肝素非还原端饱和结构的紫外吸收研究及在肝素寡糖测序中的应用

为了进一步探讨非还原端饱和结构的肝素寡糖在UV 232 nm的吸收情况,制备了4种饱和结构的肝素二糖,并用离子对反相液相色谱/离子阱飞行时间质谱(RPIP-LC/MS-IT-TOF)光电二极管阵列检测器分析了它们在UV 232 nm的吸收情况.分析结果表明,饱和结构的肝素二糖在UV 232 nm的检出限为9μg(S/N=10),UV232 nm/UV 206 nm约为不饱和结构肝素二糖UV 232 nm的7%~40%.结果还表明,肝素二糖UV 232 nm的吸收强度受亚硫酸基团(SO_(3)^(2-))影响较大.另外,通过比较不饱和结构的肝素/硫酸类肝素(Hep/HS)标样二糖发现,含N-未取代葡萄糖胺(GlcNH3+)基团的二糖在UV 232 nm的吸收值较低.最后,通过简单的UV检测方法,结合HNO2(pH=4.0)裂解法和RPIP-LC/MS-IT-TOF分析,简化了含GlcNH3+肝素六糖的测序方法.本研究为以后用HNO2(pH=1.5)裂解法对混合组分N-硫酸化的肝素寡糖结构序列分析提供了可能.

含N-非取代葡糖胺残基肝素四糖的制备与表征

生物体内含有N-非取代葡糖胺残基(GlcNH_3^+)结构的硫酸类肝素(HS)具有重要的生物和病理生理学功能。但这种HS在生物体内的含量较少、获得困难,而采用化学方法制备与生物体内结构相似的这种寡糖,有助于研究HS在生物体内的功能作用。本实验以高硫的肝素四糖为原料,用部分脱N位硫酸根的方法,制备了含1个和2个GlcNH_3^+的肝素四糖,并采用液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(LC/MS-IT-TOF)法对其进行结构检测。通过分析(EIC)-MS和MS2提取离子流图发现,含不同GlcNH_3^+数目的肝素四糖具有不同的裂解规律,含GlcNH_3^+数目越多,生成的碎片离子越多,这为MS方法进一步鉴定和定量测定含GlcNH_3^+结构的寡糖奠定了基础。

肝素/硫酸乙酰肝素四糖同分异构体的制备与表征

肝素/硫酸乙酰肝素(Hep/HS)寡糖结构多样,且与生物学、病理学功能息息相关,表征这些结构对解析它们的功能具有重要意义。本实验以市售猪肠肝素钠为原料,制备了9种肝素四糖,并用二糖组分分析方法结合反相离子对试剂色谱-串联离子阱飞行时间质谱(IPRP-LC/IT-TOF MS)进行结构解析。结果表明:9种肝素四糖中有两组同分异构体,且含己胺离子对试剂的RP-LC/MS能够成功分离肝素寡糖及其同分异构体;采用LC-MS/MS方法可以鉴定其中一组同分异构体的结构。该方法可为HS/Hep寡糖的研究提供标准品,并为解析HS/Hep同分异构体结构提供一种简单有效的方法,进而为更好地理解生物体内HS/Hep结构和生理生化功能的关系提供帮助。