天麻多糖对皮质酮损伤PC12细胞保护机制研究

目的:研究天麻多糖(polysaccharides from Gastrodia elata,GEP)对皮质酮(corticosterone,Cort)诱导的PC12细胞损伤起保护作用的分子机制。方法:GEP各剂量(0、250、500、1000μg/mL)与Cort 200μmol/L共孵PC12细胞48 h,Fura-2/AM荧光标记法测定细胞内Ca2+浓度的变化;Western blotting法检测细胞内BCL-2、BAX及Caspase-3蛋白的表达。结果:200μmol/L Cort处理PC12细胞后,细胞存活率较正常对照组显著降低,胞内[Ca2+]i升高,BCL-2蛋白表达量降低,BAX蛋白表达量升高;GEP各剂量均能明显改善细胞形态,并呈浓度依赖性使细胞内[Ca2+]i降低,BCL-2蛋白表达量提高,BAX蛋白表达量减少,Caspase-3蛋白表达受到抑制。结论:GEP对Cort损伤的PC12细胞的保护作用机制可能与抑制细胞内Ca2+浓度超载,调节BCL-2/BAX比值,及抑制Caspase通路有关。

天麻-川芎药对对大鼠尿液代谢的影响

目的:基于代谢组学的方法研究天麻-川芎药对对大鼠尿液中内源性代谢产物的影响。方法:将药材提取物分为正常对照组、天麻组、川芎组、天麻川芎组A(天麻:川芎比为1:4)、天麻川芎组B(天麻:川芎比为4:1)等5组,每组中药材均用10倍量70%的乙醇提取,用HPLC法测定提取物中天麻苷和川芎嗪的含量来确定给药剂量。每组按11.67 g·kg^(-1)的剂量对大鼠连续给药,收集尿样,通过液质联用方法对尿液中内源性代谢物进行全扫描分析,采用MATLAB和SIMCA-P两种数据处理软件对大鼠尿液内源性代谢产物进行主成分分析(PCA)。结果:连续灌胃29 d后,各给药组与正常对照组相比,大鼠尿液内源性代谢产物均发生显著变化。结论:天麻川芎提取物显著影响大鼠尿样中与药理作用相关内源性物质的代谢,为深入研究天麻川芎药对提供依据。

大孔吸附树脂纯化槟榔中总鞣质的研究

目的以槟榔中的总鞣质为纯化对象,比较8种大孔树脂的静态吸附过程,筛选出适合吸附槟榔总鞣质的树脂,并探索总鞣质在所选树脂上的吸附和解吸工艺条件。方法采用磷钼钨酸-干酪素比色法测定总鞣质的含量,计算树脂的吸附量、吸附率和解吸率,利用单因素试验研究大孔吸附树脂分离纯化槟榔中总鞣质的最佳工艺条件。结果选择HPD-826大孔树脂,其对总鞣质的饱和吸附量为46.65 mg/g;HPD-826树脂对槟榔中总鞣质的最佳纯化工艺为:上柱液中总鞣质质量浓度为4.30 mg/mL,上样液体积3.5 BV,上样流速2 BV/h,洗脱液乙醇体积分数70%,洗脱液体积3 BV。结论 HPD-826型大孔树脂表现出较好的吸附性能与解吸效果,能很好地富集纯化槟榔中的总鞣质。

石榴皮鞣质改善大鼠肾纤维化作用研究

目的研究石榴皮鞣质对肾纤维化大鼠肾功能的改善作用。方法将SD大鼠随机分为5组,假手术组,模型组,缬沙坦组,石榴皮鞣质高剂量和低剂量(60、20 mg/kg,按鞣质计)组。除了假手术组,其余各组采用左侧输尿管结扎方法制备肾纤维化模型,假手术组的输尿管不结扎和剪断。术后当天开始ig给药,分别于术后1、2、3周检测各组大鼠尿液中的24 h尿蛋白、Ca2+和P3+浓度,检测血清中的血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN),并进行肾组织HE、Masson染色,从形态学角度考察石榴皮鞣质对肾纤维化大鼠各项指标的影响。结果 HE、Masson染色结果显示,模型组大鼠肾组织受到损伤,左侧肾脏肾纤维化,造模成功;生理指标检测结果显示,左侧输尿管结扎后大鼠尿液的24 h尿蛋白,血清Scr、BUN偏离正常水平,Ca2+浓度上调,P3+浓度下调。石榴皮鞣质干预后,各项指标均具有恢复正常水平的趋势,石榴皮鞣质对大鼠肾纤维化具有改善作用。结论石榴皮鞣质具有改善大鼠肾纤维化的作用,并能够调节肾纤维化大鼠机体钙磷代谢的失常。

大孔吸附树脂富集纯化石榴皮总鞣质的工艺条件优选

目的:优选富集纯化石榴皮中总鞣质的大孔吸附树脂,确定工艺条件及参数。方法:采用10倍量70%丙酮水溶液50℃回流提取石榴皮中鞣质,并采用磷钼钨酸-干酪素比色法测定提取液中的总鞣质含量;通过静态与动态吸附和解吸性能的研究,对比分析了HP-20、D-101、AB-8、HPD-450、HPD-400、NKA-9、HPD-500、HPD-826八种大孔吸附树脂对石榴皮中总鞣质的富集纯化效果,优化了HPD-400型树脂富集纯化石榴皮中总鞣质的工艺条件。结果:8种大孔吸附树脂中,HPD-400型树脂对石榴皮中总鞣质有较好的吸附分离性能,其工艺条件为上样液质量浓度4.35 mg.mL-1,吸附流速为2 BV.h-1,上柱量为5 BV(BV,树脂体积数),以70%的乙醇洗脱,用量为2 BV,解吸率为93.94%,采用上述方法纯化后,产品中鞣质的纯度为60.49%。结论:HPD-400型树脂对石榴皮中总鞣质纯化的综合性能较好,工艺的重复性和稳定性良好,为后续研究提供了基础。

石榴皮鞣质对肾纤维化大鼠内源性代谢物的影响

目的:运用代谢组学方法研究石榴皮鞣质对肾纤维化大鼠内源性代谢物的影响,寻找潜在的生物标志物并分析代谢途径,为肾纤维化的治疗和石榴皮鞣质的利用提供相关理论依据。方法:SD大鼠随机分为5组,假手术组,模型组,缬沙坦组,石榴皮鞣质高剂量组、低剂量组。除假手术组,其余各组采用左侧输尿管结扎方法构建肾纤维化模型,假手术组的输尿管不结扎和剪断。收集各组大鼠术后3周尿样,经预处理后,进行液相色谱-高分辨质谱分析,获得总离子流图。对LC-MS所得数据进行预处理,导入SIMCA-P软件进行主成分分析(PCA)和正交信号校正偏最小二乘法分析(OPLS),根据获得的得分图、载荷图的分析结果,寻找潜在的生物标记物。结果:代谢组学分析发现造模后第3周各组大鼠尿液有明显的聚类现象,通过对重要变量的分析鉴定,筛选出13个潜在的生物标记物。结论:石榴皮鞣质干预下的肾纤维化大鼠内源性代谢物聚类性趋近正常水平,代谢组学分析法寻找潜在生物标志物可行且有效。