平;观察关节滑膜病理变化。结果经穿山龙总皂苷灌胃治疗21 d后,与模型组相比,治疗组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数有降低趋势(P>0.05),大鼠滑膜增生减轻,炎细胞浸润减少,软骨及骨组织侵蚀破坏减轻,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.01)。结论穿山龙总皂苷能明显降低CIA大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平,减轻滑膜组织的病理损伤,表明其对治疗类风湿关节炎有一定作用。

胶原性关节炎大鼠炎性细胞因子的动态观察

目的通过对胶原性关节炎(CIA)大鼠多个细胞因子的动态观察,了解其变化规律,为阐明RA发病机制及CIA大鼠的模型研究提供实验依据。方法建立CIA大鼠模型。分别于初次免疫后第0、10、20、30、40、50、60天记录大鼠的体重,测量大鼠后足体积和足垫厚度,计算关节炎指数;HE染色光镜下观察关节滑膜病理变化;采用ELISA方法检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平变化。结果造模成功后的CIA大鼠14 d左右出现炎症反应,30 d左右达高峰,以后炎症逐渐减轻。与同期空白对照组大鼠相比,CIA大鼠血清中TNF-α水平10 d明显升高(P<0.01),IL-1β和IL-6水平20 d明显升高(P<0.05),三者水平均30 d达高峰(P<0.01),以后持续存在,但水平有所降低。结论 CIA大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6在RA的整个病程中一直发挥着重要作用。

穿龙薯蓣皂苷元对CIA小鼠脾脏Treg细胞的影响

目的:在胶原性关节炎小鼠模型中初步探讨穿龙薯蓣皂苷元对其脾脏Treg细胞的影响。方法:通过将鸡Ⅱ型胶原乳剂与弗氏完全佐剂混合后免疫DBA1/J小鼠,建立胶原性关节炎(CIA)模型。通过免疫磁珠分离法(MACS)分选CIA小鼠脾脏中的CD4+CD25+Treg细胞。流式细胞术检测Treg细胞的纯度,并体外培养。穿龙薯蓣皂苷元作用48h后,流式细胞术检测Treg细胞比例,实时荧光定量PCR法检测其转录因子Foxp3的表达,ELISA法检测相关细胞因子IL-10的水平。结果:成功建立CIA模型小鼠。MACS法分选CIA小鼠脾脏Treg细胞纯度达90%以上。穿龙薯蓣皂苷元作用48h后,与对照组相比,给药组Treg细胞比例显著升高(P<0.05),Foxp3 mRNA表达显著升高(P<0.05),细胞上清中IL-10的水平显著升高(P<0.05)。结论:穿龙薯蓣皂苷元能显著提高CIA小鼠脾脏中Treg细胞的比例、转录因子Foxp3和相关细胞因子IL-10的水平。

穿山龙总皂苷对小鼠的急性毒性实验

目的:观察穿山龙总皂苷对小鼠的急性毒性作用。方法:采用灌胃和皮下注射的方法,一次性给药后连续观察7天,检测药物对小鼠的急性毒性作用。结果:未测得小鼠灌胃给予穿山龙总皂苷的半数致死量(Median lethal dose,LD50),灌胃给药小鼠的最大耐受剂量(Maximumto lerated dose,MTD)为0.42g/kg/d,最大耐受量倍数为1355倍。小鼠皮下注射穿山龙总皂苷的LD50为0.17g/kg。结论:穿山龙总皂苷口服给药较为安全。

肝豆状核变性22例误诊分析

目的:探讨肝豆状核变性的早期诊断。方法:回顾分析22例患者的临床资料,分析其临床特征和误诊原因。结果:22例误诊患者中误诊为神经精神疾病10例,肝脏疾病7例,慢性肾炎3例,溶血性贫血2例。误诊时间最长至16年。结论:本病以首发神经精神症状者居多,其次是肝病症状,也可表现为慢性肾炎、溶血性贫血,及时检查角膜K-F环及血铜蓝蛋白等,有利于早诊早治。

纤溶酶联合马来酸桂哌齐特治疗急性脑梗死临床疗效观察

目的观察纤溶酶联用马来酸桂哌齐特治疗脑梗死的临床疗效。方法将84例急性脑梗死患者随机分为两组,治疗组42例,纤溶酶100U+0.9%氯化钠注射液100 ml,ivdrip,1次/d×14 d,同时给予马来酸桂哌齐特注射液240 mg+0.9%氯化钠注射液250 ml,ivdrip,1次/d×14,对照组42例,给予丹红注射液20 ml+0.9%氯化钠注射液250 ml,ivdrip,1次/d×14,分别观察两组临床疗效及实验室指标的变化。结果治疗组有效率为90.48%,对照组为59.52%差异有显著意义(P<0.01)。治疗组实验室指标及纤维蛋白原等均降低明显优于对照组(P<0.01)。两组均无明显不良反应。结论应用纤溶酶联合马来酸桂哌齐特治疗急性脑梗死有明显疗效。

穿龙薯蓣皂苷元对DBA1/J小鼠CD4^(+)CD25^(-)T细胞的影响

目的初步探讨穿龙薯蓣皂苷元对DBA1/J小鼠CD4^(+)CD25^(-)T细胞的影响。方法采用MACS磁珠分选法分离DBA1/J小鼠脾CD4^(+)CD25^(-)T细胞,并鉴定纯度。穿龙薯蓣皂苷元作用CD4^(+)CD25^(-)T细胞后,采用ELISA方法检测各组培养上清中IL-10的浓度,Real-Time PCR方法检测Foxp3的水平,FCM检测Treg细胞的比率。结果免疫磁珠术分选DBA1/J小鼠脾CD4^(+)CD25^(-)T细胞纯度达93.89%。给药作用48h后,与对照组相比,穿龙薯蓣皂苷元组上清中IL-10的浓度显著升高(P<0.05),Foxp3 mRNA水平明显上升(P<0.05),Treg细胞比率明显升高(P<0.05)。结论穿龙薯蓣皂苷元能明显提升DBA1/J小鼠脾脏CD4^(+)CD25^(-)T细胞上清中细胞因子IL-10浓度,Treg细胞Foxp3 mRNA水平及Treg细胞比率。

穿龙薯蓣皂苷元对CIA小鼠CD4^(+)CD25^(-)T分化为Treg细胞的诱导作用

目的:探讨穿龙薯蓣皂苷元诱导胶原性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠CD4^(+)CD25^(-)T细胞向调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)转化的影响。方法:采用免疫磁性细胞分离法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离CIA小鼠的CD4^(+)CD25^(-)T细胞。通过不同浓度(25、12.5、6.25μmol·L^(-1))的穿龙薯蓣皂苷元诱导CD4^(+)CD25^(-)T细胞向Treg细胞分化,用FCM检测Treg细胞比率,Real-Time PCR法检测Foxp3 mRNA的水平,ELISA法检测培养上清白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)的含量。结果:免疫磁性细胞分离法分选出的CD4^(+)CD25^(-)T细胞纯度达93.89%。与对照组相比,穿龙薯蓣皂苷元给药组Treg细胞比率明显上调(P<0.05),Foxp3 mRNA的表达水平和培养上清中IL-10的水平均明显增加(P<0.05)。结论:穿龙薯蓣皂苷元可以诱导CIA小鼠CD4^(+)CD25^(-)T细胞向Treg细胞分化,并促进Foxp3的表达。

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P<0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P<0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P<0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P<0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。

穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜组织NF-κB p65活性及STAT3表达的影响

目的通过观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织核转录因子κB(NF-κB)及信号转导子和转录激活因子3(STAT3)表达的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生可能的信号转导通路作用机制。方法将造模成功的60只CIA大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组,另设正常对照组,每组12只。造模成功后分别给予相应的药物灌胃,连续治疗35 d。应用TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测滑膜组织中NF-κB p65的DNA结合活性。应用免疫组织化学染色的方法观察滑膜组织中STAT3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜细胞核蛋白提取物中NF-κB p65的DNA结合活性和滑膜组织中STAT3蛋白的表达显著增高,有统计学意义(P<0.01);与CIA模型组相比,穿山龙总皂苷组、雷公藤组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组的NF-κB p65的DNA结合活性和STAT3蛋白的表达均显著降低,有统计学意义(P<0.01);各治疗组之间两两比较均无统计学意义(P>0.05)。结论穿山龙总皂苷可能通过抑制NF-κB信号转导通路中NF-κB p65的活性和JAK-STAT信号转导通路中重要底物STAT3蛋白的表达,起到抑制类风湿性关节炎血管新生的作用。

宫颈癌中MST1蛋白的表达及临床意义

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学实验检测139例宫颈癌组织及20例癌旁组织(距离肿瘤≥4 cm)标本中MST1蛋白表达情况,Western blot和q PCR分别检测20例宫颈癌及其配对癌旁组织中MST1蛋白及m RNA表达水平,并分析其表达与临床病理因素及预后之间的关系。结果 MST1主要表达在细胞质。宫颈癌组织中MST1的表达阳性率(27%,38/139)明显低于癌旁组织(80%,16/20),差异有统计学意义(χ~2=21.62,P<0.01),且宫颈癌组织MST1蛋白及m RNA表达水平均明显降低(P<0.01)。Ⅰb+Ⅱa期的宫颈癌患者MST1阳性表达率高于Ⅱb+Ⅳ期,有淋巴结转移者MST1阳性表达率低于无淋巴结转移者(均P<0.05);患者年龄、肿瘤直径、组织学分型及分化程度对MST1阳性表达率无影响。MST1阴性表达患者的生存时间较阳性表达者显著缩短(Log-rank χ~2=28.35,P<0.01)。结论 MST1在宫颈癌中呈低表达,可能是宫颈癌临床治疗和判断预后的新靶点。

穿山龙总皂苷对大鼠滑膜细胞株VEGF与AP-1的影响

目的观察含穿山龙总皂苷血清对大鼠滑膜细胞株RSC-364血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA和激活蛋白-1(AP-1)活性的影响,探讨其抑制血管新生的作用机制。方法制备含穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)血清。将培养好的大鼠滑膜细胞株RSC-364分为空白对照组、模型对照组、含雷公藤多苷血清组和含穿山龙总皂苷血清组,培养1 h,除空白对照组外,其余各组加入IL-17和TNF-α(均为10μg·L-1)共同孵育24 h。采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞VEGF mRNA表达,凝胶电泳迁移率实验法(EMSA)检测各组细胞核蛋白提取物AP-1的DNA结合活性。结果与空白对照组比较,模型对照组VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性显著增高(P<0.05,P<0.01);与模型对照组比较,含雷公藤多苷血清组、含穿山龙总皂苷血清组VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性均降低(P<0.05),且两组间比较,差异无统计学意义。结论含穿山龙总皂苷血清可以抑制VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性,其机制可能是通过抑制转录因子AP-1来调控血管新生关键因子VEGF产生,进而抑制血管新生。

敲低膜联蛋白A7对人肝癌HepG2细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨敲低膜联蛋白A7表达对人肝癌细胞系Hep G2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法将Hep G2细胞接种于6孔板,分为3组:siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,其中干扰组只转染靶向膜联蛋白A7的siRNA,阴性对照组只转染阴性对照siRNA,空白对照组只加转染试剂。通过Western blotting鉴定膜联蛋白A7在转染后48h可被最大程度的抑制,于是在转染后48h采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测Bcl-2和Bax蛋白及mRNA的表达。结果与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增高(P<0.05),Bcl-2蛋白和mRNA的表达均显著降低(P<0.05),而Bax蛋白和mRNA均未发生显著变化(P>0.05)。结论敲低膜联蛋白A7可促进Hep G2细胞的凋亡,降低Bcl-2和Bax的比值。

中药薯蓣皂苷元对CIA大鼠滑膜组织VEGF及AP-Ⅰ表达的影响

目的:通过观察中药薯蓣皂苷元对牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎(Collagen-Induced Arthritis,CIA)大鼠膝关节滑膜激活蛋白-1(Activator Protein-1,AP-1),血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)的影响,探讨中药薯蓣皂苷元治疗类风湿关节炎的可能作用机制。方法:通过建立大鼠CIA模型,实验随机分空白对照组、CIA模型组、中药薯蓣皂苷元组和阳性药物对照组(雷公藤多苷组),采用原位杂交方法检测膝关节滑膜组织AP-1(c-fos和c-jun)的表达情况,应用Real-Time PCR方法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF m RNA的表达情况。结果:CIA模型组大鼠膝关节滑膜组织c-jun、c-fos和VEGF mRNA表达明显高于空白对照组;应用中药薯蓣皂苷元及雷公藤治疗后,c-jun、c-fos和VEGF m RNA表达明显降低。结论:薯蓣皂苷元可能通过对AP-1的两个亚单位c-jun和c-fos的调节来影响滑膜组织VEGF的表达,进而抑制滑膜血管新生,从而对类风湿关节炎发挥治疗作用。

膜联蛋白A7表达抑制对HepG-2细胞中galectin-3及PKC表达的影响

目的探讨抑制膜联蛋白A7(ANXA7)表达对人肝癌HepG-2细胞半乳糖凝集素3(galectin-3)的影响以及联合佛波酯(PMA)激活PKC后对ANXA7表达的影响。方法将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA脂质体转染法分别转染肝癌HepG-2细胞,空白对照组不予任何处理。转染48h后,采用Western blot和RT-qPCR法进行抑制效果的鉴定。Western blot和RT-qPCR法分别检测ANXA7表达抑制的HepG-2细胞中galectin-3的表达。转染48h后用100ng/ml PMA处理24h,Western blot法检测ANXA7及PKC的表达。结果靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;ANXA7表达受抑后的HepG-2细胞中galectin-3的表达下降,与阴性对照组和空白对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。PMA处理24h后,ANXA7及PKC表达变化不显著。结论 ANXA7表达抑制的HepG-2细胞中galectin-3的表达显著下调,这可能是ANXA7表达受抑的细胞行为学发生改变的机制之一。

宫颈鳞癌患者血清膜联蛋白A5含量的检测及其临床意义

目的检测膜联蛋白A5(ANXA5)在人宫颈鳞癌患者外周血中的含量改变,探讨ANXA5作为宫颈癌诊断标志物的可行性。方法收集人宫颈鳞癌患者外周血清48例和正常育龄妇女外周血清38例,低速离心取上清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测血清中ANXA5和鳞状细胞癌抗原(SCCAg)的含量;离心后取红细胞行RT-PCR进行患者与正常组ANXA5表达的检测。组间检验采用t检验;并进行肿瘤患者中ANXA5与SCCAg的相关性分析。结果宫颈鳞癌患者血清中ANXA5的含量均比正常人显著增多,血细胞中ANXA5mRNA的表达显著增多,差异有显著性(P<0.05);SCCAg在肿瘤组中的含量同样显著高于正常组(P<0.05);ANXA5与SCCAg具有明显的相关性,但ANXA5的阳性率大于SCCAg。结论 ANXA5在宫颈鳞癌患者外周血中含量增高,特异性和敏感性较高,可作为临床诊断和预后宫颈鳞癌的备选标志物。

膜联蛋白A7低表达对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术靶向沉默膜联蛋白A7(anexin A7,ANXA7)的表达对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:实验分为3组,以靶向ANXA7的siRNA转染MGC-803细胞为siRNA干扰组,另设阴性siRNA对照和空白对照组。Western blotting检测转染后MGC-803细胞中ANXA7蛋白的表达,应用MTT、集落形成和流式细胞术检测ANXA7下调对MGC-803细胞增殖、凋亡的影响。结果:靶向ANXA7的siRNA转染后MGC-803细胞中ANXA7的表达较阴性对照和空白对照组细胞明显降低[(21.79±1.72)%vs(99.87±5.13)%、(93.45±4.89)%,均P<0.05]。下调ANXA7明显降低MGC-803细胞的增殖能力[(0.97±0.06)vs(1.21±0.07)、(1.25±0.08),均P<0.05]和集落形成能力[(183±21)vs(363±35)、(348±27)个,均P<0.05],细胞凋亡率无显著变化(P>0.05)。结论:ANXA7低表达可抑制胃癌细胞MGC-803增殖,而对细胞凋亡无明显影响。

膜联蛋白A7低表达对胃癌MGC-803细胞生物学特性的影响

目的探讨膜联蛋白A7(ANXA7)低表达对人胃癌低分化细胞MGC-803的影响。方法将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA以脂质体转染法分别转染胃癌细胞系MGC-803细胞,空白对照组不予任何处理。转染48h后,采用Western blotting和实时定量-PCR法进行抑制效果的鉴定。检测ANXA7低表达对MGC-803细胞黏附、伸展、剥脱和迁移等生物学行为的影响。结果靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;ANXA7表达受抑后,细胞黏附、伸展和剥脱能力降低,与阴性对照组和空白对照组相比,差异显著(P<0.05)。细胞迁移变化不显著。结论 ANXA7表达降低后MGC-803细胞行为学发生明显改变。

穿山龙总皂苷对CIA大鼠滑膜血管新生的作用

目的:探讨穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜血管新生及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的作用。方法:42只Wistar大鼠随机分为7组:正常对照组(A组)、CIA模型组(B组)、雷公藤组(C组)、穿山龙总皂苷高剂量组(D组)、穿山龙总皂苷中剂量组(E组)、穿山龙总皂苷低剂量组(F组)和薯蓣皂苷元组(G组),每组6只大鼠。B-G组大鼠均建立CIA大鼠模型,待模型成功建立后,C-G组大鼠分别给予相应的药物灌胃,连续21d。采用免疫组织化学染色法检测关节滑膜的微血管密度(MVD)和VEGF的表达。结果:CIA模型组大鼠滑膜MVD和VEGF的表达显著高于正常对照组(P<0.01;)C-G组大鼠滑膜MVD和VEGF的表达明显低于模型组(P<0.01),且各治疗组间比较无显著差异(P>0.05)。结论:穿山龙总皂苷可能通过降低关节滑膜VEGF的表达发挥抑制滑膜血管新生的作用。

索拉菲尼对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究

目的:探讨分子靶向药物索拉菲尼(Sorafenib)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用。方法:采用MTT法检测Sorafenib对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果:Sorafenib能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应;6μmol/L的Sorafenib处理HepG2细胞72小时,HepG2细胞周期中的S期比例明显升高,G0-G1期、G2-M期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:Sorafenib对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制其增殖和促进其凋亡。