芍药苷对1-甲基-4-苯基-吡啶离子诱导PC12细胞损伤保护作用的机制

目的探讨芍药苷(peoniflorin,PF)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导PC12细胞损伤保护作用的机制。方法将PC12细胞分为正常对照组(不给药)、MPP+损伤组(加入MPP+至终浓度为500μmol/L)、阳性对照组(加入MPP+至终浓度为500μmol/L和美多芭至终浓度为50μg/mL)及药物保护组(加入MPP+至终浓度为500μmol/L和25、50和100μmol/L浓度的PF),均于37℃培养48 h,进行细胞计数及形态学观察,并通过MTT法检测细胞活性;采用相应试剂盒检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的释放量、细胞内Ca2+浓度、细胞周期、Caspase-3活性、线粒体膜电位;Western blot法检测相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达水平,计算Bcl-2/Bax比值。结果与正常对照组比较,MPP+损伤组细胞数量减少,细胞体明显缩小;细胞活性明显降低(P<0.01);LDH释放率及Ca2+浓度明显升高(P均<0.01);S期细胞比例明显下降(P<0.01),G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.01);Caspase-3活性明显升高(P<0.01);线粒体膜电位水平明显下降(P<0.05);Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01)。与MPP+损伤组比较,各剂量药物保护组细胞损伤减弱,活细胞数量增多,部分细胞恢复正常核大小和完整;细胞活性明显升高(P<0.01);LDH释放率及Ca2+浓度明显降低(P均<0.01);S期细胞比例明显升高(P<0.01),G0/G1期细胞比例明显下降(P<0.01);Caspase-3活性显著降低(P<0.01);线粒体膜电位升高;细胞Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.01)。结论PF对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用可能是通过减少LDH释放、降低胞内Ca2+超载、促进细胞增殖、降低Csapase-3活性、提高线粒体膜电位和Bcl-2/Bax比值实现的。