每日透析在血液透析诱导期中的应用

目的比较每日透析和传统透析在诱导期血液透析中的应用,探讨每日透析用于诱导期血液透析的可行性及优势。方法将兰州大学第二医院肾病中心2013-2014年新进入血液透析治疗的慢性肾衰竭尿毒症患者44例区组随机分配到两个治疗组,其中传统诱导透析组(CHD)22例、每日透析组(DHD)22例。两组患者诱导透析前1 d和第7天时检测尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血红蛋白(Hb)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、APACHEⅡ评分,观察治疗期间失衡综合征等并发症及SCL-90量表中的头痛评分、恶心评分、睡眠障碍评分、焦虑评分、躯体化评分、总因子分。结果两组患者入院时BUN、Scr、Hb、MAP、HR、APACHEⅡ评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。第7天,DHD组患者Scr、MAP、APACHEⅡ评分与CHD组比较,差异有统计学意义[分别为(465.44±117.70)vs(594.60±157.38),(99.71±12.23)vs(109.54±12.14),(13.71±2.13)vs(15.38±1.94),P<0.05]。DHD组头痛评分、恶心评分、睡眠障碍评分、焦虑评分、躯体化评分、总因子分与CHD组比较,差异有统计学意义[1.00 vs 2.00,1.00 vs 2.00,(1.53±0.43)vs(1.92±0.61),(1.28±0.34)vs(1.53±0.37),(1.50±0.46)vs(1.90±0.58),(1.38±0.38)vs(1.68±0.40),P<0.05]。结论在诱导透析期,每日透析代替传统透析能给患者提供一个高效、平稳、安全、舒适的血液净化过程。

microRNAs与糖尿病肾病

microRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码调控单链小RNA,通过与靶mRNA的3'端非翻译区(3'UTRs)序列相互识别而引起靶mRNA降解或蛋白翻译抑制,从而参与机体器官发育分化、细胞增殖凋亡、肿瘤发生等多种生理病理过程。目前研究表明,miRNAs在糖尿病肾病(DN)的发病进展中发挥重要作用,一些miRNAs的表达异常(如miR-192、miR-21、miR-29、miR-377、miR-93、miR-200家族、miR-451和miR-251等的上调或下调)与DN的发生、发展密切相关。近期发现miRNAs在血清、血浆和尿液等多种体液中稳定存在,并且在DN发病状态下,一些miRNAs会发生特异性改变,提示miRNAs可作为DN诊断性标志物。而且,随着对miRNAs调控机制的深入研究,特定的miRNAs有可能成为DN的治疗靶点,为疾病的预防和进展提供新的治疗策略。

扶正解毒颗粒对染镍大鼠肾细胞凋亡及Bax、bcl-2表达的影响

目的研究中药扶正解毒颗粒(FJG)对硫酸镍(N iSO4)染毒大鼠肾细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bc l-2表达的影响。方法以W istar大鼠N iSO4(2.5 mg.kg-1.d-1)染毒造模,FJG灌胃处理,采用DNA末端标记法(TUNEL)以及免疫组化SP法观察肾细胞凋亡与肾脏Bax和Bc l-2蛋白表达水平。结果 与N iSO4组相比,FJG组大鼠肾脏细胞凋亡率明显减少(P<0.05或P<0.01),Bc l-2表达增强,Bax表达及Bax/Bc l-2比值下调(P<0.05或P<0.01),尤以FJG大、中剂量组作用显著。结论 FJG可能通过降低凋亡相关蛋白Bax和增强Bc l-2的表达而抑制N iSO4诱发的肾细胞凋亡,发挥拮抗镍性肾损伤的作用。

异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖影响的实验研究

目的:探讨异紫堇定碱(Isocorydione)对人宫颈癌Siha细胞增殖的影响。方法:以100、200、400、800、1 200μmol/L浓度的异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞体外干预,分别作用24、48、72 h后,采用MTT法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞生长增殖的作用;流式细胞仪检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞周期的影响;结合Hoechst染色观察处理后Siha细胞核微形态的变化;Western Blot法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞作用后凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:MTT结果显示不同浓度的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后具有明显的抑制其增殖的作用,呈剂量-时间依赖关系(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示400μmol/L的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后,细胞周期发生明显改变,其中G1和S期细胞比例变化不明显,但G2期细胞明显减少(P<0.05);Hoechst染色结果显示,与对照组比较,400μmol/L的异紫堇定碱作用于Siha细胞48 h后形态缩小、细胞核固缩,出现核碎裂形成凋亡小体;Western Blot结果显示400μmol/L的异紫堇定碱分别作用于人宫颈癌Siha细胞24、48、72 h后,其Bax蛋白表达增加,而Bcl-2蛋白表达逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加,Caspase-3蛋白表达逐渐增多。结论:异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖具有明显的抑制作用,其促使细胞发生凋亡行为可能与线粒体凋亡途径的蛋白有关。

RNA干扰技术沉默TRAF6对脂多糖诱导肾小管上皮细胞表型转化及炎症因子表达的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默脂多糖诱导人肾小管上皮细胞HK-2中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因表达后,对HK-2细胞表型转化及炎症因子表达的影响。方法应用阳离子脂质体法将设计合成的TRAF6小干扰RNA(siRNA)瞬时转染HK-2细胞。将HK-2细胞分为空白对照组、脂多糖组、阴性对照组和TRAF6 RNA干扰组。各组培养6、12、24 h后,倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝法检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定法检测细胞中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,实时荧光定量PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TRAF6 mRNA的含量,蛋白免疫印迹法检测TRAF6、α-SMA、p38、c-Jun氨基端激酶—丝裂原活化蛋白激酶(JNK MAPK)和核因子-κB抑制蛋白(NF-κB)的表达。结果 TRAF6 siRNA能显著降低脂多糖诱导HK-2细胞中TRAF6、α-SMA mRNA含量和蛋白的表达,TRAF6 siRNA转染后HK-2细胞的增殖能力减弱,细胞因子IL-6、TNF-α含量下降,p38、JNK MAPK和NF-κB蛋白的磷酸化水平均明显降低,均P<0.05。结论 TRAF6可通过MAPK-NF-κB信号通路介导脂多糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应和细胞表型转化。

改良法人胎肾小球系膜细胞原代培养

目的:原代培养和鉴定正常人胎肾小球系膜细胞(HMC),探索和总结最佳培养方法。方法:取4月胎龄的引产胎儿肾,分离皮质后,筛网滤过分离肾小球,Ⅳ型胶原酶消化,接种肾小球时分别采用传统方法(第1组)和预先浸湿瓶底并以胎牛血清中和胶原酶替代离心洗涤(第2组)两种方法,观察系膜细胞生长状态。并采用免疫细胞化学检测第3代肾小球系膜细胞的结蛋白(Desmin)、肌动蛋白(Actin)、波形蛋白(Vimentin)、细胞角蛋白(Cytokeratin)、Ⅷ因子(FactorⅧ)等相关抗原的表达,鉴定系膜细胞,并绘制其生长曲线,计算倍增时间。结果:两组肾小球贴壁率分别71%和90%,系膜细胞开始爬出时间为11d和7d,次代倍增时间为3.94d和3.52d,细胞生长状况有统计学差异。第2组传代的系膜细胞1d内贴壁,1周后长满。细胞呈三角、梭形、不规则形半透明,树枝状突起。免疫化学鉴定Desmin、Vimentin和Actin阳性,FactorⅧ和Cytoker-atin阴性。结论:两种肾小球接种方法对系膜细胞培养有不同影响,我们总结改进的培养方法肾小球贴壁率高,细胞存活和生长良好,并确定培养的细胞为人HMC。

宝肾方对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的保护作用

目目的探讨宝肾方对肾间质纤维化的治疗价值及机制。方法将40只雄性Wistar大鼠行单侧输尿管结扎术,分为模型对照组和宝肾方小剂量组、中剂量组、大剂量组。按不同药物剂量,每天灌胃2次。另取10只大鼠为假手术组。第7、21、28天收集大鼠血清检测肝功能、肾功能,收集24 h尿液检测尿蛋白。第28天收集血清检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),处死大鼠,取结扎侧肾脏,进行HE染色和Masson染色,观察肾小管间质纤维化程度。结果与假手术组相比,模型对照组大鼠血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白定量水平随着时间延长逐渐升高;第21、28天,不同剂量宝肾方组SCr、BUN和24 h尿蛋白定量均较模型对照组降低(P<0.05),宝肾方大剂量组SCr水平及尿蛋白定量低于宝肾方小剂量组(P<0.05)。与模型对照组比较,宝肾方组血清MDA含量降低,SOD活力升高。HE染色和Masson染色显示模型对照组及不同剂量宝肾方组肾间质纤维化相对面积较假手术组明显增加(P<0.05),不同剂量宝肾方组纤维化相对面积低于模型对照组(P<0.05)。结论宝肾方可明显减轻肾间质炎症细胞浸润及间质纤维化,延缓肾功能损害,宝肾方对单侧输尿管结扎大鼠肾小管间质纤维化有保护作用。

110名女护生的性别角色与共情能力分析

目的研究女护生性别角色与共情能力的关系。方法用中国大学生性别角色量表和中文版人际反应指针问卷,对110名女护生进行调查,采用卡方检验和多变量分析法进行数据分析。结果4种性别角色类型中,双性化型女护生的观点采择得分高于男性化型(P=0.001)和未分化型(P=0.000),各型属高情绪分享高认知调节型共情的女护生比例依次为双性化型8.2%,男性化型5.5%,女性化型7.3%和未分化型2.7%。结论双性化女护生的共情认知调节能力强于男性化和未分化型女护生。4种性别角色类型均有部分女护生能够提供有效的助人行为。

不同诱导透析模式对尿毒症患者心理状态及电解质的影响

目的 比较不同诱导透析模式对尿毒症患者心理状态及电解质的影响,探讨心理状态和电解质之间可能的关系。方法 选择兰州大学第二医院肾病中心2013~2014年44例新进入血液透析治疗的尿毒症患者,将其分为传统诱导透析组（conventional hemodialysis,CHD）、每日透析组（daily hemodialysis,DHD）各22例。观察2组患者诱导透析治疗期症状自评量表（symptom checklist 90,SCL-90）各项评分,以及治疗前1日和治疗后第7日时血清二氧化碳结合力（carbon dioxide-combining power,CO2-CP）、钠、钾、钙、磷水平。结果 DHD组的躯体化、强迫、人际关系敏感、抑郁、焦虑、恐怖、其他、总因子评分均低于CHD组（t=2.528,P=0.015;t=2.570,P=0.014;t=2.057,P=0.046;t=2.391,P=0.021;t=2.389,P=0.021;t=2.634,P=0.012;t=2.451,P=0.018;t=2.616,P=0.012）。第1日,两组患者CO2-CP、钠、钾、钙、磷水平相当;第7日,DHD组血钾低于CHD组（t=2.086,P=0.047）、血钙高于CHD组（t=-2.218,P=0.036）。结论 在诱导透析期,每日透析能更好地改善尿毒症患者的心理状态,控制好血清钾、钙水平可能会提高患者的心理健康状态。

TRAF6在UUO肾间质纤维化大鼠模型中的表达

目的研究TRAF6在肾间质纤维化中的表达。方法采用单侧输尿管梗阻(UUO)致肾间质纤维化模型,造模后分别于3、7、14 d时各处死8只大鼠。病理组织标本采用HE及Masson染色观察肾脏病理改变,反转录酶—聚合酶链锁反应法、蛋白免疫印迹检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)m RNA的定量表达,免疫组化法检测TRAF6和α-SMA蛋白的定位表达。结果与正常组比较,模型组TRAF6的表达在UUO术后7 d显著增加,于14 d表达最高(P<0.01),且主要表达于UUO术后14 d时的肾小管上皮细胞。结论 TRAF6在UUO大鼠肾间质纤维化发展过程中具有重要的作用,其活化可能参与了病变过程中炎症以及肾小管上皮细胞—肌成纤维细胞的转分化。

大黄酸对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞血小板反应蛋白1表达的影响

目的探讨大黄酸对转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）血小板反应蛋白1（thrombospondin-1，TSP1）表达的影响。方法体外培养细胞，观察TGF-β1（4ng／ml）诱导下低、中、高浓度的大黄酸（10μg／ml、20μg／ml和40μg／ml）对HK-2细胞TSP1 mRNA和蛋白表达的影响。Real Time PCR检测TSP1 mRNA表达，Western Blot检测TSPI蛋白表达。结果与空白对照组比较，TGF-β1（4ng／ml）明显上调HK-2细胞TSP1 mRNA和蛋白表达。与TGF-β1（4ng／ml）阳性对照组比较，中浓度和高浓度大黄酸明显抑制了TSP1 mRNA和蛋白表达。结论大黄酸能抑制TGF-β1诱导的HK-2TSP1 mRNA和蛋白表达。

腹膜透析相关性腹膜炎动物模型的构建

腹膜透析相关性腹膜炎是腹膜透析的严重并发症之一,其严重影响患者的生存率。动物模型是研究腹膜透析相关性腹膜炎不可或缺的工具,对于研究腹膜炎的病理机制以及治疗有重要意义。目前构建腹膜透析相关性腹膜炎模型所采用的动物主要是大鼠和小鼠,细菌、脂多糖以及真菌是常用的造模试剂,腹腔直接注射造模试剂法、通过腹膜透析导管造模法以及腹膜刮擦法是常用的造模方法。不同研究所选用的模型动物、造模试剂、方法根据实验目的各不相同。未来应更深入研究与人类腹膜透析相关性腹膜炎更接近的动物模型,以完全反映腹膜透析相关性腹膜炎,从而为腹膜炎的治疗提供基础。

miRNA与TSP-1mRNA在肾小管上皮细胞中的表达水平研究

目的糖尿病肾病是一种进展性的肾脏疾病,也是导致终末期肾病的主要病因。目前的研究表明,miRNA在糖尿病肾病的发生及进展过程中起重要的作用。本实验通过研究miR-18a、miR-19a、miR-194及TSP-1在高糖与TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞中的表达情况,进一步探索miRNA在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法用半定量RT-PCR监测人肾小管上皮细胞在低糖组(终浓度5 mmol/L)、高糖组(终浓度30 mmol/L)及高糖组+TGF-β1组不同时期TSP1mRNA、miR-18a、miR-19a及miR-194的表达水平。结果TSP1mRNA的表达水平随血糖浓度的升高及培养时间的延长逐渐升高,而miR-194成逐渐下降的趋势,但miR-18a和miR-19a的表达水平并未随血糖浓度改变有明显变化。通过TGF-β1处理的体外培养的肾小管上皮细胞48h,研究结果显示,与未经TGF-β1处理的高糖组相比,TGF-β1+高糖组能进一步升高肾小管上皮细胞TSP1mRNA的表达水平,使肾小管上皮细胞miR-194的表达进一步下降,并具有统计学差异。结论通过研究结果显示,TGF-β1对TSP1的表达水平起正性调节作用,对miR-194的表达水平呈负性调节作用,而针对TSP1是否为miR-194靶向调节基因,还需后续试验进一步验证。

慢性肾脏病与肺动脉高压相关性研究

目的:了解各期慢性肾脏病(CKD)相关生化指标的变化情况,分析慢性肾脏病与肺动脉高压的关系,为该病的防治提供科学依据。方法:选取我院2012年10月至2013年4月收住的慢性肾脏病患者118例作为观察对象,实验室检测CKD相关临床指标,分析各期CKD相关指标的变化及肺动脉高压与CKD的关系。结果:与CKD1比较,CKD2或CKD3或CKD4或CKD5组患者中肌酐、IGA、IGM、和磷升高(P<0.05),CKD2或CKD3或CKD4或CKD5组患者红细胞、血红蛋白、血清AST、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和钙等指标降低(P<0.05);肺动脉高压组患者的肺动脉压力、肌酐、磷和叶酸低于肺动脉压力正常组(P<0.05);肺动脉高压组患者红细胞、血小板、总胆固醇值高于肺动脉压正常组患者(P<0.05)。结论:慢性肾脏病患者合并肺动脉高压时部分血液指标与CKD严重程度有关。

关于犯罪遗留手印鉴定技术的分析

手印在刑事案件的侦查过程中有不可或缺的重要作用,它被视为最可靠的证据之一。犯罪遗留的手印可以提供最直接的线索,有助于缩小侦查范围,快速准确地侦破犯罪案件。本文基于此讲述了如何对犯罪遗留手印进行分析。

高共情能力女护生的性别特质分析

女护生中具有双性化特征的个体认知共情能力较为胜出，但同时也有不同比例其他物质女护生具有高共情能力。为深入了解与共情能力有关的性别角色特点，以阐释共情能力的性别差异，现进一步分析与高共情能力有关的性别特质。这里的高共情能力是指同时具备高情绪分享和高认知调节能力。情绪分享和认知调节是共情的两个过程，两者彼此独立又互相补充，共同保证了个体对社会生活的最大适应性。情绪分享过程可促成人与人之间的情感连接，

苦参碱对阿霉素诱导的肾小球硬化大鼠STAT3信号分子的影响

目的:动态观察苦参碱对阿霉素诱导的肾小球硬化大鼠STAT3分子及其抑制分子PIAS3变化的影响,探讨苦参碱在肾脏纤维化发病进程中的作用及其机制.方法:45只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组及试验组各15只,用单侧肾切除加1wk后尾静脉注射阿霉素(5mg/kg)的方法建立肾小球硬化大鼠模型,为模型组;只行手术不注射阿霉素为对照组;造模后即予苦参碱100mg/(kg·d)灌胃干预治疗为试验组.于2,4,6wk分批处死每组各5只大鼠,采用免疫组化检测肾脏STAT3、转化生长因子β1(TGF-β1)表达,实时荧光定量PCR技术观察STAT3,PIAS3mRNA表达.结果:第6wk时,模型组肾小球硬化指数(71.7±11.2)%高于对照组(17.6±2.5)%及试验组(44.9±8.9)%(P<0.01);模型组TGF-β1在肾皮质表达(2.196±0.394)%多于对照组(0.017±0.005)%及试验组(0.750±0.089)%(P<0.01),并呈逐渐升高趋势;模型组STAT3蛋白(19.58±2.66)%表达较对照组(7.64±1.25)%增高(P<0.01),试验组(14.90±1.66)%较模型组(19.58±2.66)%降低(P<0.01);模型组STAT3mRNA表达为5.06±0.26倍于对照组,高于试验组的3.49±0.39倍(P<0.01),而PIAS3mRNA呈相反趋势.结论:苦参碱有抑制肾小球硬化进展的作用,其作用机制可能为下调JAK/STAT通路信号分子STAT3及上调其抑制分子PIAS3的表达,降低TGF-β1的蛋白水平,从而延缓肾小球硬化进程.

Toll样受体9在嘌呤霉素氨基核苷导致足细胞损伤中的作用

目的:我们发现Toll样受体9(TLR9)在嘌呤霉素氨基核苷(PAN)处理的足细胞中上调。本研究试图确定TLR9是否参与PAN对足细胞的损伤作用。方法:(1)用PAN诱导体外培养的足细胞损伤模型,以定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western Blot检测足细胞TLR9及该通路其他组分的变化。同时,利用流式细胞术检查足细胞凋亡情况。用PAN诱导大鼠足细胞损伤,以qRT-PCR和免疫组化法检测大鼠肾小球中TLR9表达变化。(2)将TLR9干扰RNA(siRNA)表达质粒和对照质粒分别转染足细胞,用Western Blot检测比较核因子κB(NF-κB)p65和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化、qRT-PCR比较白细胞介素12(IL-12)的mRNA变化,流式细胞仪比较足细胞凋亡情况。结果:(1)与对照组相比,经PAN刺激的足细胞,其TLR9、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、IL-12的mRNA水平明显上调,磷酸化p65和磷酸化p38显著增加,细胞凋亡增加。PAN大鼠模型的肾小球中TLR9 mRNA表达上调,免疫组化显示TLR9蛋白显著增加。(2)足细胞转染TLR9干扰质粒后,TLR9的mRNA和蛋白表达水平降低;而经PAN处理后,该细胞与转染对照siRNA的细胞相比,其磷酸化p65和磷酸化p38的水平降低,IL-12 mRNA表达降低,足细胞凋亡减少。结论:TLR9信号通路参与了PAN诱导的足细胞损伤过程,其机制可能是促进炎症因子产生及p38 MAPK依赖的细胞凋亡。

非透析慢性肾脏病患者的多学科医疗管理效果探讨

目的调查多学科医疗管理模式(multidisciplinary care,MDC)对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)非透析人群管理效果。方法采取前瞻性队列研究设计,选取兰州大学第二医院肾内科规律随访的CKD非透析患者,根据患者意愿分为管理组和对照组。管理组通过MDC管理,对照组采用传统模式管理,收集实验室指标,以进入终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD)、肌酐较基线水平升高超过50%作为本次研究的终点及次要终点事件完成统计分析。结果781例患者完成研究,其中管理组373例(92%),对照组共408例(81%)。2年后,管理组估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)下降更缓慢(t=-2.606,P=0.009)。血压(<130/80mmHg,χ^(2)=24.408,P<0.001)、血钙(χ^(2)=4.630,P=0.031)达标率更高,血红蛋白≥110g/L比例更高(χ^(2)=3.576,P=0.048)。管理组ESRD的发生率降低(HR=0.448,95%CI 0.306~0.656,P<0.001),进行亚组分析,男性、非糖尿病CKD人群、CKD1~3a期人群ESRD发生风险更低(HR值分别为0.314,0.649,0.015;95%CI分别为0.188~0.524,0.414~1.015,0.001~0.431;P值分别为0.018,0.024,0.031)。结论MDC可有效延缓CKD进展、提高临床指标达标率。