肿瘤相关巨噬细胞促进宫颈癌侵袭转移的机制研究

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)对宫颈癌侵袭转移的影响及分子机制。方法免疫组织化学法检测宫颈病变组织TAMs的浸润情况。对人单核巨噬细胞系THP1进行体外诱导分化,使其转化为M2型TAMs。取TAMs上清液刺激宫颈癌细胞SiHa和C33a。划痕法、Transwell法分别检测TAMs对宫颈癌细胞系迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测刺激后宫颈癌细胞上皮间质转化进程及MMP-9的表达。结果 TAMs浸润数目与宫颈病变进展呈正相关。TAMs上清液刺激后,SiHa和C33a细胞出现间质样改变,而且迁移和侵袭能力显著增强(均P<0.5)。TAMs可下调E-Cadherin的表达,上调N-Cadherin、Vimentin及MMP-9的表达。结论 TAMs浸润与宫颈上皮恶性转化和进展密切相关,TAMs可能通过上调MMP-9的表达促进宫颈癌细胞侵袭转移。

宫颈癌淋巴结转移机制的研究进展

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,其死亡率居高不下且发病呈年轻化趋势。淋巴结转移是宫颈癌远处转移的主要方式,也是影响治疗和预后的重要因素之一。越来越多研究表明,肿瘤干细胞是引发肿瘤转移的根源,肿瘤微环境为淋巴结转移提供特殊的理化环境,两者紧密配合,推动着宫颈癌淋巴结转移。然而,参与淋巴结转移的分子机制复杂,尚未完全明确。本文就近年来宫颈癌淋巴结转移的研究进展,对其相关机制作一综述。

CAⅨ联合CD8^(+)TIL对宫颈癌淋巴结转移的预测价值

目的探讨宫颈癌组织中碳酸酐酶Ⅸ(carbonicanhydraseⅨ,CAⅨ)及CD8^(+)肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltratinglymphocytes,TIL)的表达与淋巴结转移的相关性,以及联合检测对淋巴结转移的临床预测价值。方法采用免疫组化法检测75例手术切除的宫颈癌组织中CAⅨ和CD8^(+)TIL的表达分布水平,运用统计学方法分析两者与患者临床病理特征的相关性,及对淋巴结转移的预测效能。结果宫颈癌组织中,CAⅨ的表达与癌巢CD8^(+)TIL数量呈负相关(P<0.001),与间质CD8^(+)TIL数量呈正相关(P<0.001)。同时,CAⅨ高低表达与淋巴结转移(P=0.002)相关。CAⅨ的表达随淋巴结转移而升高(P=0.001),癌巢CD8^(+)TIL数量随淋巴结转移而减少(P<0.001),CAⅨ联合癌巢CD8^(+)TIL预测淋巴结转移的曲线下面积(areaundercurve,AUC)(0.837,P<0.001)、特异度(100%)、阳性预测值(100%)、准确度(85.3%)高于联合间质CD8^(+)TIL及单独CAⅨ的检测。结论缺氧可能参与CD8^(+)TIL的调控,缺氧、癌巢CD8^(+)TIL可能与宫颈癌淋巴结转移密切相关,CAⅨ联合癌巢CD8^(+)TIL检测可作为宫颈癌淋巴结转移的预测因素,减少淋巴结转移的误诊。

HPV16整合感染人宫颈上皮细胞分泌外泌体介导宫颈成纤维细胞转化体外研究

目的高危人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hr-HPV)整合感染的上皮细胞与宫颈间质微环境可能互为"同谋",在宫颈癌病变过程中发挥重要作用。本研究探讨HPV16整合感染的人宫颈上皮细胞通过分泌外泌体(exosome,Exo)对正常宫颈间质中成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)功能的影响。方法选取2018-01-28-2018-03-20南方医科大学南方医院妇产科收治的患者3例,提取2株人宫颈原代正常NFs并进行鉴定,分别命名为NFs1和NFs2。选取HPV16整合感染的永生化人宫颈上皮细胞ECT-1和S12为实验组,并以无HPV感染的正常人宫颈上皮细胞HCerEpiC为对照组,差速超速离心法提取上皮细胞分泌的Exo,经蛋白定量后,透射电镜和蛋白质印迹法分别检测Exo的形态和标志性蛋白。每组使用10μg Exo进行体外刺激NFs,孵育48h。收集上皮细胞的条件培养基(conditioned medium,CM)及Exo,分别处理NFs,通过细胞骨架染色观察CM/Exo对NFs细胞形态的影响,Transwell迁移实验、划痕实验和细胞计数盒8实验观察Exo对NFs迁移和增殖能力的影响,ELISA实验检测NFs/CM中人转化生长因子β1(transforming growth factor betal 1,TGF-β1)的表达量。结果从正常宫颈组织分离出NFs,并成功提取宫颈上皮细胞来源的Exo。与对照组比较,NFs经实验组处理后,细胞形态多变不均一,肌动蛋白微丝丰富,并伸出丝状伪足,且细胞增殖速度增加,差异有统计学意义(NFs1:tECT-1=2.452,PECT-1=0.0496;tS12=3.185,PS12=0.0190。NFs2:tECT-1=3.295,PECT-1=0.0165;tS12=2.817,PS12=0.0305)。实验组和对照组NFs1穿透聚碳酯膜的细胞数如下:ECT-1/Exo 98.333±3.055,S12/Exo 121.000±5.292,HCerEpiC/Exo 31.333±4.041(F=364.6,P<0.0001);划痕实验显示,NFs1的相对迁移率分别为ECT-1/Exo 3.942±0.065,S12/Exo 3.858±0.199,HCerEpiC/Exo 1.355±0.160(F=279.6,P<0.0001),表明NFs经ECT-1/Exo和S12/Exo处理后迁移能力均显著增强。实验组NFs1分泌TGF-β1的水平ECT-1/Exo(1.195±0.004)ng/mL,S12/Exo(1.248±0.139)ng/mL,亦比对照组(0.286±0.056)ng/mL高(tECT-1=28.08,PECT-1=0.0012;tS12=11.14,PS12=0.0004)。在NFs2重复以上实验,结果一致。结论HPV16整合感染的人宫颈上皮细胞分泌Exo增强NFs的体外迁移和增殖能力,上调NFs分泌TGF-β1的水平,参与NFs向"激活型"NFs的转化。