应用噬菌体展示随机12肽库筛选诺如病毒抗原模拟表位

目的:利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库筛选诺如病毒(NoV)的抗原模拟表位。方法:包被与GⅡ.4、GⅡ.6、GⅡ.17型NoV具有高特异性及中和能力较强的单链可变片段抗体(scFv),用Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选。ELISA鉴定淘选所得噬菌体与scFv的结合活性及其与NoV P蛋白的竞争作用;阳性克隆测序后进行生物信息学分析,合成多肽鉴定其抗原性。结果:发现1段与GⅡ.6 VP1区同源性较高的氨基酸序列“MG-D-W”,综合分析提示其可能为GⅡ.6 NoV的抗原模拟表位,且合成的包含“MG-D-W”的多肽可竞争抑制P蛋白与人类组织血型抗原(HBGAs)受体的结合。结论:“MG-DW”是与NoV单链抗体高亲和力的肽段,可能模拟了GⅡ.6 NoV与scFv结合的抗原表位。

基于噬菌体抗体库技术制备诺如病毒全人源单链抗体

目的基于噬菌体抗体库技术制备抗诺如病毒(norovirus,NoV)全人源单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)。方法从GⅡ.6 NoV感染者恢复期外周血中分离得到外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),提取总RNA,RT-PCR法分别扩增scFv的重链和轻链可变区基因片段,通过Overlap PCR技术将两者随机拼接成scFv基因片段。将scFv基因克隆至噬菌体质粒pCANTAB-5E,转化至感受态E.coli TG1,获得全人源scFv噬菌体抗体库。以GⅡ.6 P蛋白为固相抗原对抗体库进行4轮生物筛选,以选取的特异性抗NoV阳性噬菌体为模板,扩增scFv基因后,进行原核表达及纯化,并鉴定其特异性及中和性。结果人源噬菌体scFv抗体库库容约为8.8×106PFU/mL。4轮生物筛选共获得10株scFv,均能与GⅡ.4、GⅡ.6和GⅡ.17 NoV P蛋白发生特异性结合,且对3株NoV毒株均有不同程度的阻断作用。结论利用GⅡ.6 NoV感染者恢复期的PBMCs构建了全人源scFv噬菌体抗体库,筛选出的10株抗NoV scFv对NoV具有一定的中和作用。