鱼腥草对肝癌细胞生物学行为的影响及网络药理学分析

目的探讨鱼腥草(Herba Houttuyniae)对肝癌细胞生物学行为的影响及其潜在的分子机制。方法使用不同浓度的鱼腥草提取物处理肝癌细胞SMMC-7721和SK-Hep-1,利用CCK-8检测细胞的活力,使用Transwell实验检测肝癌细胞的迁移和侵袭能力,细胞免疫荧光实验检测转移相关蛋白MMP-9的表达情况,活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞ROS水平,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白表达水平。采用网络药理学筛选鱼腥草的活性成分并构建蛋白间相互作用(PPI)网络识别鱼腥草治疗肝癌的作用靶点,通过GO和KEGG通路富集分析探索与鱼腥草抗肝癌作用靶点相关的信号通路,利用qRT-PCR检测关键靶点的mRNA表达水平。结果CCK-8、Transwell、细胞免疫荧光实验结果显示鱼腥草提取物可抑制SMMC-7721和SK-Hep-1细胞的活力、迁移和侵袭能力以及转移相关蛋白MMP-9的表达(均P<0.05)。TUNEL染色、ROS检测、Western blot结果显示鱼腥草提取物可促进SMMC-7721和SK-Hep-1细胞凋亡及升高细胞中ROS水平和促凋亡蛋白BAX的表达水平(均P<0.05)。网络药理学预测鱼腥草治疗肝癌主要通过作用于TNF、AKT1、TP53等靶点,涉及癌症、TNF、PI3K-AKT等信号通路。qRT-PCR证实鱼腥草提取物可降低SMMC-7721和SK-Hep-1细胞中TNF-α、AKT1基因的mRNA表达水平,增加TP53基因的mRNA表达水平(均P<0.05)。结论鱼腥草可能通过调节TNF、AKT1、TP53等基因抑制肝癌细胞的细胞活力及迁移和侵袭能力,且促进肝癌细胞凋亡。

丙泊酚或依托咪酯对大鼠海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察丙泊酚或依托咪酯对出生28 d大鼠海马胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic pro-tein,GFAP)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic AMP response elementbinding protein,CREB)表达的影响。方法选取雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、丙泊酚组和依托咪酯组,每组20只。丙泊酚组腹腔注射丙泊酚总量为200 mg/kg,依托咪酯组腹腔注射依托咪酯总量为60 mg/kg,对照组不注射任何药物。血气分析仪检测大鼠动脉血呼吸和代谢指标的变化,免疫组织化学染色法检测大鼠海马组织中GFAP的表达,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马组织中PKA和CREB mRNA的表达。结果各组大鼠动脉血pH值、氧分压、二氧化碳分压、HCO3-、BE、氧饱和度之间比较差异无统计学意义(P>0.05);丙泊酚组与依托咪酯组GFAP的平均积分光密度值均高于对照组(P<0.05),而丙泊酚组与依托咪酯组比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,丙泊酚组与依托咪酯组PKA和CREB mRNA的表达均降低(P<0.05),丙泊酚组与依托咪酯组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚或依托咪酯可能通过抑制PKA-CREB信号通路而损害大鼠海马神经元,使星形胶质细胞反应性增生、GFAP表达增加。

吗啡对人胃癌MGC-803细胞caspase-3表达的影响

目的观察吗啡对人胃癌MGC-803细胞凋亡及caspase-3表达的影响。方法胃癌MGC-803细胞分为两组:对照组和吗啡组。对照组不加任何药物,吗啡组将吗啡加入细胞培养液中使吗啡终浓度为0.1μmol/L。孵育24h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中caspase-3基因mRNA和蛋白的表达情况。结果吗啡组胃癌细胞凋亡率为(17.20±2.95)%,明显高于对照组的(11.40±2.86)%(P<0.05)。RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡组胃癌MGC-803细胞中caspase-3mRNA和蛋白表达增加。结论 0.1μmol/L吗啡通过增加caspase-3的表达而促进胃癌细胞的凋亡。

右美托咪定对丙泊酚孵育的离体胎鼠海马神经元Bcl-2／Bax及caspase-3表达的影响

目的：评价右美托咪定对丙泊酚孵育的离体胎鼠海马神经元凋亡及相关因子（Bcl-2、Bax及caspase-3）表达的影响。方法：原代培养孕16～18d的SD大鼠胎鼠海马神经元细胞。以5×10^5／mL的细胞密度接种于培养板中，培养至第7天，NeuN法鉴定原代海马神经元。采用随机数字表法将海马神经元分为3组：对照组（C组）不做任何处理；丙泊酚组（P组）加入丙泊酚，终浓度为100μmol／L；右美托咪定＋丙泊酚组（DP组）加人右美托咪定，终浓度为1μmol／L，孵育30rain，随后加入丙泊酚，终浓度为100μmol／L，孵育3h。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，RT—PCR法测Bcl-2、Bax及caspase-3tuRNA的表达，Westernblotting法检测Bcl-2、Bax及actived—caspase-3蛋白的表达。结果：与C组比较，P组海马神经元细胞凋亡率升高（Pd0．05），Bcl-2mRNA及其蛋白表达下调（Pd0．05），easpase-3tuRNA和activedcaspase-3蛋白表达上调（Pd0．05），而BaxtuRNA和蛋白表达两组比较差异无统计学意义（P〉0．05），P组Bcl-2／Bax比值显著低于C组（P〈0．05）。与P组比较，DP组海马神经元细胞凋亡率降低（P〈0．05），Bcl-2mRNA和蛋白表达上调（P〈0．05），caspase-3mRNA和actived—easpase-3蛋白表达下调（Pd0．05），而BaxmRNA和蛋白表达两组比较差异无统计学意义（P〉0．05），DP组Bcl2／Bax蛋白比值显著高于P组（Pd0．05）。结论：右美托咪定通过上调Bcl—2的表达抑制下游caspase-3的激活，使离体胎鼠海马神经元凋亡减少，从而起到神经保护作用。

麻醉深度监测的研究进展

在现代医疗研究领域当中,麻醉深度监测方法,是业内一项十分重要的研究课题。在现代化学术研究工作中,国内外相关领域的专家学者,以及医疗从业人员,都对临床麻醉深度及其监测方法都进行了全面系统地研究。本文主要对麻醉深度监测的可靠性与局限性的影响因素进行了研究与分析,旨在为现代医疗临床领域提供更加科学和有效的理论研究成果。

右美托咪定预处理对丙泊酚孵育的大鼠海马神经元细胞活力的影响

目的观察右美托咪定预处理对丙泊酚孵育的大鼠海马神经元细胞活力的影响。方法选择孕16～18dSD大鼠拉颈处死,剖腹取胎鼠,分离海马神经元细胞。将细胞接种于培养板中,培养至第8天,应用神经元特异性核蛋白(NeuN)单克隆抗体进行免疫组化染色,鉴定海马神经元是否培养成功。将海马神经元细胞分为对照组(C组)、丙泊酚组(P组)、右美托咪定+丙泊酚组(DP组)。C组不做任何处理;P组在培养液中加入100μmol/L丙泊酚孵育3h;DP1组、DP2组、DP3组、DP4组、DP5组、DP6组则在培养液中分别加入0.001、0.01、0.1、1、10、100μmol/L右美托咪定孵育30min,再加入100μmol/L丙泊酚继续孵育3h,每组设6个复孔。应用CCK-8试剂盒检测各组海马神经元的细胞活力。结果显微镜下见所培养细胞中有大量的棕黄色NeuN阳性颗粒,说明海马神经元培养成功。与C组比较,P组、DP1组、DP2组、DP3组、DP4组海马神经元细胞活力明显下降(P<0.05),而DP5组、DP6组差异无统计学意义。与P组比较,DP1组、DP2组、DP3组、DP4组、DP5组、DP6组海马神经元细胞活力均明显升高(P<0.05)。随着右美托咪定剂量的增加,细胞活力逐渐增强,即:DP6组>DP5组>DP4组>DP3组>DP2组>DP1组。结论丙泊酚降低海马神经元细胞的活力,而右美托咪定具有神经保护作用,可以剂量依赖性地减轻丙泊酚对海马神经元细胞活性的抑制作用。

富血小板血浆对人脂肪来源干细胞增殖率的影响

目的:探讨不同比例富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)对人脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的增殖及周期蛋白Cyclin D_1表达的影响。方法:分离培养ADSCs细胞,传代至第3代,流式细胞仪鉴定。全血中分离PRP。采用随机数字表法将将细胞分为4组(n=24):C组不做任何处理,PRP_(10)组、PRP_(20)组和PRP_(30)组在ADSCs中加入PRP使其容积比分别为10%、20%和30%,于37℃、5%CO_2培养箱中培养。应用MTT法检测各组细胞的增殖率,蛋白免疫印迹法(Western blot)测细胞周期蛋白Cyclin D_1的表达。结果:与C组比较,PRP_(10)组、PRP_(20)组、PRP_(30)组ADSCs细胞增殖率及Cyclin D_1蛋白的表达明显增高(P<0.05);组间比较PRP30组ADSCs细胞增殖率及Cyclin D_1蛋白的表达高于PRP_(10)组和PRP_(20)组(P<0.05)。结论:PRP以浓度依赖性方式促进ADSCs细胞内周期蛋白Cyclin D_1的表达,从而促进ADSCs的增殖。

右美托咪定对异丙酚孵育胎鼠离体海马神经元NGF表达的影响

目的 评价右美托咪定对异丙酚孵育离体胎鼠海马神经元神经生长因子（NGF）表达的影响.方法 原代培养孕18 dSD大鼠胎鼠海马神经元7d,以5×10^5个/ml的细胞密度接种于培养板,采用随机数字表法分为3组（n=15）：对照组（C组）不做任何处理;异丙酚组（P组）加入异丙酚,终浓度100 μmol/L;右美托咪定＋异丙酚组（DP组）加入右美托咪定,终浓度1μmol/L,孵育30min,随后加入异丙酚,终浓度100 μmol/L,孵育3h.采用CCK-8法检测海马神经元活力,RT-PCR法检测NGF mRNA的表达,Western blot法检测NGF蛋白的表达.结果 与C组比较,P组海马神经元活力降低,NGF蛋白及其mRNA表达下调（P＜0.05）;与P组比较,DP组海马神经元活力升高,NGF蛋白及其mRNA表达上调（P＜0.05）.结论 右美托咪定通过上调NGF表达改善异丙酚诱导的胎鼠离体海马神经元活力降低.

异丙酚对胎鼠离体海马神经元钙离子浓度和 NF-κB 活性的影响

目的：评价异丙酚对体外培养的胎鼠海马神经元内钙离子浓度（[Ca2＋]i ）和NF-κB活性的影响。方法孕16～18 d SD大鼠拉颈处死，剖腹取胎鼠，分离海马神经元。将神经元接种于培养板中，培养至第9天，采用随机数字表法，将其分为7组（ n＝12）：对照组（C组）、脂肪乳剂组（I组）、异丙酚0.1μmol/L组（P1组）、异丙酚1μmol/L组（P2组）、异丙酚10μmol/L组（P3组）、异丙酚100μmol/L组（P4组）和异丙酚1000μmol/L组（P5组）。C组不做任何处理；I组培养液中加入10％脂肪乳剂，终浓度为100μmol/L；P1组、P2组、P3组、P4组、P5组培养液中加入异丙酚，终浓度分别为0.1、1、10、100、1000μmol/L ，继续孵育3 h。于异丙酚孵育前和孵育结束后10 min内采用激光共聚焦显微镜测定[Ca2＋]i ，观察神经元形态和轴突、树突的结构，于异丙酚孵育结束7 d采用Western blot法检测NF-κB的蛋白表达，反映其活性。结果与异丙酚孵育前比较，P2组、P3组、P4组异丙酚孵育结束后各时点[Ca2＋]i升高，P5组异丙酚孵育结束后各时点[Ca2＋]i降低（ P＜0.05），C组、I组和P1组异丙酚孵育结束后各时点[Ca2＋]i差异无统计学意义（ P＞0.05）。与C组比较，P1组、P2组、P3组、P4组、P5组海马神经元NF-κB活性降低（ P＜0.05），I组海马神经元NF-κB 活性差异无统计学意义（ P＞0.05）。C组、I组和P1组海马神经元形态结构正常；P2组、P3组、P4组海马神经元轴突和树突分枝明显减少， P5组海马神经元形态模糊、细胞膜破裂，未见明显的轴突和树突结构。结论异丙酚可通过改变[Ca2＋]i和抑制NF-κB激活，对胎鼠海马神经元产生毒性。

cAMP-PKA-CREB信号通路在缺氧预处理减轻异丙酚诱导发育期大鼠中枢神经毒性中的作用

目的评价环磷腺苷-蛋白激酶A-环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-PKA-CREB)信号通路在缺氧预处理减轻异丙酚诱导发育期大鼠中枢神经毒性中的作用。方法SPF级雄性SD大鼠70只,7日龄,体重10~15g,采用随机数字表法将其分为7组(n=10):生理盐水组(N组)腹腔注射等容量生理盐水;异丙酚组(P组)腹腔注射异丙酚50mg/kg,待翻正反射恢复再后追加50mg/kg;缺氧预处理+异丙酚组(HP组)缺氧预处理(氧浓度8%维持10min,然后置于空气中10min,循环5次)结束后2h时腹腔注射异丙酚(方法同P组);缺氧预处理+异丙酚+PKA抑制剂H89组(HPH组)侧脑室注射H895μmol/5μl,30min后处理同HP组;异丙酚+PKA激动剂SP-CAMP组(PS组)侧脑室注射SP-CAMP20nmol/5μl,30min后腹腔注射异丙酚(方法同P组);生理盐水侧脑室注射组(NI组)和5%二甲基亚砜侧脑室注射组(DI组)分别侧脑室注射5μl生理盐水和5%二甲基亚砜。待翻正反射恢复后立即处死,取海马组织,行HE染色,采用免疫组化法测定海马PKAc和磷酸化CREB(p-CREB)阳性细胞数,采用Westernblot法测定海马活化caspase-3、Bcl-2、Bax、PKAc、CREB和p-CREB表达水平。结果与N组比较,P组海马活化caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2、PKAc和p-CREB表达下调,PKAc和p-CREB阳性细胞百分比降低(P<0.05),海马细胞排列紊乱,细胞萎缩;与P组比较,HP组和PS组海马活化caspase-3表达下调,Bcl-2、PKAc和p-CREB表达上调,PKAc和p-CREB阳性细胞百分比升高,HP组Bax表达下调(P<0.05),海马细胞排列整齐、胞浆丰富、胞核可见;与HP组比较,HPH组海马活化caspase-3表达上调,Bcl-2、PKAc和p-CREB表达下调,PKAc和p-CREB阳性细胞百分比降低(P<0.05),细胞排列紊乱、细胞缩小、核固缩。结论缺氧预处理减轻异丙酚诱导发育期大鼠中枢神经毒性的机制可能与激活cAMP-PKA-CREB信号通路有关。

异丙酚对胎鼠离体海马神经元凋亡的影响

目的 评价异丙酚对胎鼠离体海马神经元凋亡的影响.方法 体外培养胎鼠海马神经元,调整密度为5＆#215;104个/ml后接种到96孔板和放有圆形玻片的24孔板中,加入培养液培育,采用随机数字表法分为5组（n=18）：对照组（C组）、脂肪乳剂组（Ⅰ组）、异丙酚1组（P1组）、异丙酚2组（P2组）和异丙酚3组（P3组）.C组不做任何处理,Ⅰ组在培养液中加入10％脂肪乳剂,终浓度为100μmol/L,P1组、P2组和P3组在培养液中加入异丙酚,终浓度分别为1、10和100 μmol/L,继续孵育3h.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用RT-PCR检测凋亡相关因子Bcl-2 mRNA和caspase-3 mRNA的表达,Western blot法检测Bcl-2蛋白和actived-easpase-3蛋白的表达.结果 与C组比较,P1组、P2组和P3组海马神经元凋亡率升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调,caspase-3 mRNA和actived-caspase-3蛋白表达上调（P＜0.05）,Ⅰ组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 异丙酚通过抑制Bcl-2表达,增强caspase-3活性促进胎鼠离体海马神经元凋亡.

异丙酚对胎鼠离体海马神经元增殖的影响

目的 评价异丙酚对胎鼠离体海马神经元增殖的影响.方法 孕16～ 18 d SD大鼠,拉颈处死,剖腹取胎鼠,分离海马神经元.将神经元接种于培养板中,培养至第9天,采用随机数字表法,将其分为7组（n=36）：对照组（C组）、脂肪乳剂组（I组）、异丙酚0.1 μmol/L组（P1组）、异丙酚1.0μmol/L组（P2组）、异丙酚10.0 μmol/L组（P3组）、异丙酚100.0 μmol/L组（P4组）和异丙酚1 000.0μmol/L组（P5组）.C组不做任何处理;I组培养液中加入10％脂肪乳剂,终浓度为100 μmol/L;P1组、P2组、P3组、P4组和P5组培养液中加入异丙酚,终浓度分别为0.1、1.0、10.0、100.0、1 000.0 μmol/L,继续孵育3h.分别于异丙酚孵育结束后12、24、36、48、60和72 h时采用MTT法测定海马神经元增殖水平.结果 与C组比较,P1组、P2组、P3组、P4组和P5组海马神经元增殖水平降低（P＜0.05）,I组海马神经元增殖水平差异无统计学意义（P＞0.05）;与P1组比较,P2组、P3组和P4组海马神经元增殖水平差异无统计学意义（P＞0.05）,P5组海马神经元增殖水平降低（P＜0.05）.结论 异丙酚可抑制胎鼠离体海马神经元增殖.

缺氧预处理对异丙酚诱导新生大鼠大脑神经毒性的影响

目的探讨缺氧预处理对异丙酚诱导新生大鼠大脑神经毒性的影响。方法SPF级SD大鼠75只,日龄7 d,体重10~15 g,采用随机数字表法将其分为5组(每组15只):生理盐水组(N组),腹腔注射生理盐水100μl;脂肪乳剂组(F组),腹腔注射脂肪乳剂100μl;异丙酚组(P组),腹腔注射异丙酚100 mg/kg;缺氧预处理组(H组),大鼠置于8%氧浓度10 min,空气10 min,循环5次,空气中恢复2 h;缺氧预处理+异丙酚组(H+P组),先给予缺氧预处理(同H组),后给予异丙酚(同P组)。大鼠苏醒后时点,断头取海马组织:制作电镜标本,应用透射电镜观察各组海马神经细胞的超微结构;制作石蜡切片,行TUNEL法染色,检测TUNEL阳性细胞的数量;Western blot法检测活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2-associated X protein,Bax)蛋白水平。结果与N组比较,P组海马神经细胞萎缩、细胞器溶解、核仁消失,TUNEL阳性细胞数量明显增加(P<0.05),Bax蛋白和cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。与P组比较,H+P组海马神经细胞的细胞膜完整、细胞器和细胞核清晰可见、核染色质稍有减少,TUNEL阳性细胞数量减少(P<0.05),Bax蛋白和cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。结论缺氧预处理可以减轻异丙酚对大鼠发育期大脑的神经毒性,部分机制可能是上调海马神经细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和下调促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3水平。

右美托咪定对胎鼠离体海马神经元磷酸化CREB表达的影响

目的 评价右美托咪定对胎鼠离体海马神经元磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-CREB）表达的影响.方法 孕16 ～ 18 d SD大鼠,拉颈处死,剖腹取胎鼠,分离海马神经元.将神经元接种于培养液中,培养至第8天,采用随机数字表法分为4组（n=12）：对照组（C组）、右美托咪定0.001 μmol/L组（D1组）、右美托咪定0.010μmol/L组（D2组）和右美托咪定0.100 μmol/L组（D3组）.C组不做任何处理,D1-3组培养液中加入右美托咪定,终浓度分别为0.001、0.010和0.100 μmol/L,孵育3.5h.采用流式细胞仪检测海马神经元凋亡情况,采用Western blot法检测海马神经元p-CREB表达.结果 与C组比较,D1-3组海马神经元的凋亡率降低,p-CREB表达上调（P＜0.05）.结论 右美托咪定通过上调p-CREB表达抑制胎鼠离体海马神经元凋亡.